摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-7页 |
英文缩略语索引 | 第7-9页 |
目录 | 第9-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-21页 |
1 Dps 概述 | 第13页 |
2 Dps 蛋白结构 | 第13-16页 |
·Dps 蛋白基因 | 第13-14页 |
·Dps 蛋白折叠和四级结构 | 第14页 |
·Dps 蛋白的亚铁氧化酶中心 | 第14-15页 |
·Dps 蛋白的 DNA 结合标签 | 第15-16页 |
3 Dps 蛋白的功能 | 第16-18页 |
·类铁蛋白功能 | 第16页 |
·DNA 结合活性 | 第16-17页 |
·Dps 蛋白与细菌的毒性 | 第17页 |
·大肠杆菌 Dps 蛋白的其他功能 | 第17-18页 |
·其他细菌 Dps 蛋白的功能 | 第18页 |
4 Dps 蛋白的自组装过程 | 第18-19页 |
5 Dps 蛋白的研究意义 | 第19-21页 |
·Dps 蛋白在生物纳米技术中的研究意义 | 第19页 |
·Dps 蛋白在免疫治疗方面的研究意义 | 第19-21页 |
第二章 大肠杆菌 DPS 蛋白的基因克隆、蛋白表达及纯化 | 第21-40页 |
1 实验材料与方法 | 第21-33页 |
·材料 | 第21-27页 |
·菌株与载体 | 第21页 |
·仪器设备 | 第21-22页 |
·主要试剂 | 第22-23页 |
·主要试剂盒 | 第23页 |
·培养基及溶液配制 | 第23-27页 |
·实验方法 | 第27-33页 |
·引物设计与合成 | 第27页 |
·大肠杆菌基因组提取 | 第27页 |
·Dps-6His 基因的扩增与纯化 | 第27-28页 |
·pBV-Dps-6His 原核表达载体的构建与鉴定 | 第28-31页 |
·Dps-6His 蛋白表达形式的鉴定 | 第31页 |
·Dps-6His 蛋白的纯化 | 第31-32页 |
·Dps-6His 蛋白的 Western Blotting 检测 | 第32-33页 |
2 结果与讨论 | 第33-39页 |
·Dps-6His 基因的扩增 | 第33-34页 |
·原核表达载体 pBV-Dps-6His 的构建及鉴定 | 第34-37页 |
·重组子的转化与筛选 | 第34页 |
·菌体 PCR 鉴定 | 第34-35页 |
·目的蛋白诱导表达鉴定 | 第35-36页 |
·重组表达载体双酶切鉴定 | 第36页 |
·测序分析 | 第36-37页 |
·Dps-6his 蛋白表达形式的鉴定 | 第37-38页 |
·Dps-6His 蛋白的纯化 | 第38页 |
·Dps-6His 蛋白的 Western Blotting 检测 | 第38-39页 |
小结 | 第39-40页 |
第三章 大肠杆菌 DPS 融合表达载体的构建及融合蛋白表达纯化 | 第40-52页 |
1 实验材料与方法 | 第40-44页 |
·材料 | 第40页 |
·菌株与载体 | 第40页 |
·仪器设备 | 第40页 |
·主要试剂 | 第40页 |
·主要试剂盒 | 第40页 |
·培养基及溶液配制 | 第40页 |
·实验方法 | 第40-44页 |
·引物设计与合成 | 第40-41页 |
·pBV-Dps-6His 质粒的提取 | 第41页 |
·Dps-2X-6His 基因的扩增与纯化 | 第41-42页 |
·pBV-Dps-2X-6His 原核表达载体的构建与鉴定 | 第42-43页 |
·Dps-2X-6His 蛋白表达形式的鉴定 | 第43-44页 |
·Dps-2X-6His 蛋白的纯化 | 第44页 |
·Dps-2X-6His 蛋白的 Western Blotting 检测 | 第44页 |
2 结果与讨论 | 第44-51页 |
·Dps-2X-6His 基因的扩增 | 第44-45页 |
·原核表达载体 pBV-Dps-2X-6His 的构建及鉴定 | 第45-48页 |
·重组子的转化与筛选 | 第45-46页 |
·菌体 PCR 鉴定 | 第46页 |
·目的蛋白诱导表达鉴定 | 第46-47页 |
·重组表达载体双酶切鉴定 | 第47页 |
·测序分析 | 第47-48页 |
·Dps-2X-6his 蛋白表达形式的鉴定 | 第48-49页 |
·Dps-2X-6His 蛋白的纯化 | 第49-50页 |
·Dps-2X-6His 蛋白的 Western Blotting 检测 | 第50-51页 |
小结 | 第51-52页 |
第四章 大肠杆菌 DPS 融合幽门螺杆菌多表位抗原的表达及纯化 | 第52-64页 |
1 实验材料与方法 | 第52-56页 |
·材料 | 第52页 |
·菌株与载体 | 第52页 |
