| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1.1 昆虫肠道免疫研究 | 第13-21页 |
| 1.1.1 昆虫肠道的结构 | 第14页 |
| 1.1.2 昆虫的肠道免疫 | 第14-21页 |
| 1.2 昆虫肽聚糖识别蛋白研究进展 | 第21-31页 |
| 1.2.1 病原相关分子模式(PAMP) | 第22-23页 |
| 1.2.2 模式识别受体(PRRs) | 第23-24页 |
| 1.2.3 肽聚糖识别蛋白(PGRPs) | 第24页 |
| 1.2.4 PGRPs的结构 | 第24-25页 |
| 1.2.5 PGRPs的功能 | 第25-30页 |
| 1.2.6 PGRPs研究中存在的问题 | 第30-31页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第31-33页 |
| 第二章 细菌对家蚕中肠转录组的调控 | 第33-58页 |
| 2.1 前言 | 第33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-34页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第33-34页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-43页 |
| 2.3.1 喂食感染和存活率测试 | 第34页 |
| 2.3.2 RNA提取和cDNA合成 | 第34-35页 |
| 2.3.3 mRNA的富集 | 第35-37页 |
| 2.3.4 RNA-seq文库的构建 | 第37-39页 |
| 2.3.5 文库的测序 | 第39页 |
| 2.3.6 原始数据的初步筛选与Clean Reads的质量检测 | 第39-40页 |
| 2.3.7 Reads的从头组装以及Unigene的注释 | 第40页 |
| 2.3.8 差异表达分析 | 第40页 |
| 2.3.9 实时定量PCR验证 | 第40-42页 |
| 2.3.10 肠道内过氧化氢和一氧化氮浓度测定 | 第42-43页 |
| 2.3.11 肠道内细菌数目的变化和消化液抗菌活性测试 | 第43页 |
| 2.4 结果 | 第43-56页 |
| 2.4.1 喂食感染后家蚕幼虫存活率实验 | 第43-44页 |
| 2.4.2 家蚕中肠转录组的测序和分析 | 第44-48页 |
| 2.4.3 细菌感染后家蚕幼虫中肠的免疫反应 | 第48-53页 |
| 2.4.4 ROS在细菌感染家蚕幼虫中肠的前期扮演着清除入侵细菌的功能 | 第53-54页 |
| 2.4.5 家蚕肠道内细菌数目变化和肠道消化液的抗菌活性分析 | 第54-56页 |
| 2.5 讨论与小结 | 第56-58页 |
| 2.5.1 家蚕肠道内Toll途径以及其它免疫途径 | 第56页 |
| 2.5.2 家蚕抗菌肽的合成途径及所感染的细菌类型与抗菌肽之间的对应关系 | 第56-57页 |
| 2.5.3 家蚕肠道免疫相关分子功能研究 | 第57页 |
| 2.5.4 转录组测序的偏好性 | 第57-58页 |
| 第三章 家蚕肽聚糖识别蛋白PGRP-S5的重组表达与鉴定 | 第58-79页 |
| 3.1 前言 | 第58页 |
| 3.2 实验材料 | 第58-60页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第58-59页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第59-60页 |
| 3.2.3 主要试剂配方 | 第60页 |
| 3.3 实验方法 | 第60-69页 |
| 3.3.1 细菌感染和组织提取 | 第60-61页 |
| 3.3.2 RNA提取和cDNA合成 | 第61页 |
| 3.3.3 利用qRT-PCR分析家蚕PGRP-S5 mRNA水平表达量变化 | 第61-62页 |
| 3.3.4 家蚕PGRP-S5的重组表达和纯化 | 第62-66页 |
