| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1.1 肝再生的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 肝癌的研究进展 | 第16页 |
| 1.3 肝细胞在肝再生和肝癌中的作用 | 第16-17页 |
| 1.4 SPINK1的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4.1 SPINK1的结构和功能 | 第17-18页 |
| 1.4.2 SPINK1与肝脏 | 第18页 |
| 1.4.3 SPINK1与肝再生和肝癌 | 第18-19页 |
| 1.5 SPINK1调控肝（癌）细胞增殖的可能机理 | 第19-23页 |
| 1.5.1 EGFR-p38信号通路与肝（癌）细胞增殖 | 第19-20页 |
| 1.5.2 EGFR-ERK信号通路与肝（癌）细胞增殖 | 第20页 |
| 1.5.3 EGFR-JNK信号通路与肝（癌）细胞增殖 | 第20-21页 |
| 1.5.4 EGFR-PKC信号通路与肝（癌）细胞增殖 | 第21-22页 |
| 1.5.5 EGFR-JAK/STAT信号通路与肝（癌）细胞增殖 | 第22页 |
| 1.5.6 EGFR-AKT信号通路与肝（癌）细胞增殖 | 第22-23页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第23页 |
| 1.7 研究方案 | 第23-27页 |
| 第二章 从基因水平分析Spink1调控大鼠正常肝细胞BRL-3A增殖的分子机理 | 第27-63页 |
| 2.1 引言 | 第27-28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-33页 |
| 2.2.1 主要实验仪器 | 第28页 |
| 2.2.2 主要耗材 | 第28页 |
| 2.2.3 试剂与配制 | 第28-32页 |
| 2.2.4 菌株、质粒、细胞株 | 第32页 |
| 2.2.5 实验动物 | 第32-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-49页 |
| 2.3.1 大鼠肝再生模型的制备 | 第33页 |
| 2.3.2 大鼠再生肝肝细胞的分离与鉴定 | 第33页 |
| 2.3.3 Rat Genome 230 2.0芯片检测及数据整理 | 第33-34页 |
| 2.3.4 细胞培养 | 第34-35页 |
| 2.3.5 免疫共沉淀 | 第35页 |
| 2.3.6 SPINK1信号通路网络的构建 | 第35-36页 |
| 2.3.7 感受态大肠杆菌的制备 | 第36页 |
| 2.3.8 质粒转化 | 第36-37页 |
| 2.3.9 质粒小量提取 | 第37-38页 |
| 2.3.10 质粒鉴定 | 第38页 |
| 2.3.11 碱裂解法大量提取质粒 | 第38-40页 |
| 2.3.12 慢病毒包装和收集 | 第40-41页 |
| 2.3.13 慢病毒侵染BRL-3A细胞 | 第41页 |
| 2.3.14 阳性单克隆筛选、扩大培养以及鉴定 | 第41-42页 |
| 2.3.15 MTT法检测细胞活力 | 第42页 |
| 2.3.16 EdU法检测细胞增殖 | 第42-43页 |
| 2.3.17 PI单染法检测细胞周期 | 第43-44页 |
| 2.3.18 PE AnnexinⅤ和7-AAD双染法检测细胞凋亡 | 第44-45页 |
| 2.3.19 pEGFR抗体对Spink1上调表达的BRL-3A细胞活力的影响 | 第45页 |
| 2.3.20 qRT-PCR法检测基因表达情况 | 第45-47页 |
| 2.3.21 Western Blot法检测蛋白表达情况 | 第47-49页 |
| 2.3.22 统计学分析 | 第49页 |
| 2.4 实验结果 | 第49-60页 |
| 2.4.1 Spink1在大鼠再生肝肝细胞中的表达情况 | 第49-50页 |
| 2.4.2 SPINK1与EGFR的相互作用 | 第50页 |
| 2.4.3 SPINK1/EGFR信号通路网络 | 第50-51页 |
| 2.4.4 表达载体质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-Spink1的鉴定 | 第51-53页 |
| 2.4.5 三种质粒共转染HEK293T细胞 | 第53-54页 |
| 2.4.6 pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-Spink1转染BRL-3A细胞 | 第54-55页 |
| 2.4.7 Spink1基因上调表达对BRL-3A细胞活力的影响 | 第55-56页 |
| 2.4.8 Spink1基因上调表达对BRL-3A细胞增殖的影响 | 第56页 |
| 2.4.9 Spink1基因上调表达对BRL-3A细胞周期的影响 | 第56-57页 |
| 2.4.10 Spink1基因上调表达对BRL-3A细胞凋亡的影响 | 第57-58页 |
| 2.4.11 pEGFR抗体对Spink1基因上调表达的BRL-3A细胞生长活力的影响 | 第58页 |
| 2.4.12 Spink1基因上调表达对BRL-3A细胞中SPINK1信号通路等相关基因表达的影响 | 第58-59页 |
| 2.4.13 Spink1基因上调表达对BRL-3A细胞中SPINK1信号通路等相关蛋白表达的影响 | 第59-60页 |
| 2.5 讨论 | 第60-61页 |
| 2.6 小结 | 第61-63页 |
| 第三章 从蛋白水平分析SPINK1调控大鼠正常肝细胞BRL-3A和肝癌细胞RH-35增殖的分子机理 | 第63-79页 |
| 3.1 引言 | 第63-64页 |
| 3.2 实验材料 | 第64页 |
| 3.2.1 主要实验仪器 | 第64页 |
| 3.2.2 主要试剂与配制 | 第64页 |
| 3.3 实验方法 | 第64-67页 |
| 3.3.1 大鼠肝癌模型的制备 | 第64页 |
| 3.3.2 Rat Genome 230 2.0芯片检测及数据整理 | 第64-65页 |
| 3.3.3 MTT法检测细胞活力 | 第65页 |
| 3.3.4 EdU法检测细胞增殖 | 第65页 |
| 3.3.5 PI单染法检测细胞周期 | 第65-66页 |
| 3.3.6 PE AnnexinⅤ和7-AAD双染法检测细胞凋亡 | 第66页 |
| 3.3.7 qRT-PCR检测基因表达情况 | 第66页 |
| 3.3.8 Western Blot检测蛋白表达情况 | 第66页 |
| 3.3.9 统计学分析 | 第66-67页 |
| 3.4 实验结果 | 第67-75页 |
| 3.4.1 Spink1在大鼠肝癌中的表达情况 | 第67页 |
| 3.4.2 rrSPINK1蛋白对BRL-3A细胞和RH-35细胞活力的影响 | 第67-68页 |
| 3.4.3 rrSPINK1蛋白对BRL-3A细胞和RH-35细胞增殖的影响 | 第68-69页 |
| 3.4.4 rrSPINK1蛋白对BRL-3A细胞和RH-35细胞周期的影响 | 第69-71页 |
| 3.4.5 rrSPINK1蛋白对BRL-3A细胞和RH-35细胞凋亡的影响 | 第71页 |
| 3.4.6 rrSPINK1蛋白对BRL-3A细胞和RH-35细胞中SPINK1信号通路等相关基因表达的影响 | 第71-73页 |
| 3.4.7 rrSPINK1蛋白对BRL-3A细胞和RH-35细胞中SPINK1信号通路等相关蛋白表达的影响 | 第73-75页 |
| 3.5 讨论 | 第75-79页 |
| 结论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-91页 |
| 攻读硕士学位期间参加的科研项目和发表论文 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
