蜡蚧轮枝菌“Lecanicillium lecanii（Zimmerman）Viegas”苯菌灵抗性基因转化的研究
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| ·蜡蚧轮枝菌的研究概况 | 第13页 |
| ·农杆菌介导的真菌遗传转化 | 第13-18页 |
| ·概况 | 第13-16页 |
| ·农杆菌载体系统分类 | 第16-17页 |
| ·农杆菌转化特点 | 第17页 |
| ·影响农杆菌转化的因素 | 第17-18页 |
| ·真菌的其它转化方法 | 第18-20页 |
| ·PEG 介导的转化系统 | 第18页 |
| ·电击转化系统 | 第18-19页 |
| ·基因枪法转化系统 | 第19页 |
| ·限制性内切酶介导的转化系统 | 第19-20页 |
| ·真菌苯菌灵抗性研究进展 | 第20页 |
| ·本研究目的意义 | 第20-21页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第21-22页 |
| ·研究内容 | 第21页 |
| ·技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 苯菌灵抗性菌株筛选及其抗性基因克隆 | 第22-39页 |
| ·材料与方法 | 第22-28页 |
| ·材料与仪器 | 第22-23页 |
| ·菌株采集 | 第23页 |
| ·菌株分离与纯化 | 第23页 |
| ·菌株形态鉴定 | 第23页 |
| ·菌株分子鉴定 | 第23-25页 |
| ·菌株敏感性测定 | 第25页 |
| ·苯菌灵抗性基因扩增 | 第25-27页 |
| ·数据分析 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-37页 |
| ·菌株鉴定 | 第28-31页 |
| ·菌株的敏感性测定 | 第31-33页 |
| ·菌株的总RNA 提取 | 第33-34页 |
| ·苯菌灵抗性基因电泳分析 | 第34页 |
| ·苯菌灵抗性基因序列分析 | 第34-37页 |
| ·结论与讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 农杆菌表达载体构建 | 第39-49页 |
| ·材料与方法 | 第39-45页 |
| ·材料与仪器 | 第39-40页 |
| ·载体构建技术路线 | 第40页 |
| ·真菌启动子TrpC 的扩增 | 第40-41页 |
| ·TrpC-BenA 连接片段TB 扩增 | 第41-42页 |
| ·TB 片段与PGM-T 质粒连接 | 第42-43页 |
| ·TB 片段与pBHt2 质粒连接 | 第43-44页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第44-45页 |
| ·pBHt2 质粒转化感受态细胞 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-48页 |
| ·真菌启动子TrpC 扩增 | 第45-46页 |
| ·TB 片段的扩增 | 第46页 |
| ·TB 片段与PGM-T 质粒连接 | 第46-47页 |
| ·质粒双酶切 | 第47页 |
| ·TB 片段与pBHt2 质粒连接 | 第47-48页 |
| ·农杆菌转化子PCR 验证 | 第48页 |
| ·结论与讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 农杆菌介导的蜡蚧轮枝菌转化及其体系优化 | 第49-59页 |
| ·材料与方法 | 第49-52页 |
| ·材料与仪器 | 第49-50页 |
| ·菌株鉴定 | 第50页 |
| ·抑制蜡蚧轮枝菌孢子萌发的潮霉素B 浓度选择 | 第50页 |
| ·抑制蜡蚧轮枝菌菌丝生长的潮霉素B 浓度选择 | 第50-51页 |
| ·抑制农杆菌生长的头孢霉素浓度选择 | 第51页 |
| ·农杆菌介导的蜡蚧轮枝菌转化 | 第51页 |
| ·转化体系的优化 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-57页 |
| ·菌种鉴定 | 第52-53页 |
| ·抑制蜡蚧轮枝菌孢子萌发的潮霉素B 浓度 | 第53-54页 |
| ·抑制蜡蚧轮枝菌菌丝生长的潮霉素B 浓度 | 第54页 |
| ·抑制农杆菌生长的头孢霉素浓度 | 第54页 |
| ·转化体系的优化 | 第54-57页 |
| ·结论与讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 转化子验证 | 第59-66页 |
| ·材料与方法 | 第59-61页 |
| ·材料与仪器 | 第59-60页 |
| ·假定转化子单孢分离 | 第60页 |
| ·假定转化子PCR 验证 | 第60-61页 |
| ·转化子遗传稳定性分析 | 第61页 |
| ·转化子RT-PCR 验证 | 第61页 |
| ·转化子对苯菌灵敏感性测定 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-65页 |
| ·转化子形态观察 | 第61-62页 |
| ·假定转化子PCR 检测 | 第62-63页 |
| ·转化子遗传稳定性 | 第63页 |
| ·转化子RT-PCR 检测 | 第63-64页 |
| ·转化子苯菌灵抗性检测 | 第64-65页 |
| ·结论与讨论 | 第65-66页 |
| 第六章 结论与讨论 | 第66-68页 |
| ·全文结论 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| ·本研究创新点 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简历 | 第75页 |