| 3.3.5 重组PGRP-S5的Western blot检测和质谱分析 | 第66-67页 |
| 3.3.6 重组PGRP-S5和PGs的结合实验 | 第67-68页 |
| 3.3.7 重组PGRP-S5对细菌的凝集作用 | 第68页 |
| 3.3.8 重组PGRP-S5酰胺酶活性测试 | 第68页 |
| 3.3.9 重组PGRP-S5抗菌活性测试 | 第68页 |
| 3.3.10 重组PGRP-S5对酚氧化酶级联反应的影响 | 第68-69页 |
| 3.4 结果 | 第69-77页 |
| 3.4.1 家蚕PGRP-S5序列分析 | 第69-72页 |
| 3.4.2 细菌感染后家蚕PGRP-S5的表达谱 | 第72页 |
| 3.4.3 家蚕PGRP-S5的重组表达和鉴定 | 第72-73页 |
| 3.4.4 家蚕PGRP-S5可结合细菌肽聚糖并引发细菌凝集 | 第73-74页 |
| 3.4.5 家蚕PGRP-S5的酰胺酶活性和抗菌活性测试 | 第74-77页 |
| 3.4.6 家蚕PGRP-S5参与酚氧化酶原激活 | 第77页 |
| 3.5 讨论与小结 | 第77-79页 |
| 3.5.1 PGRP-S5在家蚕体内是否可以参与抗菌肽的合成？ | 第78页 |
| 3.5.2 PGRP-S5在家蚕肠道内扮演什么角色？ | 第78页 |
| 3.5.3 PGRP-S5的酰胺酶活性与抗菌活性的关系 | 第78-79页 |
| 第四章 家蚕肽聚糖识别蛋白PGRP-S5突变型PGRP-S5_C177S的功能分析 | 第79-101页 |
| 4.1 前言 | 第79页 |
| 4.2 实验材料 | 第79-80页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第79-80页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第80页 |
| 4.2.3 主要试剂配方 | 第80页 |
| 4.3 实验方法 | 第80-90页 |
| 4.3.1 PGRP-S5三维结构模型构建 | 第80-81页 |
| 4.3.2 突变型PGRP-S5_C177S的重组表达 | 第81-84页 |
| 4.3.3 突变型PGRP-S5_C177S的鉴定 | 第84-86页 |
| 4.3.4 PGRP-S5_C177S和PGs的结合以及对细菌凝集作用的测试 | 第86-87页 |
| 4.3.5 酰胺酶活性测试 | 第87页 |
| 4.3.6 抗菌活性测试 | 第87页 |
| 4.3.7 酚氧化酶活性测试 | 第87页 |
| 4.3.8 血淋巴中抗菌肽蛋白水平变化的检测 | 第87-88页 |
| 4.3.9 血淋巴中抗菌肽mRNA水平变化的检测 | 第88-90页 |
| 4.4 结果 | 第90-99页 |
| 4.4.1 家蚕PGRP-S5活性位点和结构预测 | 第90-92页 |
| 4.4.2 家蚕PGRP-S5_C177S的重组表达、纯化和鉴定 | 第92-93页 |
| 4.4.3 家蚕PGRP-S5_C177S可结合细菌肽聚糖并能够引发细菌凝集 | 第93-94页 |
| 4.4.4 C177位点为家蚕PGRP-S5酰胺酶活性必需位点 | 第94-95页 |
| 4.4.5 家蚕PGRP-S5杀菌活性依赖于其酰胺酶活性 | 第95-96页 |
| 4.4.6 家蚕PGRP-S5的酰胺酶活性对proPO途径的激活是必需的 | 第96-97页 |
| 4.4.7 家蚕PGRP-S5可依赖其酰胺酶活性下调抗菌肽的合成 | 第97-99页 |
| 4.5 讨论与小结 | 第99-101页 |
| 第五章 本研究主要结论以及创新性 | 第101-103页 |
| 5.1 本研究主要结论 | 第101-102页 |
| 5.2 本研究主要创新性 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-119页 |
| 附录 | 第119-121页 |
| 缩略词 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
| 作者简介 | 第124页 |
