| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 中英文缩略词表 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述及目的意义 | 第17-30页 |
| 1.1 产气荚膜梭菌的生物学特性及危害 | 第17-21页 |
| 1.1.1 产气荚膜梭菌的生物学特性 | 第17-19页 |
| 1.1.2 产气荚膜梭菌的流行病学情况及危害 | 第19-21页 |
| 1.2 产气荚膜梭菌Beta2毒素研究进展 | 第21-23页 |
| 1.2.1 产气荚膜梭菌Beta2毒素的结构和作用机理 | 第21-22页 |
| 1.2.2 产气荚膜梭菌Beta2毒素编码基因 | 第22页 |
| 1.2.3 产气荚膜梭菌Beta2毒素在动物疾病中扮演的角色 | 第22-23页 |
| 1.3 细菌毒素的致细胞损伤机制研究 | 第23-28页 |
| 1.3.1 细菌毒素引起的细胞膜损伤机制研究 | 第24页 |
| 1.3.2 细菌毒素的抑制蛋白质合成机制研究 | 第24-25页 |
| 1.3.3 细菌毒素激活受刺激细胞信号通路损伤机制研究 | 第25-27页 |
| 1.3.4 细菌毒素激活受刺激细胞免疫应答损伤机制研究 | 第27-28页 |
| 1.3.5 细菌毒素的蛋白酶活性损伤机制研究 | 第28页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第28-30页 |
| 第二章 产气荚膜梭菌Beta2毒素在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第30-52页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 实验材料 | 第30-32页 |
| 2.2.1 菌株与载体 | 第30页 |
| 2.2.2 试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2.2.4 常用溶液的配置 | 第32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-41页 |
| 2.3.1 试验设计及技术路线 | 第32页 |
| 2.3.2 产气荚膜梭菌基因组DNA的提取及定量 | 第32-33页 |
| 2.3.3 产气荚膜梭菌Beta2毒素基因的克隆及测序 | 第33-34页 |
| 2.3.4 CPB2基因的密码子优化基因的合成 | 第34页 |
| 2.3.5 引物设计与合成 | 第34-35页 |
| 2.3.6 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组表达质粒的构建及鉴定 | 第35-37页 |
| 2.3.7 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第37页 |
| 2.3.8 rCPB2毒素蛋白在大肠杆菌BL21中表达扩大培养条件的优化 | 第37-38页 |
| 2.3.9 rCPB2毒素蛋白大肠杆菌重组表达菌株的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第38页 |
| 2.3.10 rCPB2毒素蛋白大肠杆菌重组表达菌株的Western blotting检测 | 第38-39页 |
| 2.3.11 镍柱亲和层析纯化rCPB2毒素蛋白 | 第39页 |
| 2.3.12 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白内毒素的去除及检测 | 第39-40页 |
| 2.3.13 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白浓度的测定 | 第40页 |
| 2.3.14 产气荚膜梭菌Beta2重组毒素的细胞毒性初步检测 | 第40-41页 |
| 2.4 结果与分析 | 第41-48页 |
| 2.4.1 产气荚膜梭菌Beta2毒素基因的克隆 | 第41-42页 |
| 2.4.2 产气荚膜梭菌Beta2毒素编码基因的密码子优化 | 第42页 |
| 2.4.3 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组表达质粒的构建、表达及纯化结果 | 第42-47页 |
| 2.4.4 产气荚膜梭菌Beta2重组毒素的内毒素含量检测 | 第47-48页 |
| 2.4.5 产气荚膜梭菌Beta2重组毒素的细胞毒性初步检测 | 第48页 |
| 2.5 讨论 | 第48-52页 |
| 第三章 产气荚膜梭菌Beta2毒素单克隆抗体的制备及筛选 | 第52-63页 |
| 3.1 引言 | 第52页 |
| 3.2 实验材料 | 第52-54页 |
| 3.2.1 菌株与载体 | 第52页 |
| 3.2.2 试剂及溶液配制 | 第52-53页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第53-54页 |
| 3.3 实验方法 | 第54-57页 |
| 3.3.1 试验设计及技术路线 | 第54页 |
| 3.3.2 产气荚膜梭菌Beta2毒素单克隆抗体的制备 | 第54页 |
| 3.3.3 单克隆抗体检测用抗原蛋白的制备 | 第54-55页 |
| 3.3.4 产气荚膜梭菌Beta2毒素小鼠单克隆抗体的Western Blot筛选 | 第55页 |
| 3.3.5 产气荚膜梭菌Beta2毒素小鼠单克隆抗体的ELISA筛选 | 第55-56页 |
| 3.3.6 产气荚膜梭菌Beta2毒素小鼠单克隆抗体的免疫荧光检测筛选 | 第56页 |
| 3.3.7 产气荚膜梭菌Beta2毒素小鼠单克隆抗体的毒素中和检测筛选 | 第56-57页 |
| 3.4 实验结果 | 第57-62页 |
| 3.4.1 产气荚膜梭菌Beta2毒素单克隆抗体融合细胞株的制备 | 第57-58页 |
| 3.4.2 产气荚膜梭菌Beta2毒素小鼠单克隆抗体的Western Blot筛选 | 第58-59页 |
| 3.4.3 产气荚膜梭菌Beta2毒素小鼠单克隆抗体的ELISA筛选 | 第59-60页 |
| 3.4.4 产气荚膜梭菌Beta2毒素小鼠单克隆抗体的免疫荧光检测筛选 | 第60-61页 |
| 3.4.5 产气荚膜梭菌Beta2毒素小鼠单克隆抗体的毒素中和筛选 | 第61-62页 |
| 3.5 讨论 | 第62-63页 |
