| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 前言 | 第12页 |
| 1.2 PEDF的功能与受体 | 第12-13页 |
| 1.3 PEDF结构和功能的关系 | 第13-15页 |
| 1.3.1 PEDF是一个非抑制功能的丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第13页 |
| 1.3.2 PEDF是一个基质蛋白 | 第13-14页 |
| 1.3.3 PEDF的晶体结构 | 第14-15页 |
| 1.4 PEDF与代谢性疾病 | 第15-17页 |
| 1.5 PEDF参与代谢性疾病的机制 | 第17-21页 |
| 1.5.1 PEDF对全身脂质代谢具有显著的影响 | 第17-18页 |
| 1.5.2 PEDF参与胰岛素信号转导 | 第18-19页 |
| 1.5.3 PEDF参与线粒体功能调控 | 第19-20页 |
| 1.5.4 PEDF参与炎症代谢 | 第20-21页 |
| 1.6 鱼类PEDF的研究现状 | 第21-22页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 草鱼PEDF基因的分子特征研究 | 第23-38页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 材料与方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 试验动物 | 第23页 |
| 2.2.2 主要试验仪器和试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.3 试验细胞 | 第24页 |
| 2.2.4 总RNA提取与cDNA的合成 | 第24页 |
| 2.2.5 DNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.6 PEDF基因DNA全长的获得 | 第24-26页 |
| 2.2.7 序列的生物信息学分析 | 第26页 |
| 2.2.8 在体与离体饥饿 | 第26-27页 |
| 2.2.9 Real-time PCR | 第27页 |
| 2.2.10 载体构建 | 第27页 |
| 2.2.11 细胞转染 | 第27-28页 |
| 2.2.12 倒置荧光显微镜观察蛋白的亚细胞定位 | 第28页 |
| 2.2.13 Western Blot | 第28页 |
| 2.2.14 免疫共沉淀 | 第28页 |
| 2.2.15 统计分析 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-36页 |
| 2.3.1 PEDF基因序列分析 | 第28-32页 |
| 2.3.2 PEDF基因的组织差异表达 | 第32-33页 |
| 2.3.3 PEDF在脂肪细胞分化过程中的时序表达 | 第33页 |
| 2.3.4 细胞饥饿试验后PEDF表达的定量检测 | 第33-34页 |
| 2.3.5 在体饥饿试验后PEDF的时序表达 | 第34页 |
| 2.3.6 油酸以及胰岛素处理后PEDF的定量检测 | 第34-35页 |
| 2.3.7 PEDF的亚细胞定位 | 第35-36页 |
| 2.3.8 免疫共沉淀检测PEDF和ATGL间的相互作用 | 第36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 草鱼PEDF蛋白促进甘油三酯水解 | 第38-46页 |
| 3.1 前言 | 第38页 |
| 3.2 材料与方法 | 第38-40页 |
| 3.2.1 试验材料 | 第38-39页 |
| 3.2.2 主要试验仪器和试剂 | 第39页 |
| 3.2.3 原核表达载体的构建 | 第39页 |
| 3.2.4 pET-32a(+)-PEDF重组蛋白的诱导表达 | 第39页 |
| 3.2.5 pET-32a(+)-PEDF重组蛋白的亲和纯化 | 第39-40页 |
| 3.2.6 多克隆抗体的制备 | 第40页 |
| 3.2.7 甘油三酯含量测定 | 第40页 |
| 3.2.8 数据分析 | 第40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-44页 |
| 3.3.1 PEDF重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第40-42页 |
| 3.3.2 目的蛋白的亲和纯化 | 第42页 |
| 3.3.3 肝细胞对融合蛋白的吸收 | 第42-43页 |
| 3.3.4 PEDF对甘油三酯代谢的影响 | 第43页 |
| 3.3.5 PEDF抗体效价检测 | 第43-44页 |
| 3.3.6 PEDF抗体特异性检测 | 第44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-45页 |
| 3.5 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 PEDF改善草鱼中TNFα 诱导的肝脂肪变性 | 第46-54页 |
| 4.1 前言 | 第46页 |
| 4.2 材料与方法 | 第46-47页 |
| 4.2.1 试验动物 | 第46页 |
| 4.2.2 主要试验仪器和试剂 | 第46页 |
| 4.2.3 试验细胞 | 第46-47页 |
| 4.2.4 腹腔注射试验 | 第47页 |
| 4.2.5 甘油三酯含量测定 | 第47页 |
| 4.2.6 Real-time PCR检测相关基因的mRNA的表达 | 第47页 |
| 4.2.7 统计分析 | 第47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-52页 |
| 4.3.1 TNFα 处理后对肝细胞甘油三酯含量的测定 | 第47-49页 |
| 4.3.2 TNFα 处理后对肝细胞基因表达的定量检测 | 第49页 |
| 4.3.3 腹腔注射TNFα 后对草鱼肝脏甘油三酯含量的测定 | 第49-50页 |
| 4.3.4 腹腔注射TNFα 对肝脏中基因表达的定量检测 | 第50-51页 |
| 4.3.5 PPARα 参与TNFα 对甘油三酯水平的调控 | 第51-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-53页 |
| 4.5 小结 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 附录 | 第63-67页 |
| 缩略词 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
