| 论文创新点 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 中英文缩略对照表 | 第11-19页 |
| 第一章 微小RNA概述 | 第19-27页 |
| 1.1 miRNA的转录、加工及特性 | 第20-21页 |
| 1.2 miRNA的作用机制 | 第21-23页 |
| 1.3 miRNA的生理功能 | 第23-24页 |
| 1.4 miRNA的功能研究手段 | 第24-25页 |
| 1.5 总结 | 第25-27页 |
| 第二章 miRNA在胚胎发育和肿瘤发生过程中的相关研究进展 | 第27-34页 |
| 2.1 miRNA在胚胎发育中的研究进展 | 第28-30页 |
| 2.1.1 阻断miRNA对早期胚胎发育的影响 | 第28-29页 |
| 2.1.2 miRNA对晚期胚胎发育的影响 | 第29页 |
| 2.1.3 胚胎干细胞中的miRNA及功能研究进展 | 第29-30页 |
| 2.2 miRNA在肿瘤发生过程中的研究进展 | 第30-31页 |
| 2.2.1 miRNA的异常表达与肿瘤发生 | 第30-31页 |
| 2.2.2 miRNA在肿瘤诊断和治疗中的应用 | 第31页 |
| 2.3 胚胎发育与肿瘤发生相关性的纽带-miRNA | 第31-34页 |
| 第三章 miRNA在造血分化及白血病中的研究进展 | 第34-45页 |
| 3.1 miRNA在正常造血过程中研究进展 | 第35-39页 |
| 3.1.1 miRNA与粒系造血分化 | 第35-37页 |
| 3.1.2 miRNA与单核/巨噬系造血分化 | 第37-38页 |
| 3.1.3 miRNA与红系和巨核系造血分化 | 第38页 |
| 3.1.4 miRNA与淋巴系造血分化 | 第38-39页 |
| 3.2 miRNA与急性髓系白血病 | 第39-41页 |
| 3.3 miRNA与慢性髓系白血病 | 第41页 |
| 3.4 miRNA与淋巴细胞白血病 | 第41-42页 |
| 3.5 白血病的诊断与治疗的新靶标-miRNA | 第42-43页 |
| 3.6 总结和展望 | 第43-45页 |
| 第四章 4-6周龄人胚miRNA表达谱分析 | 第45-61页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 实验材料 | 第45-46页 |
| 4.2.1 胚胎样本收集 | 第45-46页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第46页 |
| 4.2.3 仪器和设备 | 第46页 |
| 4.3 实验方法 | 第46-50页 |
| 4.3.1 胚胎总RNA的提取 | 第46-47页 |
| 4.3.2 总RNA的定量与质量检测 | 第47页 |
| 4.3.3 miRNA芯片检测与数据分析 | 第47-48页 |
| 4.3.4 miRNA芯片数据验证 | 第48-50页 |
| 4.4 实验结果 | 第50-59页 |
| 4.4.1 人胚4-6周龄的miRNA表达概况 | 第50-53页 |
| 4.4.2 miRNA芯片数据验证 | 第53-54页 |
| 4.4.3 人胚胎发育相关miRNA表达聚类分析 | 第54-56页 |
| 4.4.4 发育同期小鼠与人类胚胎miRNA表达对比分析 | 第56-57页 |
| 4.4.5 人胚胎发育相关miRNA的保守性分析 | 第57-59页 |
| 4.5 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 组织芯片分析人胚胎发育相关miRNA的表达 | 第61-73页 |
| 5.1 引言 | 第61页 |
| 5.2 实验材料及试剂 | 第61-63页 |
| 5.2.1 实验材料和试剂盒 | 第61-62页 |
| 5.2.2 主要试剂及配制 | 第62-63页 |
| 5.3 实验方法 | 第63-65页 |
