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大肠杆菌DNA结合蛋白克隆表达纯化及体外自组装功能研究

摘要第1-5页
Abstract第5-7页
英文缩略语索引第7-9页
目录第9-13页
第一章 文献综述第13-21页
 1 Dps 概述第13页
 2 Dps 蛋白结构第13-16页
   ·Dps 蛋白基因第13-14页
   ·Dps 蛋白折叠和四级结构第14页
   ·Dps 蛋白的亚铁氧化酶中心第14-15页
   ·Dps 蛋白的 DNA 结合标签第15-16页
 3 Dps 蛋白的功能第16-18页
   ·类铁蛋白功能第16页
   ·DNA 结合活性第16-17页
   ·Dps 蛋白与细菌的毒性第17页
   ·大肠杆菌 Dps 蛋白的其他功能第17-18页
   ·其他细菌 Dps 蛋白的功能第18页
 4 Dps 蛋白的自组装过程第18-19页
 5 Dps 蛋白的研究意义第19-21页
   ·Dps 蛋白在生物纳米技术中的研究意义第19页
   ·Dps 蛋白在免疫治疗方面的研究意义第19-21页
第二章 大肠杆菌 DPS 蛋白的基因克隆、蛋白表达及纯化第21-40页
 1 实验材料与方法第21-33页
   ·材料第21-27页
     ·菌株与载体第21页
     ·仪器设备第21-22页
     ·主要试剂第22-23页
     ·主要试剂盒第23页
     ·培养基及溶液配制第23-27页
   ·实验方法第27-33页
     ·引物设计与合成第27页
     ·大肠杆菌基因组提取第27页
     ·Dps-6His 基因的扩增与纯化第27-28页
     ·pBV-Dps-6His 原核表达载体的构建与鉴定第28-31页
     ·Dps-6His 蛋白表达形式的鉴定第31页
     ·Dps-6His 蛋白的纯化第31-32页
     ·Dps-6His 蛋白的 Western Blotting 检测第32-33页
 2 结果与讨论第33-39页
   ·Dps-6His 基因的扩增第33-34页
   ·原核表达载体 pBV-Dps-6His 的构建及鉴定第34-37页
     ·重组子的转化与筛选第34页
     ·菌体 PCR 鉴定第34-35页
     ·目的蛋白诱导表达鉴定第35-36页
     ·重组表达载体双酶切鉴定第36页
     ·测序分析第36-37页
   ·Dps-6his 蛋白表达形式的鉴定第37-38页
   ·Dps-6His 蛋白的纯化第38页
   ·Dps-6His 蛋白的 Western Blotting 检测第38-39页
 小结第39-40页
第三章 大肠杆菌 DPS 融合表达载体的构建及融合蛋白表达纯化第40-52页
 1 实验材料与方法第40-44页
   ·材料第40页
     ·菌株与载体第40页
     ·仪器设备第40页
     ·主要试剂第40页
     ·主要试剂盒第40页
     ·培养基及溶液配制第40页
   ·实验方法第40-44页
     ·引物设计与合成第40-41页
     ·pBV-Dps-6His 质粒的提取第41页
     ·Dps-2X-6His 基因的扩增与纯化第41-42页
     ·pBV-Dps-2X-6His 原核表达载体的构建与鉴定第42-43页
     ·Dps-2X-6His 蛋白表达形式的鉴定第43-44页
     ·Dps-2X-6His 蛋白的纯化第44页
     ·Dps-2X-6His 蛋白的 Western Blotting 检测第44页
 2 结果与讨论第44-51页
   ·Dps-2X-6His 基因的扩增第44-45页
   ·原核表达载体 pBV-Dps-2X-6His 的构建及鉴定第45-48页
     ·重组子的转化与筛选第45-46页
     ·菌体 PCR 鉴定第46页
     ·目的蛋白诱导表达鉴定第46-47页
     ·重组表达载体双酶切鉴定第47页
     ·测序分析第47-48页
   ·Dps-2X-6his 蛋白表达形式的鉴定第48-49页
   ·Dps-2X-6His 蛋白的纯化第49-50页
   ·Dps-2X-6His 蛋白的 Western Blotting 检测第50-51页
 小结第51-52页
第四章 大肠杆菌 DPS 融合幽门螺杆菌多表位抗原的表达及纯化第52-64页
 1 实验材料与方法第52-56页
   ·材料第52页
     ·菌株与载体第52页
     ·仪器设备第52页
     ·主要试剂第52页
