| 中文摘要 | 第8-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 前言 | 第15-35页 |
| 一.真核基因表达调控的层次性 | 第15-18页 |
| 1.1 染色质结构是调控真核基因表达的独特方式 | 第15页 |
| 1.2 转录共调控是基因表达调控的普遍形式 | 第15-18页 |
| 二.组蛋白密码(histone code)：真核基因转录的重要调控子 | 第18-25页 |
| 2.1 组蛋白修饰间的相互作用：组蛋白密码的网络系统 | 第19-22页 |
| 2.2 染色质结合蛋白破译组蛋白密码 | 第22-23页 |
| 2.3 组蛋白密码的“信号网络” | 第23-25页 |
| 三.染色质结构与珠蛋白基因簇的转录调控 | 第25-32页 |
| 3.1 染色质结构参与β-珠蛋白基因激活的全过程 | 第27-29页 |
| 3.2 β-珠蛋白结构域、亚结构域和珠蛋白基因开关 | 第29-31页 |
| 3.3 染色质结构与α珠蛋白基因簇的转录调控 | 第31-32页 |
| 四.染色质免疫沉淀法 | 第32-33页 |
| 五.转基因动物中外源基因的整合 | 第33-34页 |
| 六.本研究的主要内容 | 第34-35页 |
| 材料与方法 | 第35-53页 |
| 一.实验材料 | 第35-36页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第35页 |
| 1.2 细胞系 | 第35页 |
| 1.3 实验用动物 | 第35页 |
| 1.4 限制性内切酶与修饰酶 | 第35页 |
| 1.5 试剂盒 | 第35页 |
| 1.6 抗体 | 第35页 |
| 1.7 其它主要试剂 | 第35-36页 |
| 1.8 放射性核素 | 第36页 |
| 1.9 主要仪器设备 | 第36页 |
| 二.实验方法 | 第36-53页 |
| 1.基本技术路线 | 第36-37页 |
| 2.染色质免疫沉淀法 | 第37-39页 |
| 2.1 细胞培养 | 第37页 |
| 2.2 固定 | 第37页 |
| 2.3 全细胞抽提物的获得 | 第37页 |
| 2.4 免疫沉淀 | 第37-38页 |
| 2.5 DNA的分离及纯化 | 第38页 |
| 2.6 半定量PCR反应 | 第38-39页 |
| 3.鼠α-珠蛋白基因簇的组蛋白修饰分析 | 第39-42页 |
| 3.1 技术路线 | 第39-40页 |
| 3.2 红系组织细胞的分离 | 第40页 |
| 3.3 丁酸钠处理 | 第40页 |
| 3.4 染色质免疫沉淀 | 第40-41页 |
| 3.4.1 固定 | 第40页 |
| 3.4.2 全细胞抽提物的获得 | 第40页 |
| 3.4.3 免疫沉淀 | 第40页 |
| 3.4.4 DNA的分离及纯化 | 第40页 |
| 3.4.5 半定量PCR反应 | 第40-41页 |
| 3.5 半定量RT-PCR | 第41-42页 |
| 3.5.1 RNA提取 | 第41页 |
| 3.5.2 cDNA第一链的合成 | 第41-42页 |
| 3.5.3 半定量PCR反应 | 第42页 |
| 4.α-和β-珠蛋白转基因鼠的组蛋白修饰分析 | 第42-47页 |
| 4.1 技术路线 | 第42-43页 |
| 4.2 α-和β-珠蛋白基因簇转基因纯合子的鉴定 | 第43-45页 |
| 4.2.1 PCR鉴定 | 第43页 |
| 4.2.1.1 鼠耳基因组DNA的提取 | 第43页 |
| 4.2.1.2 半定量PCR | 第43页 |
| 4.2.2 Southern杂交鉴定 | 第43-45页 |
| 4.2.2.1 鼠尾基因组DNA的提取 | 第43-44页 |
| 4.2.2.2 Southern杂交 | 第44-45页 |
| 4.2.3 传代鉴定 | 第45页 |
| 4.3 苯肼处理及其效应鉴定 | 第45页 |
| 4.3.1 苯肼处理 | 第45页 |
| 4.3.2 鼠α-珠蛋白基因表达的半定量RT-PCR分析 | 第45页 |
| 4.4 转基因鼠红系组织的获得 | 第45页 |
| 4.5 染色质免疫沉淀 | 第45-47页 |
| 4.5.1 α-珠蛋白转基因鼠的组蛋白修饰分析 | 第45-46页 |
| 4.5.2 β-珠蛋白转基因鼠的组蛋白修饰分析 | 第46-47页 |
| 5.转基因鼠中外源基因的定位 | 第47-53页 |
| 5.1 基本策略 | 第47-48页 |
| 5.2 构建Genome Walker文库 | 第48-49页 |
| 5.2.1 鼠基因组DNA的提取 | 第48页 |
| 5.2.2 鼠基因组DNA的酶切 | 第48页 |
| 5.2.3 酶切后的基因组DNA的纯化 | 第48页 |
| 5.2.4 纯化后的基因组DNA与Genome Walker Adaptors的连接 | 第48-49页 |
| 5.3 Genome Walker DNA Walking | 第49-50页 |
| 5.3.1 引物的设计 | 第49页 |
| 5.3.2 从Genome Walker文库中进行PCR-based DNA Walking | 第49-50页 |
