| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第15-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-29页 |
| 1 全球气候变暖产生的夏季热应激问题 | 第16页 |
| 2 奶牛热应激的概述及评判标准 | 第16-17页 |
| 3 奶牛热应激的危害 | 第17-24页 |
| 3.1 热应激对奶牛生产性能的影响 | 第17-20页 |
| 3.2 热应激对奶牛碳水化合物、蛋白和脂质代谢的影响 | 第20-21页 |
| 3.2.1 热应激对奶牛碳水化合物代谢的影响 | 第20页 |
| 3.2.2 热应激对奶牛蛋白代谢的影响 | 第20页 |
| 3.2.3 热应激对奶牛脂质代谢的影响 | 第20-21页 |
| 3.3 热应激对奶牛激素和信号分子的影响 | 第21-23页 |
| 3.3.1 热应激对奶牛激素分泌的影响 | 第21-22页 |
| 3.3.2 热应激对奶牛信号分子的影响 | 第22-23页 |
| 3.4 热应激对奶牛乳腺上皮细胞的影响 | 第23-24页 |
| 3.4.1 热应激抑制细胞生长、诱导细胞凋亡 | 第23-24页 |
| 3.4.2 热应激对乳腺上皮细胞泌乳功能的影响 | 第24页 |
| 4 利用组学技术研究热应激对奶牛的影响 | 第24-26页 |
| 4.1 代谢组学技术揭示热应激奶牛的生物标记物和代谢通路变化 | 第24-25页 |
| 4.2 蛋白组学技术揭示热应激奶牛的差异蛋白及其生物学功能 | 第25-26页 |
| 5 缓解奶牛热应激的营养策略 | 第26-27页 |
| 6 研究内容与技术路线 | 第27-29页 |
| 6.1 研究内容 | 第27-28页 |
| 6.2 技术路线 | 第28-29页 |
| 第二章 试验研究 | 第29-87页 |
| 试验一 热应激对奶牛血液中胰岛素、脂肪因子、AMP激活蛋白激酶和热休克信号分子的影响 | 第29-37页 |
| 1 前言 | 第29-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-32页 |
| 2.1 试验设计 | 第30-31页 |
| 2.2 饲养管理 | 第31页 |
| 2.3 样品采集 | 第31-32页 |
| 2.4 统计分析 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-34页 |
| 3.1 热应激对奶牛生理指标和生产性能的影响 | 第32-33页 |
| 3.2 热应激对奶牛血液中激素水平和信号分子的影响 | 第33页 |
| 3.3 不同程度热应激引起奶牛血液中热休克信号分子的变化 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 4.1 热应激对奶牛血液中胰岛素、瘦素和脂联素浓度的影响 | 第34-35页 |
| 4.2 热应激对奶牛血液中AMPK信号分子的影响 | 第35页 |
| 4.3 热应激对奶牛血液中HSF和HSPs的影响 | 第35-36页 |
| 5 小结 | 第36-37页 |
| 试验二 蛋白组学技术揭示持续热应激导致奶牛的炎症反应 | 第37-49页 |
| 1 前言 | 第37-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-41页 |
| 2.1 试验设计 | 第38页 |
| 2.2 饲养管理 | 第38-39页 |
| 2.3 样品采集 | 第39页 |
| 2.4 二维凝胶电泳(2-DE) | 第39-40页 |
| 2.4.1 一维等电聚焦 | 第39页 |
| 2.4.2 二维凝胶电泳(2-DE) | 第39-40页 |
| 2.5 蛋白酶解和质谱鉴定 | 第40页 |
| 2.6 蛋白印迹(Western blot) | 第40页 |
| 2.7 促炎症因子 | 第40页 |
| 2.8 统计分析 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-45页 |
| 3.1 热应激对奶牛生理指标、生产性能和乳中体细胞数的影响 | 第41页 |
| 3.2 差异蛋白的分析和鉴定 | 第41-44页 |
| 3.3 甲状腺转运蛋白的蛋白印迹验证 | 第44页 |
| 3.4 促炎症因子 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 4.1 差异蛋白的生物学功能分析 | 第45-48页 |
| 4.1.1 角蛋白Ⅱ型细胞骨架蛋白3-样蛋白 | 第45-46页 |
| 4.1.2 蛋白HP-25同系物1 | 第46-47页 |
| 4.1.3 甲肝病毒细胞受体1-N末端结构域包含蛋白 | 第47页 |
| 4.1.4 蛋白HP-25同系物2 | 第47页 |
| 4.1.5 甲状腺转运蛋白 | 第47-48页 |
| 4.2 持续热应激引起奶牛血浆中促炎症因子升高 | 第48页 |
| 5 小结 | 第48-49页 |
