| 摘要 | 第1-8页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第9-21页 |
| 1 哺乳动物的毛色形成 | 第9-15页 |
| ·黑色素细胞的发育 | 第9-12页 |
| ·黑色素的合成 | 第12-13页 |
| ·黑色素合成的信号转导途径 | 第13-15页 |
| 2 关于MC1R基因的研究 | 第15-19页 |
| ·MC1R调控毛色形成的主要基因 | 第15-16页 |
| ·MC1R调控毛色形成的作用机制 | 第16-17页 |
| ·MC1R在皮肤癌中的重要作用 | 第17-18页 |
| ·MC1R与免疫系统 | 第18-19页 |
| 3 动物转基因技术 | 第19-21页 |
| 实验一 羊驼MC1R转基因载体的构建 | 第21-34页 |
| 1 实验材料 | 第21-22页 |
| ·主要实验材料 | 第21页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·主要试剂配制 | 第22页 |
| 2 实验方法 | 第22-28页 |
| ·羊驼皮肤组织总RNA的提取及cDNA的合成 | 第22-23页 |
| ·羊驼MC1R基因的扩增和胶回收 | 第23-24页 |
| ·PCR胶回收产物的克隆 | 第24-26页 |
| ·羊驼MC1R基因表达载体的构建 | 第26-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-32页 |
| ·羊驼皮肤组织总RNA质量鉴定 | 第28-29页 |
| ·羊驼MC1R基因的扩增电泳结果 | 第29-30页 |
| ·羊驼MC1R基因与T载体重组质粒测序结果 | 第30页 |
| ·慢病毒载体pLV.ExBi.P和MC1R克隆质粒双酶切电泳结果 | 第30-31页 |
| ·慢病毒载体pLV.ExBi.P和MC1R重组质粒测序结果 | 第31-32页 |
| 4 小结 | 第32-34页 |
| 实验二 基因水平鉴定羊驼MC1R转基因载体的表达效果 | 第34-48页 |
| 1 实验材料 | 第34-35页 |
| ·主要实验材料 | 第34页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·主要试剂配制 | 第35页 |
| 2 实验方法 | 第35-40页 |
| ·菌液无内毒素质粒DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·绵羊黑色素细胞的培养和转染 | 第36-37页 |
| ·绵羊黑色素细胞总RNA的提取及cDNA的合成 | 第37-38页 |
| ·MC1R转基因载体在绵羊黑色素细胞内基因表达水平 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-47页 |
| ·绵羊黑色素细胞转染结果 | 第40-42页 |
| ·绵羊黑色素细胞总RNA质量鉴定 | 第42页 |
| ·荧光定量PCR结果 | 第42-44页 |
| ·重组质粒的转染对MC1R,MITF,TYR,TYRP2基因的mRNA的表达量的影响 | 第44-47页 |
| 4 小结 | 第47-48页 |
| 实验三 蛋白水平鉴定羊驼MC1R转基因载体的表达效果 | 第48-56页 |
| 1 实验材料 | 第48-49页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·主要耗材和试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·主要试剂配制 | 第48-49页 |
| 2 实验方法 | 第49-52页 |
| ·绵羊黑色素细胞总蛋白的提取 | 第49-50页 |
| ·考马斯亮蓝检测总蛋白 | 第50-51页 |
| ·SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-55页 |
| ·绵羊黑色素细胞的总蛋白条带图 | 第52页 |
| ·Western blot检测不同转染组的蛋白表达水平 | 第52-55页 |
| 4 小结 | 第55-56页 |
| 全文讨论 | 第56-58页 |
| 全文结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| Abstract | 第65-67页 |
| 附录 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