| 5.3.1 miRNA的组织芯片原位杂交 | 第63-65页 |
| 5.3.2 组织芯片数据扫描、读取与分析 | 第65页 |
| 5.3.3 统计分析 | 第65页 |
| 5.4 实验结果 | 第65-71页 |
| 5.4.1 miR-638在人各种正常及癌症组织中的表达情况 | 第66-69页 |
| 5.4.2 miR-720和miR-1280在人各种正常及癌症中的表达 | 第69-71页 |
| 5.5 讨论 | 第71-73页 |
| 第六章 miR-638参与髓系造血和急性髓系白血病的发生 | 第73-89页 |
| 6.1 引言 | 第73-74页 |
| 6.2 实验材料及仪器 | 第74-76页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第74-75页 |
| 6.2.2 主要试剂的配制 | 第75-76页 |
| 6.2.3 仪器设备 | 第76页 |
| 6.3 实验方法 | 第76-83页 |
| 6.3.1 细胞培养 | 第76-77页 |
| 6.3.2 细胞总RNA提取 | 第77页 |
| 6.3.3 miRNA实时荧光定量PCR | 第77-80页 |
| 6.3.4 外周血和脐带血中分离单个核细胞 | 第80页 |
| 6.3.5 从单个核细胞中分离CD34+细胞 | 第80-81页 |
| 6.3.6 流式细胞术分析细胞表面分子标志物表达和分选谱系特异性细胞 | 第81-82页 |
| 6.3.7 髓系白血病细胞体外诱导分化 | 第82-83页 |
| 6.3.8 瑞氏-吉姆萨染色 | 第83页 |
| 6.4 实验结果 | 第83-87页 |
| 6.4.1 miR-638表达升高具有髓系特异性 | 第83-84页 |
| 6.4.2 miR-638在白血病细胞中异常低表达 | 第84-85页 |
| 6.4.3 miR-638在白血病细胞诱导终末分化中的表达升高 | 第85-87页 |
| 6.5 讨论 | 第87-89页 |
| 第七章 miR-638促进PMA和ATRA诱导的白血病细胞系髓系分化 | 第89-104页 |
| 7.1 引言 | 第89页 |
| 7.2 实验材料及仪器 | 第89-90页 |
| 7.2.1 实验细胞系 | 第89页 |
| 7.2.2 合成寡核苷酸 | 第89-90页 |
| 7.2.3 其他试剂 | 第90页 |
| 7.2.4 实验仪器设备 | 第90页 |
| 7.3 实验方法 | 第90-95页 |
| 7.3.1 miRNA(或siRNA)转染悬浮细胞 | 第90-91页 |
| 7.3.2 DNA和RNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第91-92页 |
| 7.3.3 半定量PCR | 第92-93页 |
| 7.3.4 miRNA和mRNA的实时荧光定量PCR | 第93-95页 |
| 7.3.5 其他实验方法 | 第95页 |
| 7.4 实验结果 | 第95-103页 |
| 7.4.1 通过转染合成寡核苷酸调节细胞内的miR-638表达水平 | 第95-96页 |
| 7.4.2 miR-638促进PMA和ATRA诱导的髓系分化 | 第96-103页 |
| 7.5 讨论 | 第103-104页 |
| 第八章 miR-638抑制HL-60细胞增殖及克隆形成能力 | 第104-120页 |
| 8.1 引言 | 第104页 |
| 8.2 实验材料及仪器 | 第104-107页 |
| 8.2.1 实验材料 | 第104-105页 |
| 8.2.2 克隆及病毒包装载体 | 第105页 |
| 8.2.3 试剂(盒)及酶 | 第105-106页 |
| 8.2.4 主要试剂及配制 | 第106页 |
| 8.2.5 实验仪器、设备 | 第106-107页 |
| 8.2.6 生物学软件及数据库 | 第107页 |
| 8.3 实验方法 | 第107-116页 |
