| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 第1章 文献综述 | 第18-28页 |
| 1.1 肿瘤细胞的糖代谢重编程 | 第18-21页 |
| 1.1.1 肿瘤细胞的瓦伯格效应 | 第18-20页 |
| 1.1.2 巴斯德效应与反巴斯德效应 | 第20页 |
| 1.1.3 PDK与糖代谢重编程 | 第20-21页 |
| 1.2 肿瘤细胞的线粒体功能 | 第21-25页 |
| 1.2.1 线粒体的合成与转化 | 第22页 |
| 1.2.2 线粒体的分裂与融合 | 第22-23页 |
| 1.2.3 线粒体与细胞凋亡 | 第23页 |
| 1.2.4 线粒体功能和氧化应激 | 第23-25页 |
| 1.3 肿瘤细胞的药物抵抗 | 第25-28页 |
| 1.3.1 药物抵抗 | 第25-26页 |
| 1.3.2 糖代谢与药物抵抗 | 第26-27页 |
| 1.3.3 脂肪代谢与药物抵抗 | 第27页 |
| 1.3.4 氨基酸代谢与药物抵抗 | 第27-28页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第28-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第29-31页 |
| 2.1.3 实验用细胞株 | 第31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-41页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第31-32页 |
| 2.2.2 细胞存活率检测（MTT法） | 第32-33页 |
| 2.2.3 提取细胞总蛋白 | 第33页 |
| 2.2.4 Bio-Rad法测定蛋白浓度 | 第33页 |
| 2.2.5 Western blot | 第33-34页 |
| 2.2.6 PCR和Real time-PCR检测mRNA表达 | 第34-36页 |
| 2.2.7 shRNA细胞转染 | 第36页 |
| 2.2.8 MiTo Sox~(TM)检测线粒体ROS | 第36-37页 |
| 2.2.9 JC-1 试剂盒检测线粒体膜电势 | 第37页 |
| 2.2.10 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第37-38页 |
| 2.2.11 Mitotracker染色 | 第38页 |
| 2.2.12 葡萄糖水平检测 | 第38-39页 |
| 2.2.13 乳酸水平检测 | 第39页 |
| 2.2.14 柠檬酸盐水平检测 | 第39-40页 |
| 2.2.15 乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒 | 第40页 |
| 2.2.16 统计学方法 | 第40-41页 |
| 第3章 实验结果 | 第41-63页 |
| 3.1 PDK1抑制剂DCA对HepG2和BEL-7402 细胞活力及凋亡的影响 | 第41-44页 |
| 3.1.1 MTT检测DCA对HepG2和BEL-7402 细胞活力的影响 | 第41页 |
| 3.1.2 Annexin V-FITC/PI双染法检测PDK抑制剂DCA对HepG2和BEL-7402 细胞凋亡的影响 | 第41-43页 |
| 3.1.3 Western Blot检测PDK1抑制剂DCA对两株肝癌细胞凋亡蛋白表达的影响 | 第43-44页 |
| 3.2 两株肝癌细胞糖酵解与线粒体功能的比较 | 第44-48页 |
| 3.2.1 比色法检测HepG2细胞与BEL-7402 细胞葡萄糖摄取及乳酸生成 | 第44-45页 |
| 3.2.2 HepG2细胞与BEL-7402 细胞糖酵解相关酶LDHA、PFKL的基因表达 | 第45-46页 |
| 3.2.3 HepG2细胞与BEL-7402 细胞乳酸脱氢酶LDH活性检测 | 第46页 |
| 3.2.4 HepG2细胞与BEL-7402 细胞线粒体内ROS及柠檬酸盐生成 | 第46-47页 |
| 3.2.5 HepG2与BEL-7402 细胞糖酵解相关蛋白的表达 | 第47-48页 |
| 3.3 PDK1抑制剂DCA对HepG2和BEL-7402 细胞糖酵解途径的影响 | 第48-53页 |
| 3.3.1 比色法检测HepG2和BEL-7402 细胞葡萄糖摄取及乳酸生成 | 第48-49页 |
| 3.3.2 Realtime-PCR检测DCA对HepG2和BEL-7402 细胞糖酵解相关基因PDK1、PFKL、LDHA表达的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.3 Western Blot检测DCA对HepG2和BEL-7402 细胞糖酵解相关蛋白表达的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.4 酶标仪法检测DCA对HepG2和BEL-7402 细胞乳酸脱氢酶LDH活性的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.5 DCA抑制HepG2和BEL-7402 细胞缺氧诱导因子HIF-1α表达 | 第52-53页 |
| 3.4 PDK1抑制剂DCA对HepG2和BEL-7402 细胞线粒体功能的影响 | 第53-56页 |
| 3.4.1 Mito Sox染色流式细胞术检测DCA对HepG2和BEL-7402细胞线粒体ROS的影响 | 第53页 |
| 3.4.2 Jc-1 染色流式细胞术检测DCA对HepG2和BEL-7402 细胞线粒体膜电势的影响 | 第53-55页 |
| 3.4.3 DCA对HepG2和BEL-7402 细胞线粒体柠檬酸盐生成的影响 | 第55页 |
| 3.4.4 激光共聚焦检测DCA对HepG2和BEL-7402 细胞线粒体形态的观察 | 第55-56页 |
| 3.5 沉默PDK1验证其为DCA作用靶点 | 第56-63页 |
| 3.5.1Western Blot方法检测转染细胞中PDK1的表达 | 第56-57页 |
| 3.5.2 PCR方法检测转染细胞中PDK1的表达 | 第57-58页 |
| 3.5.3 流式细胞术检测沉默PDK1对HepG2、BEL-7402 细胞凋亡的影响 | 第58-59页 |
| 3.5.4 分光光度法检测沉默PDK1对HepG2、BEL-7402 细胞葡萄糖摄取和乳酸生成的影响 | 第59-60页 |
| 3.5.5 Western Blot检测沉默PDK1对HepG2和BEL-7402 细胞糖酵解相关蛋白的影响 | 第60-61页 |
| 3.5.6 PCR检测沉默PDK1对HepG2和BEL-7402 细胞糖酵解相关基因的影响 | 第61-62页 |
| 3.5.7 倒置荧光显微镜观察沉默PDK1对HepG2、BEL-7402 细胞线粒体内ROS的影响 | 第62-63页 |
| 第4章 讨论 | 第63-66页 |
| 第5章 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
