缩略词 | 第4-5页 |
摘要 | 第5-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
第一章 绪论 | 第11-31页 |
1.1 流感病毒概述 | 第11-27页 |
1.1.1 流感病毒分类和命名 | 第13-14页 |
1.1.2 A型流感病毒的分子学特征 | 第14-17页 |
1.1.3 A型流感病毒的复制周期 | 第17-20页 |
1.1.4 宿主对A型流感病毒的免疫应答 | 第20-24页 |
1.1.5 与A型流感病毒复制相关的宿主蛋白 | 第24-25页 |
1.1.6 抗A型流感病毒研究进展 | 第25-27页 |
1.2 NDRG1概述 | 第27-31页 |
1.2.1 NDRG1分子生物学特性 | 第27-28页 |
1.2.2 NDRG1生物学功能 | 第28-29页 |
1.2.3 NDRG1参与的主要信号通路 | 第29-31页 |
第二章 流感病毒诱导A549细胞内的NDRG1显著表达 | 第31-45页 |
2.1 实验材料与试剂 | 第31-33页 |
2.1.1 细胞与毒株 | 第31页 |
2.1.2 实验仪器 | 第31-32页 |
2.1.3 主要试剂和试剂盒 | 第32页 |
2.1.4 需要配置的试剂 | 第32-33页 |
2.2 实验方法 | 第33-42页 |
2.2.1 细胞培养 | 第33-35页 |
2.2.2 SPF鸡胚扩增禽流感病毒 | 第35页 |
2.2.3 血细胞凝集(HA)实验 | 第35-36页 |
2.2.4 流感病毒空斑测定实验 | 第36-37页 |
2.2.5 01B毒株感染A549细胞 | 第37-38页 |
2.2.6 荧光定量PCR(RT-qPCR) | 第38-39页 |
2.2.7 蛋白印迹(Western blot) | 第39-42页 |
2.2.8 数据处理 | 第42页 |
2.3 实验结果 | 第42-43页 |
2.3.1 流感病毒感染A549细胞后ndrg1基因的mRNA表达情况 | 第42-43页 |
2.3.2 流感病毒感染A549细胞后NDRG1蛋白表达情况 | 第43页 |
2.4 讨论 | 第43-45页 |
第三章 抑制(Knockdown)NDRG1的表达降低了流感病毒在细胞内的复制 | 第45-61页 |
3.1 实验原理 | 第45-49页 |
3.1.1 RNAi简介 | 第45-47页 |
3.1.2 pLKO.1 载体简介 | 第47-49页 |
3.2 实验材料与试剂 | 第49-51页 |
3.2.1 细胞与毒株 | 第49页 |
3.2.2 实验仪器 | 第49-50页 |
3.2.3 主要试剂和试剂盒 | 第50页 |
3.2.4 载体 | 第50页 |
3.2.5 需要配制的试剂 | 第50-51页 |
3.3 实验方法 | 第51-57页 |
3.3.1 pLKO.1-TRC克隆载体扩增 | 第51-53页 |
3.3.2 设计合成靶向ndrg1基因的寡核苷酸序列 | 第53-54页 |
3.3.3 构建shRNA表达载体 | 第54-55页 |
3.3.4 低表达A549细胞内NDRG1 | 第55-56页 |
3.3.5 检测禽流感病毒在NDRG1蛋白低表达细胞内的复制情况 | 第56页 |
3.3.6 数据处理 | 第56-57页 |
3.4 实验结果 | 第57-59页 |
3.4.1 pLKO.1-TRC克隆载体扩增培养阳性鉴定 | 第57页 |
3.4.2 构建shRNA表达载体的阳性鉴定 | 第57-58页 |
3.4.3 流感病毒在NDRG1蛋白低表达细胞内的复制情况 | 第58-59页 |
3.5 讨论 | 第59-61页 |
第四章 过表达NDRG1促进了流感病毒在细胞内的复制 | 第61-71页 |
4.1 实验材料与试剂 | 第61-62页 |
4.1.1 细胞与毒株 | 第61页 |
4.1.2 实验仪器 | 第61页 |
4.1.3 主要试剂和试剂盒 | 第61-62页 |
4.1.4 载体 | 第62页 |
4.2 实验方法 | 第62-66页 |
4.2.1 pEGFP-C1载体简介 | 第62-63页 |
4.2.2 构建pEGFP-C1-NDRG1表达载体 | 第63-65页 |
4.2.3 A549细胞内过表达NDRG1 | 第65页 |
4.2.4 禽流感病毒在NDRG1蛋白过表达细胞内的复制情况 | 第65页 |
4.2.5 数据处理 | 第65-66页 |
4.3 实验结果 | 第66-70页 |
4.3.1 pEGFP-C1-NDRG1表达载体阳性鉴定 | 第66-68页 |
4.3.2 细胞内NDRG1蛋白过表达情况 | 第68页 |
4.3.3 流感病毒在过表达NDRG1蛋白细胞内的复制情况 | 第68-70页 |
4.4 讨论 | 第70-71页 |
第五章 NDRG1蛋白促进流感病毒复制的作用机制 | 第71-76页 |
5.1 实验材料和试剂 | 第71页 |
5.2 实验方法 | 第71-73页 |
5.2.1 pcDNA3.1(His)载体简介 | 第71页 |
5.2.2 构建pcDNA3.1(His)-IKKβ 表达载体 | 第71-72页 |
5.2.3 检测细胞内IFNβ、IL-8 和NP基因的表达水平 | 第72-73页 |
5.3 实验结果 | 第73-75页 |
5.3.1 病毒感染低表达NDRG1细胞后IFN-β 和IL-8 的表达情况 | 第73页 |
5.3.2 病毒感染过表达NDRG1细胞后IFN-β 和IL-8 的表达情况 | 第73-74页 |
5.3.3 不同表达载体对细胞内流感病毒的复制影响 | 第74-75页 |
5.4 讨论 | 第75-76页 |
结论 | 第76-77页 |
参考文献 | 第77-85页 |
硕士期间发表的论文及科研成果 | 第85-86页 |
致谢 | 第86页 |