·仪器设备 | 第52页 |
·主要试剂 | 第52页 |
·主要试剂盒 | 第52页 |
·培养基及溶液配制 | 第52页 |
·实验方法 | 第52-56页 |
·引物设计与合成 | 第52-53页 |
·pBV-Dps-2X-6His 质粒的提取 | 第53页 |
·幽门螺杆菌多表位抗原(Ua-Ub)基因的扩增与纯化 | 第53页 |
·pBV-Dps-Ua-Ub-6His 原核表达载体的构建与鉴定 | 第53-56页 |
·Dps 融合抗原(Dps-Ua-Ub-6His)蛋白表达形式的鉴定 | 第56页 |
·Dps 融合抗原(Dps-Ua-Ub-6His)蛋白的纯化 | 第56页 |
·Dps 融合抗原(Dps-Ua-Ub-6His)蛋白的 Western Blotting 检测 | 第56页 |
2 结果与讨论 | 第56-63页 |
·Ua-Ub 基因的扩增 | 第56-57页 |
·原核表达载体 pBV-Dps-Ua-Ub-6His 的构建及鉴定 | 第57-61页 |
·重组子的转化与筛选 | 第57-58页 |
·诱导表达鉴定 | 第58页 |
·菌体 PCR 鉴定 | 第58-59页 |
·重组表达载体双酶切鉴定 | 第59-60页 |
·测序分析 | 第60-61页 |
·Dps-Ua-Ub-6his 蛋白表达形式的鉴定 | 第61-62页 |
·Dps-Ua-Ub-6His 蛋白的纯化 | 第62页 |
·Dps-Ua-Ub-6His 蛋白的 Western Blotting 检测 | 第62-63页 |
小结 | 第63-64页 |
第五章 DPS 蛋白及其融合蛋白的功能及自组装研究 | 第64-88页 |
1 实验材料与方法 | 第64-74页 |
·材料 | 第64-67页 |
·菌株与蛋白 | 第64页 |
·仪器设备 | 第64页 |
·主要试剂 | 第64-65页 |
·培养基及溶液配制 | 第65-67页 |
·实验方法 | 第67-74页 |
·Dps 及其突变体的透析复性 | 第67页 |
·pBV220 质粒的提取 | 第67页 |
·Dps-6His 蛋白的自组装过程及影响因素研究 | 第67-70页 |
·Dps-2X-6His 蛋白的自组装过程及影响因素研究 | 第70页 |
·Dps-Ua-Ub-6His 蛋白的自组装过程及影响因素研究 | 第70页 |
·Dps 蛋白与 pBV220 质粒的浓度的测定 | 第70页 |
·Dps 蛋白与 DNA 作用 | 第70-71页 |
·Dps 蛋白保护 DNA 抗自由基氧化损伤 | 第71页 |
·Dps 蛋白与纳米银(Np-Ag)作用 | 第71-72页 |
·Dps 及其突变体与铁元素作用 | 第72-74页 |
2 结果与分析 | 第74-87页 |
·Dps-6His 蛋白的自组装过程及影响因素研究 | 第74-76页 |
·NaCl 对 Dps-6His 蛋白自组装的影响 | 第74-75页 |
·MgCl2对 Dps-6His 蛋白自组装的影响 | 第75页 |
·SDS 对 Dps-6His 蛋白自组装的影响 | 第75-76页 |
·Dps-2X-6His 蛋白的自组装过程及影响因素研究 | 第76-77页 |
·MgCl2对 Dps-2X-6His 蛋白自组装的影响 | 第76-77页 |
·SDS 对 Dps-2X-6His 蛋白自组装的影响 | 第77页 |
·Dps-Ua-Ub-6His 蛋白的自组装过程及影响因素研究 | 第77-79页 |
·NaCl 对 Dps-Ua-Ub-6His 蛋白自组装的影响 | 第77-78页 |
·MgCl2对 Dps-Ua-Ub-6His 蛋白自组装的影响 | 第78-79页 |
·SDS 对 Dps-Ua-Ub-6His 蛋白自组装的影响 | 第79页 |
·Dps 蛋白与 pBV220 质粒的浓度的测定 | 第79-80页 |
·Dps 蛋白与 DNA 作用 | 第80-81页 |
·Dps 蛋白保护 DNA 抗自由基氧化损伤 | 第81-82页 |
·Dps 蛋白与纳米银(Np-Ag)作用 | 第82页 |
·Dps 及其突变体与铁元素的作用 | 第82-87页 |
·Dps-6His 蛋白与 Fenton 反应试剂作用 | 第82-84页 |
·Dps-6His 蛋白与不同浓度 Fenton 反应试剂作用 | 第84-85页 |
·Dps-2X-6His 蛋白与 Fenton 反应试剂作用 | 第85-86页 |
·Dps-Ua-Ub-6His 蛋白与 Fenton 反应试剂作用 | 第86-87页 |
小结 | 第87-88页 |
结论 | 第88-89页 |
参考文献 | 第89-95页 |
创新性 | 第95页 |
研究生期间的研究成果 | 第95-96页 |
致谢 | 第96-97页 |
附录 | 第97-104页 |