| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第17-28页 |
| 1.1 基因损伤的种类 | 第17-19页 |
| 1.1.1 物理损伤 | 第17页 |
| 1.1.2 化学损伤 | 第17页 |
| 1.1.3 自发性损伤 | 第17-19页 |
| 1.2 体内基因损伤的调控机制 | 第19-20页 |
| 1.2.1 蛋白传感器 | 第19页 |
| 1.2.2 转导蛋白 | 第19-20页 |
| 1.2.3 效应蛋白 | 第20页 |
| 1.3 基因损伤的检测方法 | 第20-22页 |
| 1.3.1 单细胞凝胶电泳 | 第20-21页 |
| 1.3.2 荧光原位杂交法 | 第21页 |
| 1.3.3 DNA片段标记 | 第21-22页 |
| 1.4 碱基切除修复技术 | 第22-23页 |
| 1.4.1 碱基切除修复技术的简介 | 第22-23页 |
| 1.4.2 碱基切除修复技术的研究现状 | 第23页 |
| 1.5 COLD-PCR | 第23-27页 |
| 1.5.1 COLD-PCR的原理 | 第24页 |
| 1.5.2 COLD-PCR模式 | 第24-26页 |
| 1.5.3 COLD-PCR研究进展 | 第26-27页 |
| 1.6 论文主要研究内容 | 第27-28页 |
| 第二章 DNA损伤的检测 | 第28-54页 |
| 2.1 实验研究目的和意义 | 第28页 |
| 2.2 实验材料及仪器 | 第28-30页 |
| 2.2.1 实验主要试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.2 实验主要仪器 | 第29页 |
| 2.2.3 实验所用寡核苷酸序列 | 第29-30页 |
| 2.3 定点切除修复 | 第30-36页 |
| 2.3.1 DNA寡核苷酸链溶液的配制 | 第30-31页 |
| 2.3.2 定点切除修复 | 第31-33页 |
| 2.3.3 熔解曲线的监测 | 第33-34页 |
| 2.3.4 核酸探针杂交实验 | 第34-36页 |
| 2.4 特异性杂交的热力学变化 | 第36-37页 |
| 2.5 DNA损伤的检测 | 第37-38页 |
| 2.5.1 COLD-PCR扩增 | 第37-38页 |
| 2.5.2 Tc值的选择 | 第38页 |
| 2.6 反应模式的选择和优化 | 第38-39页 |
| 2.6.1 COLD-PCR反应模式的选择 | 第38-39页 |
| 2.6.2 T4 DNA连接酶反应时间的优化 | 第39页 |
| 2.7 实验结果与讨论 | 第39-52页 |
| 2.7.1 核酸探针杂交实验结果 | 第39-40页 |
| 2.7.2 熔解曲线监测结果 | 第40-43页 |
| 2.7.3 不同Tc值对检测效果的影响 | 第43-46页 |
| 2.7.4 不同特异性杂交的吉布斯自由能差 | 第46-48页 |
| 2.7.5 COLD-PCR扩增实验结果 | 第48-49页 |
| 2.7.6 不同个数的碱基损伤的检测 | 第49-50页 |
| 2.7.7 两种COLD-PCR模式结果的比较结果 | 第50-51页 |
| 2.7.8 T4 DNA连接酶反应时间优化结果 | 第51-52页 |
| 2.8 本章小结 | 第52-54页 |
| 第三章 DNA损伤检测灵敏度的研究 | 第54-65页 |
| 3.1 实验研究目的和意义 | 第54页 |
| 3.2 实验材料及仪器 | 第54-55页 |
| 3.2.1 实验主要试剂 | 第54页 |
| 3.2.2 实验主要仪器 | 第54-55页 |
| 3.2.3 实验所用寡核苷酸序列 | 第55页 |
| 3.3 DNA损伤的低丰度检测 | 第55-57页 |
| 3.3.1 C>U损伤的低丰度检测 | 第55-56页 |
| 3.3.2 G>8-oxoG氧化损伤的低丰度检测 | 第56-57页 |
| 3.4 修复酶活性的检测 | 第57-58页 |
| 3.4.1 UDG活性的检测 | 第57-58页 |
| 3.4.2 hOGG1活性的检测 | 第58页 |
| 3.5 实验结果与讨论 | 第58-64页 |
| 3.5.1 DNA损伤低丰度检测结果 | 第58-61页 |
| 3.5.2 修复酶活性检测的结果 | 第61-64页 |
| 3.6 本章小结 | 第64-65页 |
| 第四章 活性氧引起的DNA氧化损伤的检测 | 第65-80页 |
| 4.1 实验研究的目的及意义 | 第65页 |
| 4.2 实验材料及仪器 | 第65-67页 |
| 4.2.1 实验主要仪器 | 第65-66页 |
| 4.2.2 实验主要试剂 | 第66页 |
| 4.2.3 实验所用的DNA序列 | 第66-67页 |
| 4.3 H_2O_2引起的DNA寡核苷酸链的损伤 | 第67-68页 |
| 4.3.1 H_2O_2处理DNA链 | 第67页 |
| 4.3.2 碱基切除修复 | 第67-68页 |
| 4.3.3 COLD-PCR对基因损伤的检测 | 第68页 |
| 4.4 细胞的准备与培养 | 第68-70页 |
| 4.4.1 细胞复苏 | 第69页 |
| 4.4.2 细胞传代 | 第69页 |
| 4.4.3 细胞换液 | 第69页 |
| 4.4.4 细胞冻存 | 第69-70页 |
| 4.5 H_2O_2引起的细胞中的氧化损伤 | 第70-72页 |
| 4.5.1 H_2O_2处理细胞 | 第70页 |
| 4.5.2 细胞中基因组DNA的提取 | 第70-71页 |
| 4.5.3 碱基切除修复 | 第71-72页 |
| 4.5.4 COLD-PCR的检测 | 第72页 |
| 4.6 其他ROS物种引起DNA寡核苷酸连的氧化损伤 | 第72-75页 |
| 4.6.1 ~1O_2 | 第73页 |
| 4.6.2 HClO | 第73页 |
| 4.6.3 OH | 第73页 |
| 4.6.4 纳米材料光热 | 第73-74页 |
| 4.6.5 碱基切除修复和COLD-PCR的检测 | 第74-75页 |
| 4.7 实验结果与讨论 | 第75-78页 |
| 4.7.1 H_2O_2引起的DNA的氧化损伤检测结果 | 第75-76页 |
| 4.7.2 H_2O_2对细胞氧化损伤的检测结果 | 第76-77页 |
| 4.7.3 其他ROS物种对DNA氧化损伤的检测结果 | 第77-78页 |
| 4.8 本章小结 | 第78-80页 |
| 第五章 结论与展望 | 第80-83页 |
| 5.1 结论 | 第80页 |
| 5.2 展望 | 第80-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第89-91页 |
| 作者和导师简介 | 第91-92页 |
| 附件 | 第92-93页 |
