中文摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-11页 |
前言 | 第12-15页 |
第一部分:转录因子 FOXC1 在口腔鳞癌的表达及功能研究 | 第15-46页 |
1.前言 | 第15-16页 |
2.实验材料 | 第16-20页 |
2.1 .病例及标本 | 第16-17页 |
2.2 引物、siRNA 和细胞株 | 第17页 |
2.3. 主要仪器 | 第17-18页 |
2.4 主要试剂 | 第18-19页 |
2.5 主要试剂的配制 | 第19-20页 |
3. 实验方法及步骤 | 第20-35页 |
3.1 免疫组化方法检测 FOXC1 在 OSCC 组织中的表达情况 | 第20-22页 |
3.2.OSCC 组织总蛋白的提取及蛋白印迹(Western Blot,WB)法检测 FOXC1 在 OSCC组织中的表达情况 | 第22-25页 |
3.3.OSCC 组织总 RNA 的提取及 Real Time PCR 实验检测 FOXC1 在 OSCC 组织中的表达情况 | 第25-28页 |
3.4. 细胞培养 | 第28-30页 |
3.5.siRNA 序列构建及转染 Tca8113 和 SCC‐9 细胞 | 第30-32页 |
3.6.RT‐qPCR 实验检测 Tca8113 转染后 FOXC1 表达及筛选有效 siRNA 序列 | 第32-33页 |
3.7. Western Blot 实验检测转染后 FOXC1 蛋白表达及筛选有效 siRNA 序列 | 第33-34页 |
3.8. siRNA 转染 Tca8113 和 SCC‐9 细胞的 RNAi 实验 | 第34-35页 |
3.9.统计学处理 | 第35页 |
4.结果 | 第35-43页 |
4.1 .FOXC1 在 OSCC 组织内高表达 | 第35-38页 |
4.1.1 OSCC 组织免疫组化学检测结果 | 第35-36页 |
4.1.2 .Real Time PCR 检测 FOXC1 mRNA 的表达量结果 | 第36-37页 |
4.1.3 Western Blot 检测 FOXC1 蛋白表达结果 | 第37页 |
4.1.4 .Real Time PCR 检测几种细胞系中 FOXC1 mRNA 的表达量结果 | 第37-38页 |
4.2 .FOXC1 siRNA 转染 Tca8113 细胞后 FOXC1 基因表达的检测结果 | 第38-39页 |
4.3 .FOXC1 siRNA 转染 Tca8113 和 SCC‐9 细胞后 FOXC1 基因功能检测结果 | 第39-43页 |
5.讨论 | 第43-45页 |
6.结论 | 第45-46页 |
第二部分: 长链非编码 RNA FOXCUT 在口腔鳞癌的表达及功能研究 | 第46-64页 |
1.前言 | 第46-48页 |
2.实验材料 | 第48-51页 |
2.1 .病例及标本 | 第48页 |
2.2 .UCSC 基因库,引物,siRNA 和细胞株 | 第48-49页 |
2.3 主要仪器 | 第49-50页 |
2.4 主要试剂 | 第50页 |
2.5 主要试剂的配制 | 第50-51页 |
3. 实验方法及步骤 | 第51-55页 |
3.1 Real Time PCR 实验检测 FOXC1 在 OSCC 组织中的表达情况 | 第51-52页 |
3.2. siRNA 序列构建 | 第52页 |
3.3 细胞培养 | 第52-53页 |
3.4 .FOXCUT siRNA 转染 Tca8113 和 SCC‐9 细胞 | 第53-54页 |
3.5. FOXCUT siRNA 转染 Tca8113 和 SCC‐9 细胞后的 RNAi 实验 | 第54-55页 |
3.6 .统计学处理 | 第55页 |
4.结果 | 第55-61页 |
4.1 FOXCUT 在 OSCC 组织中表达量分析结果 | 第55-56页 |
4.2 .Real Time PCR 检测三种细胞系中 FOXCUT 的表达量结果 | 第56-57页 |
4.3 .FOXCUT siRNA 转染 Tca8113 细胞后 FOXCUT 基因表达的检测结果 | 第57页 |
4.4 .FOXCUT siRNA 转染 Tca8113 和 SCC‐9 细胞后增殖实验结果 | 第57-58页 |