     ·主要试剂盒第52页
     ·培养基及溶液配制第52页
   ·实验方法第52-56页
     ·引物设计与合成第52-53页
     ·pBV-Dps-2X-6His 质粒的提取第53页
     ·幽门螺杆菌多表位抗原(Ua-Ub)基因的扩增与纯化第53页
     ·pBV-Dps-Ua-Ub-6His 原核表达载体的构建与鉴定第53-56页
     ·Dps 融合抗原(Dps-Ua-Ub-6His)蛋白表达形式的鉴定第56页
     ·Dps 融合抗原(Dps-Ua-Ub-6His)蛋白的纯化第56页
     ·Dps 融合抗原(Dps-Ua-Ub-6His)蛋白的 Western Blotting 检测第56页
 2 结果与讨论第56-63页
   ·Ua-Ub 基因的扩增第56-57页
   ·原核表达载体 pBV-Dps-Ua-Ub-6His 的构建及鉴定第57-61页
     ·重组子的转化与筛选第57-58页
     ·诱导表达鉴定第58页
     ·菌体 PCR 鉴定第58-59页
     ·重组表达载体双酶切鉴定第59-60页
     ·测序分析第60-61页
   ·Dps-Ua-Ub-6his 蛋白表达形式的鉴定第61-62页
   ·Dps-Ua-Ub-6His 蛋白的纯化第62页
   ·Dps-Ua-Ub-6His 蛋白的 Western Blotting 检测第62-63页
 小结第63-64页
第五章 DPS 蛋白及其融合蛋白的功能及自组装研究第64-88页
 1 实验材料与方法第64-74页
   ·材料第64-67页
     ·菌株与蛋白第64页
     ·仪器设备第64页
     ·主要试剂第64-65页
     ·培养基及溶液配制第65-67页
   ·实验方法第67-74页
     ·Dps 及其突变体的透析复性第67页
     ·pBV220 质粒的提取第67页
     ·Dps-6His 蛋白的自组装过程及影响因素研究第67-70页
     ·Dps-2X-6His 蛋白的自组装过程及影响因素研究第70页
     ·Dps-Ua-Ub-6His 蛋白的自组装过程及影响因素研究第70页
     ·Dps 蛋白与 pBV220 质粒的浓度的测定第70页
     ·Dps 蛋白与 DNA 作用第70-71页
     ·Dps 蛋白保护 DNA 抗自由基氧化损伤第71页
     ·Dps 蛋白与纳米银(Np-Ag)作用第71-72页
     ·Dps 及其突变体与铁元素作用第72-74页
 2 结果与分析第74-87页
   ·Dps-6His 蛋白的自组装过程及影响因素研究第74-76页
     ·NaCl 对 Dps-6His 蛋白自组装的影响第74-75页
     ·MgCl2对 Dps-6His 蛋白自组装的影响第75页
     ·SDS 对 Dps-6His 蛋白自组装的影响第75-76页
   ·Dps-2X-6His 蛋白的自组装过程及影响因素研究第76-77页
     ·MgCl2对 Dps-2X-6His 蛋白自组装的影响第76-77页
     ·SDS 对 Dps-2X-6His 蛋白自组装的影响第77页
   ·Dps-Ua-Ub-6His 蛋白的自组装过程及影响因素研究第77-79页
     ·NaCl 对 Dps-Ua-Ub-6His 蛋白自组装的影响第77-78页
     ·MgCl2对 Dps-Ua-Ub-6His 蛋白自组装的影响第78-79页
     ·SDS 对 Dps-Ua-Ub-6His 蛋白自组装的影响第79页
   ·Dps 蛋白与 pBV220 质粒的浓度的测定第79-80页
   ·Dps 蛋白与 DNA 作用第80-81页
   ·Dps 蛋白保护 DNA 抗自由基氧化损伤第81-82页
   ·Dps 蛋白与纳米银(Np-Ag)作用第82页
   ·Dps 及其突变体与铁元素的作用第82-87页
     ·Dps-6His 蛋白与 Fenton 反应试剂作用第82-84页
     ·Dps-6His 蛋白与不同浓度 Fenton 反应试剂作用第84-85页
     ·Dps-2X-6His 蛋白与 Fenton 反应试剂作用第85-86页
     ·Dps-Ua-Ub-6His 蛋白与 Fenton 反应试剂作用第86-87页
 小结第87-88页
结论第88-89页
参考文献第89-95页
创新性第95页
研究生期间的研究成果第95-96页
致谢第96-97页
附录第97-104页

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