| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 一 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 棉花黄萎病 | 第10-12页 |
| 1.1.1 概述 | 第10页 |
| 1.1.2 大丽轮枝菌及其致病机理 | 第10-11页 |
| 1.1.3 棉花抗黄萎病研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 植物抗病的分子机制 | 第12-17页 |
| 1.2.1 PAMPs及其引发的免疫反应 | 第12-13页 |
| 1.2.2 病原菌对PTI的抑制 | 第13-15页 |
| 1.2.3 效应因子激发的植物防卫反应(ETI)及抗性蛋白 | 第15-16页 |
| 1.2.4 病原菌对ETI的适应 | 第16-17页 |
| 1.2.5 植物的诱导系统性抗性 | 第17页 |
| 1.3 PR10蛋白 | 第17-19页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 二 材料与方法 | 第20-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第20页 |
| 2.1.3 常用分子生物学试剂 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-28页 |
| 2.2.1 大丽轮枝菌与接种试验 | 第20-21页 |
| 2.2.2 棉花幼苗的胁迫和激素处理 | 第21页 |
| 2.2.3 棉花总RNA的提取 | 第21页 |
| 2.2.4 处理样品的转录水平分析 | 第21-22页 |
| 2.2.5 对预选SSH文库中的候选基因片段进行Northern blot分析 | 第22-23页 |
| 2.2.6 转烟草类PR10-pPZP111载体的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.7 pET28a(+)-PR10-like融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备 | 第24页 |
| 2.2.8 PR10-like-GFP的亚细胞定位 | 第24-25页 |
| 2.2.9 农杆菌介导的烟草转化 | 第25-26页 |
| 2.2.10 类PR10蛋白RNase活性的检测 | 第26页 |
| 2.2.11 高表达转基因烟草中其它抗性基因的分析 | 第26-27页 |
| 2.2.12 本实验所用到的引物 | 第27-28页 |
| 三 结果与分析 | 第28-42页 |
| 3.1 棉花处理样品总RNA的提取 | 第28页 |
| 3.2 棉花受大丽轮枝菌侵染后候选基因转录水平的分析 | 第28-29页 |
| 3.3 棉花受大丽轮枝菌侵染后178号克隆(类PR10基因)特异性应答分析 | 第29-31页 |
| 3.4 类PR10基因的分离 | 第31页 |
| 3.5 类PR10基因的组织特异性分析 | 第31-32页 |
| 3.6 类PR10基因对激素类信号分子及干旱胁迫的特异性应答 | 第32-33页 |
| 3.7 类PR10蛋白的原核表达和体外活性检测 | 第33-36页 |
| 3.7.1 原核表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.7.2 类PR10融合蛋白的表达和纯化 | 第34-35页 |
| 3.7.3 类PR10蛋白RNase活性的检测 | 第35-36页 |
| 3.8 PR1O-like-GFP融合蛋白的亚细胞定位 | 第36-38页 |
| 3.8.1 PR10-like-PZP-GFP载体的构建 | 第36页 |
| 3.8.2 瞬时表达PR10-like-GFP融合蛋白 | 第36-37页 |
| 3.8.3 稳定表达PR10-like-GFP融合蛋白 | 第37-38页 |
| 3.9 转类PR10基因植物的抗病性分析 | 第38-42页 |
| 3.9.1 转基因载体PR-10-like-pzp的构建 | 第38页 |
| 3.9.2 农杆菌介导的类PR10基因转化烟草 | 第38-39页 |
| 3.9.3 类PR10转基因烟草中抗病抗病相关标记基因的表达 | 第39-40页 |
| 3.9.4 类PR10转基因烟草侵染实验 | 第40-42页 |
| 四 讨论 | 第42-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
