| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词对照表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 土壤微生物多样性研究进展 | 第13页 |
| 1.2 土壤微生物总DNA的提取 | 第13-15页 |
| 1.3 纤维素及纤维素酶研究 | 第15-20页 |
| 1.3.1 纤维素的基本结构 | 第15页 |
| 1.3.2 纤维素的降解 | 第15-16页 |
| 1.3.3 纤维素酶的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3.4 纤维素酶的生产与分离纯化 | 第19-20页 |
| 1.3.5 纤维素酶的应用 | 第20页 |
| 1.4 纤维素酶的混合发酵研究 | 第20-21页 |
| 1.5 高产纤维素酶菌株的选育 | 第21-22页 |
| 1.5.1 诱变选育 | 第21-22页 |
| 1.5.2 基因工程育种 | 第22页 |
| 1.6 课题研究主要内容 | 第22-23页 |
| 第二章 土壤微生物总DNA的提取 | 第23-27页 |
| 2.1 材料和方法 | 第23-25页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.2 土壤DNA提取方法 | 第24-25页 |
| 2.2 结果分析 | 第25-26页 |
| 2.2.1 4种提取方法DNA电泳检测结果 | 第25页 |
| 2.2.2 不同提取方法DNA纯度和浓度检测 | 第25-26页 |
| 2.3 结论与讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 土壤细菌多样性的分析 | 第27-36页 |
| 3.1 材料与方法 | 第27-30页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第27页 |
| 3.1.2 试验方法 | 第27-30页 |
| 3.2 试验结果 | 第30-34页 |
| 3.2.1 微生物计数与土壤理化性质 | 第30-31页 |
| 3.2.2 两种DNA的提取和 16Sr DNA片段扩增 | 第31-32页 |
| 3.2.3 文库的构建与限制性片段酶切和PCR鉴定分析 | 第32-33页 |
| 3.2.4 两个 16S rDNA文库的系统发育分析 | 第33-34页 |
| 3.3 结论与讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 产纤维素酶菌株的分离筛选 | 第36-46页 |
| 4.1 试验材料与方法 | 第36-39页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第36页 |
| 4.1.2 试验方法 | 第36-39页 |
| 4.2 结果与分析 | 第39-45页 |
| 4.2.1 葡萄糖标准曲线的绘制 | 第39页 |
| 4.2.2 土壤样品中微生物的分离 | 第39-40页 |
| 4.2.3 产纤维素酶菌株的筛选 | 第40-41页 |
| 4.2.4 菌株的生理性质鉴定 | 第41页 |
| 4.2.5 菌株的分子鉴定 | 第41-42页 |
| 4.2.6 C-6 菌株的生长曲线 | 第42-43页 |
| 4.2.7 C-6 菌株纤维素酶各组分酶活测定 | 第43-44页 |
| 4.2.8 最适酶反应温度的确定 | 第44页 |
| 4.2.9 酶反应最适pH值得确定 | 第44-45页 |
| 4.3 结论与讨论 | 第45-46页 |
| 第五章 混合发酵酶学性质研究 | 第46-57页 |
| 5.1．试验材料与方法 | 第46-49页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第46页 |
| 5.1.2 试验方法 | 第46-49页 |
| 5.2 结果分析 | 第49-56页 |
| 5.2.1 酵母菌最佳接入时间的确定 | 第49页 |
| 5.2.2 不同培养时间对产酶的影响 | 第49-50页 |
| 5.2.3 不同培养温度对产酶的影响 | 第50页 |
| 5.2.4 不同培养pH对产酶的影响 | 第50-51页 |
| 5.2.5 混菌发酵酶各组分盐的耐受性试验 | 第51页 |
| 5.2.6 葡萄糖、甘油和木糖对混菌发酵酶各组分糖的影响 | 第51-53页 |
| 5.2.7 化学物质对产酶结果的影响 | 第53页 |
| 5.2.8 硫酸铵最佳盐析条件的确定 | 第53-54页 |
| 5.2.9 丙酮最佳沉淀条件的确定 | 第54页 |
| 5.2.10 Sephadex G-50凝胶柱层析 | 第54-55页 |
| 5.2.11 SDS-PAGE不连续垂直平板电泳 | 第55-56页 |
| 5.3 结论 | 第56-57页 |
| 第六章 混合发酵产纤维素酶条件的优化 | 第57-65页 |
| 6.1.材料和方法 | 第57-58页 |
| 6.1.1 试验材料 | 第57页 |
| 6.1.2 试验方法 | 第57-58页 |
| 6.2 试验结果 | 第58-63页 |
| 6.2.1 Plackett-Burman结果与方差分析 | 第58-60页 |
| 6.2.2 最陡爬坡试验设计及结果 | 第60页 |
| 6.2.3 Box-Behnken中心组合设计 | 第60-62页 |
| 6.2.4 响应面分析及最优培养基成分和培养条件的确定 | 第62-63页 |
| 6.3 结论与讨论 | 第63-65页 |
| 第七章 纤维素酶基因的克隆与表达 | 第65-71页 |
| 7.1 材料与方法 | 第65-67页 |
| 7.1.1 试验材料 | 第65页 |
| 7.1.2 实验方法 | 第65-67页 |
| 7.2.试验结果 | 第67-69页 |
| 7.2.1 纤维素酶基因的克隆 | 第67页 |
| 7.2.2 目的基因片段的序列酶切鉴定 | 第67-68页 |
| 7.2.3 表达载体的构建和以及在大肠杆菌BL21中的表达 | 第68页 |
| 7.2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第68-69页 |
| 7.2.5 重组纤维素酶活性的检测和酶活的测定 | 第69页 |
| 7.3 结论与讨论 | 第69-71页 |
| 第八章 结论与展望 | 第71-74页 |
| 8.1 不同DNA提取方法比较 | 第71页 |
| 8.2 土壤细菌文库的构建和多样性分析 | 第71页 |
| 8.3 产纤维素酶菌株的分离和筛 | 第71页 |
| 8.4 混合发酵产酶酶学性质的研究 | 第71-72页 |
| 8.5 混合发酵产纤维素酶条件的优化 | 第72页 |
| 8.6 纤维素酶基因的克隆和表达 | 第72页 |
| 8.7 展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 附录一 主要培养基、溶液配制 | 第81页 |
| 附录二 主要分子实验方法 | 第81-83页 |
| 附录三 载体图 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 作者简介 | 第85-86页 |
| 导师评阅表 | 第86页 |
