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NDRG1蛋白促进禽流感H5N1亚型病毒在细胞内复制

缩略词第4-5页
摘要第5-6页
ABSTRACT第6-7页
第一章 绪论第11-31页
    1.1 流感病毒概述第11-27页
        1.1.1 流感病毒分类和命名第13-14页
        1.1.2 A型流感病毒的分子学特征第14-17页
        1.1.3 A型流感病毒的复制周期第17-20页
        1.1.4 宿主对A型流感病毒的免疫应答第20-24页
        1.1.5 与A型流感病毒复制相关的宿主蛋白第24-25页
        1.1.6 抗A型流感病毒研究进展第25-27页
    1.2 NDRG1概述第27-31页
        1.2.1 NDRG1分子生物学特性第27-28页
        1.2.2 NDRG1生物学功能第28-29页
        1.2.3 NDRG1参与的主要信号通路第29-31页
第二章 流感病毒诱导A549细胞内的NDRG1显著表达第31-45页
    2.1 实验材料与试剂第31-33页
        2.1.1 细胞与毒株第31页
        2.1.2 实验仪器第31-32页
        2.1.3 主要试剂和试剂盒第32页
        2.1.4 需要配置的试剂第32-33页
    2.2 实验方法第33-42页
        2.2.1 细胞培养第33-35页
        2.2.2 SPF鸡胚扩增禽流感病毒第35页
        2.2.3 血细胞凝集(HA)实验第35-36页
        2.2.4 流感病毒空斑测定实验第36-37页
        2.2.5 01B毒株感染A549细胞第37-38页
        2.2.6 荧光定量PCR(RT-qPCR)第38-39页
        2.2.7 蛋白印迹(Western blot)第39-42页
        2.2.8 数据处理第42页
    2.3 实验结果第42-43页
        2.3.1 流感病毒感染A549细胞后ndrg1基因的mRNA表达情况第42-43页
        2.3.2 流感病毒感染A549细胞后NDRG1蛋白表达情况第43页
    2.4 讨论第43-45页
第三章 抑制(Knockdown)NDRG1的表达降低了流感病毒在细胞内的复制第45-61页
    3.1 实验原理第45-49页
        3.1.1 RNAi简介第45-47页
        3.1.2 pLKO.1 载体简介第47-49页
    3.2 实验材料与试剂第49-51页
        3.2.1 细胞与毒株第49页
        3.2.2 实验仪器第49-50页
        3.2.3 主要试剂和试剂盒第50页
        3.2.4 载体第50页
        3.2.5 需要配制的试剂第50-51页
    3.3 实验方法第51-57页
        3.3.1 pLKO.1-TRC克隆载体扩增第51-53页
        3.3.2 设计合成靶向ndrg1基因的寡核苷酸序列第53-54页
        3.3.3 构建shRNA表达载体第54-55页
        3.3.4 低表达A549细胞内NDRG1第55-56页
        3.3.5 检测禽流感病毒在NDRG1蛋白低表达细胞内的复制情况第56页
        3.3.6 数据处理第56-57页
    3.4 实验结果第57-59页
        3.4.1 pLKO.1-TRC克隆载体扩增培养阳性鉴定第57页
        3.4.2 构建shRNA表达载体的阳性鉴定第57-58页
        3.4.3 流感病毒在NDRG1蛋白低表达细胞内的复制情况第58-59页
    3.5 讨论第59-61页
第四章 过表达NDRG1促进了流感病毒在细胞内的复制第61-71页
    4.1 实验材料与试剂第61-62页
        4.1.1 细胞与毒株第61页
        4.1.2 实验仪器第61页
        4.1.3 主要试剂和试剂盒第61-62页
        4.1.4 载体第62页
    4.2 实验方法第62-66页
        4.2.1 pEGFP-C1载体简介第62-63页
        4.2.2 构建pEGFP-C1-NDRG1表达载体第63-65页
        4.2.3 A549细胞内过表达NDRG1第65页
        4.2.4 禽流感病毒在NDRG1蛋白过表达细胞内的复制情况第65页
        4.2.5 数据处理第65-66页
    4.3 实验结果第66-70页
        4.3.1 pEGFP-C1-NDRG1表达载体阳性鉴定第66-68页
        4.3.2 细胞内NDRG1蛋白过表达情况第68页
        4.3.3 流感病毒在过表达NDRG1蛋白细胞内的复制情况第68-70页
    4.4 讨论第70-71页
第五章 NDRG1蛋白促进流感病毒复制的作用机制第71-76页
    5.1 实验材料和试剂第71页
    5.2 实验方法第71-73页
        5.2.1 pcDNA3.1(His)载体简介第71页
        5.2.2 构建pcDNA3.1(His)-IKKβ 表达载体第71-72页
        5.2.3 检测细胞内IFNβ、IL-8 和NP基因的表达水平第72-73页
    5.3 实验结果第73-75页
        5.3.1 病毒感染低表达NDRG1细胞后IFN-β 和IL-8 的表达情况第73页
        5.3.2 病毒感染过表达NDRG1细胞后IFN-β 和IL-8 的表达情况第73-74页
        5.3.3 不同表达载体对细胞内流感病毒的复制影响第74-75页
    5.4 讨论第75-76页
结论第76-77页
参考文献第77-85页
硕士期间发表的论文及科研成果第85-86页
致谢第86页

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