| 试验三 iTRAQ血浆蛋白组学技术揭示热应激奶牛的免疫反应、补体和凝血因子信号通路的变化 | 第49-68页 |
| 1 前言 | 第49-50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-54页 |
| 2.1 试验设计 | 第50-51页 |
| 2.2 饲养管理 | 第51页 |
| 2.3 样品采集 | 第51页 |
| 2.4 高丰度蛋白去除 | 第51-52页 |
| 2.5 蛋白酶解和iTRAQ标记 | 第52页 |
| 2.6 强阳离子交换色谱分离 | 第52-53页 |
| 2.7 液相色谱-电喷雾串联质谱法（LC-ESI-MS/MS)分析 | 第53页 |
| 2.8 蛋白的鉴定和定量 | 第53页 |
| 2.9 差异蛋白的验证 | 第53-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-64页 |
| 3.1 去除高丰度蛋白前后的SDS-PAGE分析 | 第54页 |
| 3.2 热应激奶牛血浆中差异蛋白的鉴定和定量 | 第54-59页 |
| 3.3 GO功能和KEGG信号通路富集分析 | 第59-64页 |
| 4 讨论 | 第64-67页 |
| 4.1 去除高丰度蛋白的作用 | 第64页 |
| 4.2 热应激导致奶牛免疫损伤 | 第64-65页 |
| 4.3 热应激引起奶牛血浆中的补体和凝血因子信号通路发生变化 | 第65-66页 |
| 4.4 结合蛋白组学和代谢组学分析奶牛热应激 | 第66页 |
| 4.5 脂联素和硒蛋白P | 第66-67页 |
| 5 小结 | 第67-68页 |
| 试验四 夏季突然降温对热应激奶牛的影响 | 第68-74页 |
| 1 前言 | 第68-69页 |
| 2 材料与方法 | 第69-70页 |
| 2.1 试验设计 | 第69页 |
| 2.2 饲养管理 | 第69页 |
| 2.3 样品采集 | 第69-70页 |
| 2.4 高丰度蛋白去除 | 第70页 |
| 2.5 蛋白酶解和iTRAQ标记 | 第70页 |
| 2.6 强阳离子交换色谱分离 | 第70页 |
| 2.7 液相色谱-电喷雾串联质谱法分析 | 第70页 |
| 2.8 蛋白的鉴定和定量 | 第70页 |
| 3 结果与分析 | 第70-72页 |
| 3.1 夏季突然降温对热应激奶牛生理指标和生产性能的影响 | 第70-71页 |
| 3.2 血浆中差异蛋白的鉴定和定量 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-73页 |
| 4.1 差异蛋白的生物学功能分析 | 第72-73页 |
| 4.1.1 血红蛋白 | 第72页 |
| 4.1.2 脂多糖结合蛋白 | 第72-73页 |
| 4.1.3 结合珠蛋白 | 第73页 |
| 5 小结 | 第73-74页 |
| 试验五 瘤胃发酵参数和菌群多样性揭示热应激引起奶牛采食行为的变化 | 第74-87页 |
| 1 前言 | 第74-75页 |
| 2 材料与方法 | 第75-79页 |
| 2.1 试验设计 | 第75页 |
| 2.2 饲养管理 | 第75页 |
| 2.3 样品采集 | 第75页 |
| 2.4 瘤胃液挥发性脂肪酸浓度测定 | 第75页 |
| 2.5 瘤胃液乳酸和乳酸脱氢酶活测定 | 第75-76页 |
| 2.6 瘤胃液细菌DNA提取 | 第76页 |
| 2.7 PCR扩增 | 第76-77页 |
| 2.8 MiSeq测序 | 第77-78页 |
| 2.8.1 PCR产物定量和均一化 | 第77页 |
| 2.8.2 MiSeq文库构建 | 第77页 |
| 2.8.3 MiSeq高通量测序 | 第77-78页 |
| 2.9 MiSeq测序数据处理 | 第78页 |
| 2.10 MiSeq测序数据分析 | 第78-79页 |
| 2.10.1 α多样性分析 | 第78-79页 |
| 2.10.2 β多样性分析 | 第79页 |
| 2.10.3 物种组成分析 | 第79页 |
| 2.11 统计分析 | 第79页 |
| 3 结果与分析 | 第79-85页 |
| 3.1 热应激对奶牛生产性能的影响 | 第79-80页 |
| 3.2 热应激对奶牛瘤胃发酵参数的影响 | 第80-81页 |
| 3.3 PCR扩增和MiSeq数据质控 | 第81页 |
| 3.4 α多样性分析 | 第81-82页 |
| 3.5 β多样性分析 | 第82-83页 |
| 3.6 物种组成分析 | 第83-85页 |
| 4 讨论 | 第85-86页 |
| 4.1 热应激对瘤胃发酵参数的影响 | 第85页 |
| 4.2 热应激对瘤胃菌群的影响 | 第85-86页 |
| 5 小结 | 第86-87页 |
| 第三章 结论与建议 | 第87-89页 |
| 1 结论 | 第87页 |
| 2 创新点 | 第87-88页 |
| 3 有待于进一步研究和解决的问题 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 个人简介 | 第101页 |