| 8.3.1 人外周血基因组DNA提取和检测 | 第107-108页 |
| 8.3.2 感受态细胞的制备 | 第108页 |
| 8.3.3 载体的构建 | 第108-111页 |
| 8.3.4 高纯质粒的提取 | 第111-112页 |
| 8.3.5 逆转录病毒包装、病毒滴度的检测及细胞感染 | 第112-114页 |
| 8.3.6 稳转细胞的筛选 | 第114页 |
| 8.3.7 细胞周期分析 | 第114-115页 |
| 8.3.8 悬浮细胞增殖实验 | 第115页 |
| 8.3.9 软琼脂克隆形成实验 | 第115-116页 |
| 8.3.10 其他实验方法 | 第116页 |
| 8.4 实验结果 | 第116-119页 |
| 8.4.1 过表达miR-638对HL-60细胞周期和增殖的影响 | 第116-117页 |
| 8.4.2 稳转细胞周期、增殖分析 | 第117-118页 |
| 8.4.3 miR-638抑制HL-60细胞在软琼脂中的克隆形成能力 | 第118-119页 |
| 8.5 讨论 | 第119-120页 |
| 第九章 miR-638通过抑制CDK2促进PMA和ATRA诱导的髓系分化 | 第120-139页 |
| 9.1 引言 | 第120页 |
| 9.2 实验材料及仪器 | 第120-124页 |
| 9.2.1 实验材料 | 第120-122页 |
| 9.2.2 试剂盒、酶和抗体 | 第122页 |
| 9.2.3 主要试剂及配制 | 第122-124页 |
| 9.2.4 实验仪器、设备 | 第124页 |
| 9.2.5 生物学软件及数据库 | 第124页 |
| 9.3 实验方法 | 第124-131页 |
| 9.3.1 荧光素酶报告载体的构建 | 第124-126页 |
| 9.3.2 哺乳动物细胞miRNA和质粒共转染 | 第126-127页 |
| 9.3.3 双荧光素酶报告实验 | 第127-128页 |
| 9.3.4 蛋白质免疫印迹 | 第128-130页 |
| 9.3.5 逆转录病毒介导的稳转细胞构建 | 第130页 |
| 9.3.6 其他实验方法 | 第130-131页 |
| 9.4 实验结果 | 第131-137页 |
| 9.4.1 CDK2是miR-638的调控靶标之一 | 第131-133页 |
| 9.4.2 抑制CDK2的表达促进诱导剂诱导的髓系分化 | 第133-136页 |
| 9.4.3 CDK2消除miR-638对HL-60克隆形成能力的抑制作用 | 第136-137页 |
| 9.5 讨论 | 第137-139页 |
| 第十章 miR-638/CDK2促进原代AML病人白血病细胞体外诱导的髓系分化 | 第139-146页 |
| 10.1 引言 | 第139页 |
| 10.2 实验材料及仪器 | 第139-140页 |
| 10.2.1 合成寡核苷酸及转染试剂 | 第139-140页 |
| 10.2.2 AML病人临床标本 | 第140页 |
| 10.2.3 其他实验材料和试剂 | 第140页 |
| 10.2.4 实验仪器、设备 | 第140页 |
| 10.3 实验方法 | 第140-141页 |
| 10.3.1 从AML病人来源的临床标本中分离原代细胞 | 第140页 |
| 10.3.2 AML原代细胞的转染及诱导分化 | 第140-141页 |
| 10.3.3 流式细胞术检测表面标志物表达 | 第141页 |
| 10.3.4 数据分析与统计 | 第141页 |
| 10.4 实验结果 | 第141-145页 |
| 10.4.1 CDK2蛋白水平在AML病人中表达情况分析 | 第141-142页 |
| 10.4.2 miR-638/CDK2在诱导剂作用下对AML细胞髓系分化的影响 | 第142-145页 |
| 10.5 讨论 | 第145-146页 |
| 研究展望 | 第146-148页 |
| 参考文献 | 第148-159页 |
| 博士期间发表和待发表的论文 | 第159-160页 |
| 致谢 | 第160-161页 |
