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转录因子FOXC1和长链非编码RNA FOXCUT在口腔鳞癌组织中的表达及功能研究

中文摘要第8-10页
Abstract第10-11页
前言第12-15页
第一部分:转录因子 FOXC1 在口腔鳞癌的表达及功能研究第15-46页
    1.前言第15-16页
    2.实验材料第16-20页
        2.1 .病例及标本第16-17页
        2.2 引物、siRNA 和细胞株第17页
        2.3. 主要仪器第17-18页
        2.4 主要试剂第18-19页
        2.5 主要试剂的配制第19-20页
    3. 实验方法及步骤第20-35页
        3.1 免疫组化方法检测 FOXC1 在 OSCC 组织中的表达情况第20-22页
        3.2.OSCC 组织总蛋白的提取及蛋白印迹(Western Blot,WB)法检测 FOXC1 在 OSCC组织中的表达情况第22-25页
        3.3.OSCC 组织总 RNA 的提取及 Real Time PCR 实验检测 FOXC1 在 OSCC 组织中的表达情况第25-28页
        3.4. 细胞培养第28-30页
        3.5.siRNA 序列构建及转染 Tca8113 和 SCC‐9 细胞第30-32页
        3.6.RT‐qPCR 实验检测 Tca8113 转染后 FOXC1 表达及筛选有效 siRNA 序列第32-33页
        3.7. Western Blot 实验检测转染后 FOXC1 蛋白表达及筛选有效 siRNA 序列第33-34页
        3.8. siRNA 转染 Tca8113 和 SCC‐9 细胞的 RNAi 实验第34-35页
        3.9.统计学处理第35页
    4.结果第35-43页
        4.1 .FOXC1 在 OSCC 组织内高表达第35-38页
            4.1.1 OSCC 组织免疫组化学检测结果第35-36页
            4.1.2 .Real Time PCR 检测 FOXC1 mRNA 的表达量结果第36-37页
            4.1.3 Western Blot 检测 FOXC1 蛋白表达结果第37页
            4.1.4 .Real Time PCR 检测几种细胞系中 FOXC1 mRNA 的表达量结果第37-38页
        4.2 .FOXC1 siRNA 转染 Tca8113 细胞后 FOXC1 基因表达的检测结果第38-39页
        4.3 .FOXC1 siRNA 转染 Tca8113 和 SCC‐9 细胞后 FOXC1 基因功能检测结果第39-43页
    5.讨论第43-45页
    6.结论第45-46页
第二部分: 长链非编码 RNA FOXCUT 在口腔鳞癌的表达及功能研究第46-64页
    1.前言第46-48页
    2.实验材料第48-51页
        2.1 .病例及标本第48页
        2.2 .UCSC 基因库,引物,siRNA 和细胞株第48-49页
        2.3 主要仪器第49-50页
        2.4 主要试剂第50页
        2.5 主要试剂的配制第50-51页
    3. 实验方法及步骤第51-55页
        3.1 Real Time PCR 实验检测 FOXC1 在 OSCC 组织中的表达情况第51-52页
        3.2. siRNA 序列构建第52页
        3.3 细胞培养第52-53页
        3.4 .FOXCUT siRNA 转染 Tca8113 和 SCC‐9 细胞第53-54页
        3.5. FOXCUT siRNA 转染 Tca8113 和 SCC‐9 细胞后的 RNAi 实验第54-55页
        3.6 .统计学处理第55页
    4.结果第55-61页
        4.1 FOXCUT 在 OSCC 组织中表达量分析结果第55-56页
        4.2 .Real Time PCR 检测三种细胞系中 FOXCUT 的表达量结果第56-57页
        4.3 .FOXCUT siRNA 转染 Tca8113 细胞后 FOXCUT 基因表达的检测结果第57页
        4.4 .FOXCUT siRNA 转染 Tca8113 和 SCC‐9 细胞后增殖实验结果第57-58页
        4.5 .FOXCUT siRNA 转染后 Tca8113 和 SCC‐9 细胞划痕实验结果第58-59页
        4.6 .流式细胞仪筛选 CD133+细胞检测 FOXCUT RNAi 实验结果第59-61页
    5.讨论第61-63页
    6.结论第63-64页
第三部分:转录因子 FOXC1 与长链非编码 RNA FOXCUT 相关性研究第64-82页
    1. 前言第64-65页
    2.实验材料第65-70页
        2.1 引物、siRNA 和细胞株第65-66页
        2.3 主要仪器第66-67页
        2.4 主要试剂第67-68页
        2.5 主要试剂的配制第68-70页
    3. 实验方法与步骤第70-74页
        3.1 生物信息学分析第70页
        3.2. FOXC1 和 FOXCUT 在 OSCC 组织相对表达量相关性分析第70页
        3.3. 细胞培养第70-71页
        3.4 FOXCUT siRNA 转染 Tca8113 细胞后 RT‐qPCR 检测 FOXC1 与 FOXCUT 表达关系第71-74页
    4. 结果第74-78页
        4.1 FOXC1 及邻近 Lnc RNA FOXCUT 位置关系分析结果第74页
        4.3 FOXC1 与 FOXCUT 在 OSCC 组织内的表达关系分析结果第74-75页
        4.4 Real Time PCR 检测 FOXC1 siRNAs 转染 Tca8113 后 FOXCUT 和 FOXC1 在口腔鳞癌Tca8113 细胞的表达结果第75-76页
        4.5 Real Time PCR 和 Western blot 检测 FOXCUT siRNA 转染 Tca8113 后 FOXC1 及 FOXCUT的表达结果第76-77页
        4.6 Real Time PCR 和 Western blot 检测 FOXC1 和 FOXCUT siRNAs 转染 Tca8113 后MMPs 和 VEGF‐A 的表达结果第77-78页
    5. 讨论第78-81页
    6. 结论第81-82页
第四部分: FOXC1 siRNA 和 FOXCUT siRNA 转染 Tca8113 细胞后抑制裸鼠肿瘤生长的初步研究第82-98页
    1.前言第82-83页
    2.实验材料第83-87页
        2.1 .动物第83页
        2.2 .细胞第83页
        2.3 Lnc RNA siRNA(FOXCUT)引物序列第83-84页
        2.4 .主要仪器第84页
        2.5 .主要试剂第84-85页
        2.6 .工作液配制第85-87页
    3.实验方法第87-93页
        3.1.动物购买及饲养第87页
        3.2.细胞培养第87-89页
        3.3.建立 BALB/c 鼠肿瘤模型及观察肿瘤生长第89页
        3.4. 石蜡制作及 HE 染色第89-90页
        3.5. Real Time PCR 检测瘤组织中的 FOXC1mRNA 和 FOXCUT 表达第90-92页
        3.6.Western-blot 法检测瘤组织内 FOXC1 蛋白表达第92-93页
    4.结果第93-96页
        4.1.FOXC1 siRNA 和 FOXCUT siRNA 对 BALB/c 鼠成瘤能力的影响第93页
        4.2. 肿瘤组织病理学观察结果第93-94页
        4.3.肿瘤生长情况分析结果第94-95页
        4.4.PCR 检测瘤组织内 FOXC1 mRNA 及 FOXCUT 表达水平的表达分析结果第95页
        4.5.Western‐blot 法检测各组瘤组织内 FOXC1 蛋白水平的表达分析结果第95-96页
    5.讨论第96-97页
    6.结论第97-98页
参考文献第98-107页
综述第107-117页
    参考文献第111-117页
英文缩略词索引第117-118页
攻读学位期间发表文章情况第118-119页
致谢第119-120页

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