| 第四章 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白作用结肠粘膜上皮细胞株的损伤机制研究 | 第63-87页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 实验材料 | 第63-65页 |
| 4.2.1 菌株与载体 | 第63-64页 |
| 4.2.2 试剂及溶液配制 | 第64页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第64-65页 |
| 4.3 实验方法 | 第65-70页 |
| 4.3.1 试验设计及技术路线 | 第65页 |
| 4.3.2 细胞系的培养 | 第65页 |
| 4.3.3 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白的制备及纯化 | 第65页 |
| 4.3.4 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白内毒素的去除及检测 | 第65-66页 |
| 4.3.5 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白诱导NCM460细胞损伤形态学观察 | 第66页 |
| 4.3.6 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白诱导NCM460细胞凋亡及坏死的检测 | 第66-67页 |
| 4.3.7 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白诱导NCM460细胞线粒体膜电位改变的检测 | 第67-68页 |
| 4.3.8 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白诱导NCM460细胞产生ROS含量检测 | 第68-69页 |
| 4.3.9 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白诱导NCM460细胞产生NO含量检测 | 第69页 |
| 4.3.10 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白诱导NCM460细胞凋亡相关细胞因子表达的Western相关实验 | 第69-70页 |
| 4.3.11 数据统计分析 | 第70页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第70-83页 |
| 4.4.1 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白内毒素的去除及检测 | 第70页 |
| 4.4.2 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白诱导结肠黏膜上皮细胞损伤形态学观察 | 第70-71页 |
| 4.4.3 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白诱导结肠黏膜上皮细胞的凋亡 | 第71-73页 |
| 4.4.4 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白诱导结肠黏膜上皮细胞线粒体膜损伤 | 第73-75页 |
| 4.4.5 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白诱导结肠黏膜上皮细胞产生ROS的检测结果 | 第75-77页 |
| 4.4.6 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白诱导结肠黏膜上皮细胞产生胞内NO的检测结果 | 第77-79页 |
| 4.4.7 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白诱导结肠黏膜上皮细胞BCL-2家族凋亡相关蛋白的表达 | 第79-81页 |
| 4.4.8 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白诱导结肠黏膜上皮细胞Caspase依赖途径的细胞凋亡 | 第81-83页 |
| 4.5 讨论 | 第83-87页 |
| 第五章 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白刺激小鼠产生细胞因子的研究 | 第87-100页 |
| 5.1 引言 | 第87-88页 |
| 5.2 实验材料 | 第88-89页 |
| 5.2.1 菌株与细胞 | 第88页 |
| 5.2.2 实验动物 | 第88页 |
| 5.2.3 试剂及溶液配制 | 第88页 |
| 5.2.4 主要仪器 | 第88-89页 |
| 5.3 实验方法 | 第89-90页 |
| 5.3.1 试验设计及技术路线 | 第89页 |
| 5.3.2 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白的制备 | 第89页 |
| 5.3.3 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白刺激成年小鼠实验分组及处理 | 第89页 |
| 5.3.4 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白刺激乳鼠实验分组及处理 | 第89-90页 |
| 5.3.5 rCPB2蛋白刺激小鼠后的血清及组织样品中细胞因子的蛋白芯片检测 | 第90页 |
| 5.3.6 数据统计分析 | 第90页 |
| 5.4 结果与分析 | 第90-96页 |
| 5.4.1 产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白作用小鼠临床剖检观察结果 | 第90-91页 |
| 5.4.2 尾静脉注射给予产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白对成年小鼠血清及肠组织中细胞因子产生的影响 | 第91-93页 |
| 5.4.3 胃肠道给予产气荚膜梭菌Beta2毒素重组蛋白对乳鼠血清及肠组织中细胞因子产生的影响 | 第93-96页 |
| 5.5 讨论 | 第96-100页 |
| 第六章 结论与展望 | 第100-102页 |
| 6.1 结论 | 第100-101页 |
| 6.2 展望 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 个人简介 | 第111-112页 |
