| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略语表 | 第10-12页 |
| 1. 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 HIV研究简介 | 第13-15页 |
| 1.1.1 HIV概述 | 第13-14页 |
| 1.1.2 HIV的基因组分类 | 第14-15页 |
| 1.2 HIV疫苗研究简介 | 第15-18页 |
| 1.2.1 传统经典疫苗 | 第15页 |
| 1.2.2 病毒样颗粒疫苗 | 第15-16页 |
| 1.2.3 重组膜蛋白疫苗 | 第16页 |
| 1.2.4 DNA疫苗 | 第16页 |
| 1.2.5 非复制型病毒载体疫苗 | 第16-17页 |
| 1.2.6 复制型病毒载体疫苗 | 第17-18页 |
| 1.3 立题依据和意义 | 第18-20页 |
| 2. 材料 | 第20-26页 |
| 2.1. 细胞 | 第20页 |
| 2.1.1. 细胞培养用DMEM完全培养基 | 第20页 |
| 2.2. 主要生化试剂 | 第20页 |
| 2.3. 试剂盒和主要工具酶 | 第20-21页 |
| 2.4. 菌株和毒株 | 第21页 |
| 2.5. 耗材和溶液 | 第21页 |
| 2.6. 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.7. 常用溶液的配制 | 第22-23页 |
| 2.8. 特殊培养基 | 第23-24页 |
| 2.8.1. 硫乙醇酸盐流体培养基 | 第23-24页 |
| 2.8.2. 改良马丁培养基 | 第24页 |
| 2.9. 抗体和多肽 | 第24-25页 |
| 2.10. 主要生物软件和分析工具 | 第25-26页 |
| 3. 实验方法 | 第26-39页 |
| 3.1. 基因操作 | 第26-27页 |
| 3.1.1. 引物设计及合成 | 第26页 |
| 3.1.2. 反应条件 | 第26-27页 |
| 3.2. 病毒基因组提取 | 第27页 |
| 3.3. 基质细胞准备 | 第27-28页 |
| 3.3.1. 鸡胚制备 | 第27-28页 |
| 3.3.2. 细胞收集 | 第28页 |
| 3.3.3. CEF细胞制备 | 第28页 |
| 3.4. 种毒和收毒 | 第28-29页 |
| 3.5. 蔗糖垫底两步离心 | 第29页 |
| 3.6. 层析法 | 第29-31页 |
| 3.6.1. 装柱 | 第29页 |
| 3.6.2. Q Sephrose XL离子交换层析柱纯化病毒 | 第29-30页 |
| 3.6.3. SOURCE 30Q离子交换层析柱纯化病毒 | 第30页 |
| 3.6.4. SP HP离子交换层析柱纯化 | 第30页 |
| 3.6.5. Sepharose 6FF分子筛纯化 | 第30-31页 |
| 3.7. 病毒浓缩 | 第31页 |
| 3.8. 病毒滴定测定和免疫荧光检测 | 第31-32页 |
| 3.8.1. 病毒滴定 | 第31-32页 |
| 3.8.2. 免疫荧光检测 | 第32页 |
| 3.9. 蛋白质印迹分析(Western Blot,WB) | 第32-33页 |
| 3.9.1. SDS-PAGE电泳 | 第32-33页 |
| 3.9.2. 转膜 | 第33页 |
| 3.9.3. 杂交 | 第33页 |
| 3.10. 动物免疫 | 第33页 |
| 3.11. 酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) | 第33-34页 |
| 3.12. ELISPOT | 第34-35页 |
| 3.12.1. 捕捉抗体的包被 | 第34页 |
| 3.12.2. 脾淋巴细胞的制备 | 第34页 |
| 3.12.3. 检测抗体的加入 | 第34-35页 |
| 3.13. QC相关实验 | 第35-39页 |
| 3.13.1. 无菌实验 | 第35页 |
| 3.13.2. 细菌内毒素检测 | 第35-36页 |
| 3.13.3. 细胞蛋白检测实验 | 第36-39页 |
| 4. 实验结果 | 第39-51页 |
| 4.1. CEF细胞制备,扩增重组MVA | 第39-42页 |
| 4.2. 蔗糖垫底离心初步纯化重组MVA | 第42页 |
| 4.3. 离子交换层析纯化重组MVA | 第42-45页 |
| 4.4. 重组MVA纯化后的最终滴度和得率 | 第45-46页 |
| 4.5. 纯化病毒的鉴定——PCR扩增目的基因和WB检测目的产物 | 第46-47页 |
| 4.6. 纯化后重组MVA免疫效果评价 | 第47-49页 |
| 4.6.1. 纯化后重组MVA体液免疫效果评价 | 第47-48页 |
| 4.6.2. 纯化后重组MVA细胞免疫效果评价 | 第48-49页 |
| 4.7. 纯化后MVA的最终检定结果 | 第49-51页 |
| 5. 讨论 | 第51-56页 |
| 6. 总结和展望 | 第56-58页 |
| 7. 参考文献 | 第58-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
