| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 第一章 隔孢伏革菌(Peniophora lycii)的植酸酶基因的合成与克隆 | 第9-16页 |
| 1 材料与方法 | 第9-12页 |
| 1.1 引物的设计 | 第9-10页 |
| 1.2 6-磷酸植酸酶(6-PhyA)基因的合成 | 第10-11页 |
| 1.3 6-PhyA毕赤酵母密码子嗜好分析 | 第11页 |
| 1.4 PCR产物的克隆 | 第11-12页 |
| 2 结果 | 第12-15页 |
| 2.1 L6ph密码子的毕赤酵母嗜好分析 | 第12-14页 |
| 2.2 pUC57/6-PhyA转化子质粒 | 第14-15页 |
| 3 本章小结 | 第15-16页 |
| 第二章 含野生型信号肽6-PhyA基因在毕赤酵母中的表达研究 | 第16-28页 |
| 1 材料与方法 | 第16-23页 |
| 1.1 毕赤酵母分泌型表达载体的构建 | 第16-18页 |
| 1.2 毕赤酵母细胞的转化 | 第18-21页 |
| 1.3 6ph在毕赤酵母中的表达 | 第21页 |
| 1.4 植酸酶的生物学性质的测定 | 第21-23页 |
| 2 结果 | 第23-27页 |
| 2.1 毕赤酵母表达载体pPIC9K/6ph的酶切鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2 毕赤酵母转化子的筛选 | 第24-25页 |
| 2.3 6ph在毕赤酵母中表达 | 第25页 |
| 2.4 植酸酶活性的检测 | 第25-27页 |
| 3 本章小结 | 第27-28页 |
| 第三章 含野生型信号6ph基因的表达研究 | 第28-38页 |
| 1 材料与方法 | 第28-34页 |
| 1.1 GPD驱动的植酸酶酵母表达载体的构建 | 第28-32页 |
| 1.2 酿酒酵母细胞的转化与鉴定 | 第32-33页 |
| 1.3 植酸酶活性的鉴定 | 第33-34页 |
| 2 结果 | 第34-37页 |
| 2.1 表达载体pGPD-6ph-1的构建 | 第34-35页 |
| 2.2 pGPD-6ph酿酒酵母表达载体的构建 | 第35-37页 |
| 2.3 W303-1A/pGPD-6ph细胞PCR鉴定 | 第37页 |
| 2.4 植酸酶的表达鉴定 | 第37页 |
| 3 本章小结 | 第37-38页 |
| 第四章 α信号肽引导的6ph基因在毕赤酵母中的表达研究 | 第38-44页 |
| 1 材料与方法 | 第38-40页 |
| 1.1 无野生型信号肽6-磷酸植酸酶基因的PCR扩增 | 第38页 |
| 1.2 pPIC9K/L6ph的构建 | 第38-39页 |
| 1.3 pPIC9K/L6ph阳性转化子的鉴定 | 第39页 |
| 1.4 高拷贝L6ph毕赤酵母的建立 | 第39页 |
| 1.5 毕赤酵母转化子的PCR鉴定 | 第39页 |
| 1.6 植酸酶活性的鉴定 | 第39-40页 |
| 2 结果 | 第40-43页 |
| 2.1 pPIC9K/L6ph转化子质粒的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 2.2 GS115毕赤酵母转化子的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 2.3 植酸酶活性的检测 | 第42-43页 |
| 3 本章小结 | 第43-44页 |
| 第五章 植酸酶的酶学性质的研究 | 第44-48页 |
| 1 材料与方法 | 第44-45页 |
| 1.1 时间对酶活性的影响 | 第44页 |
| 1.2 植酸酶最适反应温度的研究 | 第44页 |
| 1.3 植酸酶最适pH的研究 | 第44页 |
| 1.4 植酸酶热稳定性的研究 | 第44页 |
| 1.5 金属离子对酶活性影响的测定 | 第44-45页 |
| 2 结果 | 第45-48页 |
| 2.1 培养时间对产酶的影响 | 第45页 |
| 2.2 温度对酶活性的影响 | 第45-46页 |
| 2.3 植酸酶的最适pH | 第46页 |
| 2.4 植酸酶的热稳定性 | 第46-47页 |
| 2.5 金属离子对植酸酶的影响 | 第47-48页 |
| 第六章 讨论 | 第48-51页 |
| 1 酵母表达系统 | 第48页 |
| 2 外源性基因在酵母细胞中的高效表达 | 第48-49页 |
| 3 植酸酶的酶学性质 | 第49-50页 |
| 4 未来展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 综述 | 第54-63页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第63-64页 |