| 5.4 PCR产物的回收 | 第50页 |
| 5.5 目的片段的克隆 | 第50-51页 |
| 5.5.1 连接反应 | 第50-51页 |
| 5.5.2 感受态E.coli DH5α的制备 | 第51页 |
| 5.5.3 感受态细胞的转化 | 第51页 |
| 5.5.4 感受态细胞的快速转化 | 第51页 |
| 5.5.5 质粒DNA的小量制备 | 第51页 |
| 5.6 重组子的酶切鉴定 | 第51-52页 |
| 5.7 DNA序列测定 | 第52页 |
| 5.8 PCR方法鉴定基因组步移结果 | 第52-53页 |
| 5.8.1 ex23基因组步移结果鉴定 | 第52页 |
| 5.8.2 ex1基因组步移结果鉴定 | 第52-53页 |
| 实验结果 | 第53-80页 |
| 一.染色质免疫沉淀法的建立 | 第53-55页 |
| 1.超声波破碎条件 | 第53页 |
| 2.PCR模板量的选择 | 第53-54页 |
| 3.组蛋白H3乙酰化与珠蛋白基因表达 | 第54-55页 |
| 二.鼠α-珠蛋白基因簇的组蛋白修饰分析 | 第55-63页 |
| 1.珠蛋白基因开关过程中组蛋白乙酰化的动态变化 | 第55-58页 |
| 2.珠蛋白基因开关过程中组蛋白H3 K4甲基化的动态变化 | 第58-59页 |
| 3.珠蛋白基因开关过程中组蛋白H3 K79甲基化的分析 | 第59-60页 |
| 4.珠蛋白基因开关过程中组蛋白修饰的动态变化 | 第60-62页 |
| 5.丁酸钠处理特异性地提高ζ-基因的组蛋白乙酰化水平 | 第62-63页 |
| 6.丁酸钠处理不能激活ζ-基因的表达 | 第63页 |
| 三.α-和β-珠蛋白转基因鼠的组蛋白修饰分析 | 第63-75页 |
| 1.转基因纯合子的鉴定 | 第63-65页 |
| 2.苯肼处理的昆明鼠贫血模型的建立 | 第65-66页 |
| 3.基因开关过程中人α-珠蛋白基因组蛋白修饰的动态变化 | 第66-71页 |
| 3.1 组蛋白乙酰化的动态变化 | 第66-68页 |
| 3.2 组蛋白H3 K79甲基化的动态变化 | 第68-69页 |
| 3.3 人α-珠蛋白基因开关过程中组蛋白修饰的动态变化 | 第69-71页 |
| 4.基因开关过程中人β-珠蛋白基因组蛋白乙酰化的动态变化 | 第71-75页 |
| 四.转基因鼠中外源基因的定位 | 第75-80页 |
| 1.转基因鼠ex23中外源基因的定位 | 第75-78页 |
| 2.转基因鼠ex1中外源基因的定位 | 第78-80页 |
| 讨论 | 第80-100页 |
| 一.组蛋白密码引导珠蛋白基因开关 | 第80-84页 |
| 1.组蛋白密码、鼠α-珠蛋白基因亚结构域和基因开关 | 第80-83页 |
| 1.1 ζ-亚结构域发育阶段特异性的动态变化 | 第82页 |
| 1.2 α-亚结构域染色质结构在基因开关过程中的开放性 | 第82-83页 |
| 2.组蛋白密码、人α-珠蛋白基因亚结构域和基因开关 | 第83-84页 |
| 3.组蛋白乙酰化与β-珠蛋白基因开关 | 第84页 |
| 二.不同高敏位点在珠蛋白转录调控中的作用不同 | 第84-91页 |
| 1.αMRE中各高敏位点的不同作用 | 第85-86页 |
| 1.1 HS40和HS26 | 第85-86页 |
| 1.2 αMRE中的其它高敏位点 | 第86页 |
| 2.LCR中各HS的不同作用 | 第86-87页 |
| 2.1 HS1 | 第86页 |
| 2.2 HS2 | 第86-87页 |
| 2.3 HS3 | 第87页 |
| 2.4 HS4 | 第87页 |
| 3.高敏位点动态参与珠蛋白基因激活的“成环”模型 | 第87-91页 |
| 三.珠蛋白基因簇染色质结构开放的“渐进”模型 | 第91-95页 |
| 四.珠蛋白基因簇转基因鼠中外源基因定位结果的探讨 | 第95-96页 |
| 五.ChIP技术的发展及应用 | 第96-98页 |
| 5.1 ChIP-on-chip：揭示转录调控网络＼的有力工具 | 第96-97页 |
| 5.2 RNA-ChIP：研究RNA-蛋白质相互作用 | 第97页 |
| 5.3 HaploChIP：研究DNA多态性与基因表达 | 第97-98页 |
| 5.4 ChlP-DNA footprinting：确定蛋白质的DNA结合位点 | 第98页 |
| 六.本研究的不足之处和今后的工作设想 | 第98-100页 |
| 小结 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-124页 |
| 附录 | 第124-134页 |
| 1.ex23转基因鼠Stu Ⅰ小片段的测序及序列比对结果 | 第124-126页 |
| 2.ex23转基因鼠Stu Ⅰ大片段的测序及序列比对结果 | 第126-130页 |
| 3.ex1转基因鼠基因组步移的测序及序列比对结果 | 第130-134页 |
| 文献综述 | 第134-145页 |
| 英文名词及缩写 | 第145-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
| 个人简历 | 第148页 |
