| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 前言 | 第7-17页 |
| 1.1 瘦肉精概述 | 第7页 |
| 1.2 瘦肉精检测方法 | 第7-10页 |
| 1.2.1 色谱分析法 | 第8页 |
| 1.2.2 免疫学方法 | 第8-10页 |
| 1.3 适配子 | 第10-12页 |
| 1.3.1 适配子概述 | 第10页 |
| 1.3.2 适配子应用 | 第10-12页 |
| 1.4 SELEX筛选技术 | 第12-16页 |
| 1.4.1 SELEX技术概述 | 第12-13页 |
| 1.4.2 基于固定靶标的SELEX技术 | 第13页 |
| 1.4.3 基于游离靶标的SELEX技术 | 第13-16页 |
| 1.5 本课题的立题意义及研究内容 | 第16-17页 |
| 2 实验材料与方法 | 第17-24页 |
| 2.1 主要试剂 | 第17页 |
| 2.2 主要仪器 | 第17页 |
| 2.3 随机ssDNA文库和引物的构建 | 第17-18页 |
| 2.4 Fe_3O_4磁性纳米颗粒制备与修饰 | 第18页 |
| 2.4.1 氨基化Fe_3O_4磁性纳米颗粒制备与表征 | 第18页 |
| 2.4.2 亲和素包被氨基化磁珠 | 第18页 |
| 2.5 体外筛选三种瘦肉精的适配子 | 第18-21页 |
| 2.5.1 文库固定化SELEX筛选流程 | 第18-19页 |
| 2.5.2 文库固定与孵育 | 第19页 |
| 2.5.3 PCR扩增 | 第19-20页 |
| 2.5.4 单链的制备和纯化 | 第20页 |
| 2.5.5 循环筛选 | 第20-21页 |
| 2.5.6 克隆测序及序列分析 | 第21页 |
| 2.6 适配子亲和性和特异性验证 | 第21-23页 |
| 2.6.1 亲和性和特异性验证原理 | 第21-22页 |
| 2.6.2 氧化石墨烯吸附条件优化 | 第22页 |
| 2.6.3 适配子亲和性验证 | 第22页 |
| 2.6.4 适配子特异性验证 | 第22-23页 |
| 2.7 荧光分析法检测瘦肉精 | 第23-24页 |
| 3 结果与讨论 | 第24-42页 |
| 3.1 氨基化磁珠合成及修饰 | 第24-25页 |
| 3.1.1 氨基化磁珠表征 | 第24页 |
| 3.1.2 亲和素包被磁珠 | 第24-25页 |
| 3.2 三种瘦肉精的适配子筛选 | 第25-28页 |
| 3.2.1 ssDNA文库固定 | 第25页 |
| 3.2.2 PCR退火温度的优化 | 第25-26页 |
| 3.2.3 PCR扩增 | 第26-28页 |
| 3.3 适配子序列分析 | 第28-30页 |
| 3.3.1 盐酸克伦特罗适配子序列分析 | 第28-29页 |
| 3.3.2 沙丁胺醇适配子序列分析 | 第29-30页 |
| 3.3.3 莱克多巴胺适配子序列分析 | 第30页 |
| 3.4 适配子亲和性验证 | 第30-35页 |
| 3.4.1 氧化石墨烯用量优化 | 第30-31页 |
| 3.4.2 氧化石墨烯吸附靶标验证 | 第31-32页 |
| 3.4.3 盐酸克伦特罗适配子亲和性验证 | 第32-33页 |
| 3.4.4 沙丁胺醇适配子亲和性验证 | 第33-34页 |
| 3.4.5 莱克多巴胺适配子亲和性验证 | 第34-35页 |
| 3.5 适配子特异性验证 | 第35-37页 |
| 3.5.1 盐酸克伦特罗适配子特异性验证 | 第35-36页 |
| 3.5.2 沙丁胺醇适配子特异性验证 | 第36-37页 |
| 3.5.3 莱克多巴胺适配子特异性验证 | 第37页 |
| 3.6 适配子结构分析 | 第37-38页 |
| 3.7 基于适配子识别的荧光分析检测 | 第38-42页 |
| 3.7.1 荧光分析法检测盐酸克伦特罗 | 第38-39页 |
| 3.7.2 荧光分析法检测沙丁胺醇 | 第39-40页 |
| 3.7.3 荧光分析法检测莱克多巴胺 | 第40-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-44页 |
| 主要结论 | 第42页 |
| 展望 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-52页 |
| 附录一：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52-53页 |
| 附录二：序列表 | 第53-58页 |