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水稻垩白基因OsBT1的图位克隆与功能研究

博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表第3-5页
摘要第5-6页
abstract第6-7页
英文缩略表第11-13页
第一章 引言第13-29页
    1.1 淀粉的生物合成第13-22页
        1.1.1 淀粉的结构第13-16页
        1.1.2 淀粉合成的分子机制第16-17页
        1.1.3 淀粉合成前体ADPG的形成第17页
        1.1.4 直链淀粉的合成第17-18页
        1.1.5 支链淀粉的合成第18-20页
        1.1.6 淀粉颗粒的起始第20页
        1.1.7 淀粉颗粒膜结构的研究第20-21页
        1.1.8 水稻胚乳中复合淀粉颗粒的形成第21-22页
    1.2 淀粉生物合成的相关调控第22-24页
        1.2.1 淀粉生物合成基因的表达调控第22-23页
        1.2.2 淀粉合成相关酶的协同调节作用第23-24页
        1.2.3 影响淀粉合成的其他基因第24页
    1.3 淀粉合成与稻米品质的相关性研究第24-26页
        1.3.1 淀粉合成与稻米的外观品质第25页
        1.3.2 淀粉合成与稻米的蒸煮食味品质第25-26页
    1.4 BTs蛋白的研究进展第26-28页
        1.4.1 BTs蛋白结构分析第27页
        1.4.2 BTs蛋白的分类第27页
        1.4.3 BTs相关突变体第27-28页
    1.5 本研究的目的和意义第28-29页
第二章 水稻垩白突变体osbt1的表型鉴定第29-40页
    2.1 材料与方法第29-32页
        2.1.1 实验材料第29页
        2.1.2 实验方法第29-32页
            2.1.2.1 种子千粒重的测定第29页
            2.1.2.2 成熟种子自然横断面扫描电镜观察第29-30页
            2.1.2.3 种子灌浆过程中干物质积累测定第30页
            2.1.2.4 胚乳半薄切片制备及淀粉颗粒染色观察第30页
            2.1.2.5 胚乳样品的透射电镜观察第30页
            2.1.2.6 种子中总淀粉含量的测定第30-31页
            2.1.2.7 直链淀粉含量的测定第31页
            2.1.2.8 总蛋白含量的测定第31页
            2.1.2.9 总脂肪含量的测定第31页
            2.1.2.10 米粉支链淀粉链长分布测定第31-32页
            2.1.2.11 RVA谱分析第32页
            2.1.2.12 米粉的糊化温度测定第32页
            2.1.2.13 米粉的尿素膨胀第32页
    2.2 结果与分析第32-39页
        2.2.1 osbt1突变体的胚乳中淀粉的合成存在明显的缺陷第32-35页
        2.2.2 osbt1突变体的胚乳细胞中存在异常的复合淀粉颗粒第35-37页
        2.2.3 osbt1突变体胚乳中淀粉的理化性质发生改变第37-39页
    2.3 小结第39-40页
        2.3.1 osbt1突变体表现垩白表型,胚乳中淀粉的合成存在明显的缺陷第39页
        2.3.2 osbt1突变体胚乳细胞中存在异常的复合淀粉颗粒第39页
        2.3.3 osbt1突变体胚乳淀粉的理化性质发生改变第39-40页
第三章 OsBT1基因的图位克隆与功能互补第40-51页
    3.1 材料与方法第40-44页
        3.1.1 定位群体种植第40页
        3.1.2 实验方法第40-44页
            3.1.2.1 水稻叶片基因组DNA的提取(SDS法)第40-41页
            3.1.2.2 PCR扩增第41页
            3.1.2.3 PCR产物检测第41-42页
            3.1.2.4 分子标记的筛选、开发和基因定位第42页
            3.1.2.5 候选基因的预测和测序第42-43页
            3.1.2.6 转基因载体的构建和遗传转化第43-44页
            3.1.2.7 转基因阳性植株的鉴定第44页
    3.2 结果与分析第44-49页
        3.2.1 osbt1突变体的遗传分析第44页
        3.2.2 OsBT1基因的图位克隆和候选基因鉴定第44-49页
    3.3 小结第49-51页
        3.3.1 OsBT1编码一个新的参与淀粉合成的关键基因第49页
        3.3.2 OsBT1参与水稻胚乳中复合淀粉颗粒的形成第49-51页
第四章 OsBT1功能分析第51-65页
    4.1 材料与方法第51-57页
        4.1.1 实验材料第51页
        4.1.2 RNA提取第51-52页
        4.1.3 第一链cDNA的合成第52-53页
        4.1.4 Real-time PCR第53页
        4.1.5 OsBT1蛋白遗传进化树分析及其同源蛋白的氨基酸序列比对第53页
        4.1.6 OsBT1蛋白结构域和三维结构预测第53-54页
        4.1.7 GUS活性染色第54页
        4.1.8 烟草表皮细胞瞬时侵染方法第54-55页
        4.1.9 烟草原生质体分离及亚细胞定位第55页
        4.1.10 淀粉活性胶染色及酶谱分析第55-57页
    4.2 结果与分析第57-63页
        4.2.1 OsBT1编码一个含有MCF结构域的膜蛋白第57-59页
        4.2.2 OsBT1基因的组织表达模式分析第59-60页
        4.2.3 OsBT1的亚细胞定位分析第60-61页
        4.2.4 淀粉合成相关基因qRT-PCR分析及淀粉合成酶的活性检测第61-63页
    4.3 小结第63-65页
        4.3.1 OsBT1和其同源基因属于很保守的植物所特有的一类基因家族第63页
        4.3.2 OsBT1在胚乳中特异表达第63页
        4.3.3 OsBT1是一个质体定位蛋白第63-64页
        4.3.4 OsBT1基因的突变影响淀粉合成相关基因的表达和相关酶的活性第64-65页
第五章 全文结论与讨论第65-70页
    1 OsBT1是一个新的调控淀粉合成的关键基因第65-66页
    2 OsBT1参与水稻胚乳中复合淀粉颗粒的形成第66页
    3 OsBT1在水稻胚乳中特异表达第66-67页
    4 OsBT1编码一个ADPG转运蛋白第67页
    5 OsBT1是一个质体定位蛋白第67-68页
    6 OsBT1影响淀粉合成相关基因的表达和部分淀粉合成酶的活性第68-69页
    7 本研究的创新之处第69-70页
参考文献第70-82页
附录第82-92页
致谢第92-94页
作者简历第94页

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