4.5 .FOXCUT siRNA 转染后 Tca8113 和 SCC‐9 细胞划痕实验结果 | 第58-59页 |
4.6 .流式细胞仪筛选 CD133+细胞检测 FOXCUT RNAi 实验结果 | 第59-61页 |
5.讨论 | 第61-63页 |
6.结论 | 第63-64页 |
第三部分:转录因子 FOXC1 与长链非编码 RNA FOXCUT 相关性研究 | 第64-82页 |
1. 前言 | 第64-65页 |
2.实验材料 | 第65-70页 |
2.1 引物、siRNA 和细胞株 | 第65-66页 |
2.3 主要仪器 | 第66-67页 |
2.4 主要试剂 | 第67-68页 |
2.5 主要试剂的配制 | 第68-70页 |
3. 实验方法与步骤 | 第70-74页 |
3.1 生物信息学分析 | 第70页 |
3.2. FOXC1 和 FOXCUT 在 OSCC 组织相对表达量相关性分析 | 第70页 |
3.3. 细胞培养 | 第70-71页 |
3.4 FOXCUT siRNA 转染 Tca8113 细胞后 RT‐qPCR 检测 FOXC1 与 FOXCUT 表达关系 | 第71-74页 |
4. 结果 | 第74-78页 |
4.1 FOXC1 及邻近 Lnc RNA FOXCUT 位置关系分析结果 | 第74页 |
4.3 FOXC1 与 FOXCUT 在 OSCC 组织内的表达关系分析结果 | 第74-75页 |
4.4 Real Time PCR 检测 FOXC1 siRNAs 转染 Tca8113 后 FOXCUT 和 FOXC1 在口腔鳞癌Tca8113 细胞的表达结果 | 第75-76页 |
4.5 Real Time PCR 和 Western blot 检测 FOXCUT siRNA 转染 Tca8113 后 FOXC1 及 FOXCUT的表达结果 | 第76-77页 |
4.6 Real Time PCR 和 Western blot 检测 FOXC1 和 FOXCUT siRNAs 转染 Tca8113 后MMPs 和 VEGF‐A 的表达结果 | 第77-78页 |
5. 讨论 | 第78-81页 |
6. 结论 | 第81-82页 |
第四部分: FOXC1 siRNA 和 FOXCUT siRNA 转染 Tca8113 细胞后抑制裸鼠肿瘤生长的初步研究 | 第82-98页 |
1.前言 | 第82-83页 |
2.实验材料 | 第83-87页 |
2.1 .动物 | 第83页 |
2.2 .细胞 | 第83页 |
2.3 Lnc RNA siRNA(FOXCUT)引物序列 | 第83-84页 |
2.4 .主要仪器 | 第84页 |
2.5 .主要试剂 | 第84-85页 |
2.6 .工作液配制 | 第85-87页 |
3.实验方法 | 第87-93页 |
3.1.动物购买及饲养 | 第87页 |
3.2.细胞培养 | 第87-89页 |
3.3.建立 BALB/c 鼠肿瘤模型及观察肿瘤生长 | 第89页 |
3.4. 石蜡制作及 HE 染色 | 第89-90页 |
3.5. Real Time PCR 检测瘤组织中的 FOXC1mRNA 和 FOXCUT 表达 | 第90-92页 |
3.6.Western-blot 法检测瘤组织内 FOXC1 蛋白表达 | 第92-93页 |
4.结果 | 第93-96页 |
4.1.FOXC1 siRNA 和 FOXCUT siRNA 对 BALB/c 鼠成瘤能力的影响 | 第93页 |
4.2. 肿瘤组织病理学观察结果 | 第93-94页 |
4.3.肿瘤生长情况分析结果 | 第94-95页 |
4.4.PCR 检测瘤组织内 FOXC1 mRNA 及 FOXCUT 表达水平的表达分析结果 | 第95页 |
4.5.Western‐blot 法检测各组瘤组织内 FOXC1 蛋白水平的表达分析结果 | 第95-96页 |
5.讨论 | 第96-97页 |
6.结论 | 第97-98页 |
参考文献 | 第98-107页 |
综述 | 第107-117页 |
参考文献 | 第111-117页 |
英文缩略词索引 | 第117-118页 |
攻读学位期间发表文章情况 | 第118-119页 |
致谢 | 第119-120页 |