玫瑰孢链霉菌代谢通量分析及戊糖磷酸途径改造
| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-24页 |
| ·达托霉素概述 | 第9-11页 |
| ·达托霉素的结构特征和物化性质 | 第9-10页 |
| ·达托霉素的作用机理和抗菌活性 | 第10页 |
| ·达托霉素的临床试验 | 第10-11页 |
| ·代谢网络重构 | 第11-17页 |
| ·代谢网络简介 | 第11-13页 |
| ·代谢网络的初步构建 | 第13-15页 |
| ·代谢网络的修正 | 第15页 |
| ·代谢网络的表示 | 第15-17页 |
| ·代谢通量分析 | 第17-18页 |
| ·代谢通量分析简介 | 第17页 |
| ·代谢通量分析的应用 | 第17-18页 |
| ·代谢途径改造 | 第18-21页 |
| ·代谢工程 | 第18-19页 |
| ·链霉菌的代谢途径改造 | 第19-21页 |
| ·达托霉素发酵工艺 | 第21-22页 |
| ·本文研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 玫瑰孢链霉菌代谢网络的构建 | 第24-44页 |
| ·建立初始反应列表 | 第25-29页 |
| ·天蓝色链霉菌注释信息的比对 | 第25-27页 |
| ·初始反应列表的建立 | 第27-29页 |
| ·加入达托霉素合成反应 | 第29-32页 |
| ·D 型氨基酸和非蛋白氨基酸的合成机理 | 第29-30页 |
| ·达托霉素的合成机理 | 第30-32页 |
| ·反应列表的修正 | 第32-35页 |
| ·确定生物量合成反应 | 第32-33页 |
| ·添加运输反应 | 第33-34页 |
| ·添补网络空缺 | 第34-35页 |
| ·代谢网络结构分析 | 第35-43页 |
| ·代谢图的表达 | 第36-37页 |
| ·连接度分布 | 第37-40页 |
| ·网络结构分解 | 第40-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 玫瑰孢链霉菌的代谢通量分析 | 第44-65页 |
| ·实验材料 | 第44-47页 |
| ·菌种 | 第44页 |
| ·实验仪器 | 第44-45页 |
| ·实验试剂 | 第45-47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-57页 |
| ·菌种培养方法 | 第47-48页 |
| ·分析方法 | 第48-50页 |
| ·代谢通量分析 | 第50-57页 |
| ·实验结果与讨论 | 第57-64页 |
| ·稀释率对通量分布的影响 | 第57-60页 |
| ·添加氨基酸的影响 | 第60-61页 |
| ·预测靶标 | 第61-64页 |
| ·本章小结 | 第64-65页 |
| 第四章 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因的过量表达 | 第65-84页 |
| ·实验材料 | 第65-69页 |
| ·菌种和质粒 | 第65-66页 |
| ·实验仪器 | 第66-67页 |
| ·实验试剂 | 第67-68页 |
| ·培养基 | 第68页 |
| ·主要溶液 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-75页 |
| ·玫瑰孢链霉菌的培养 | 第69页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第69-70页 |
| ·玫瑰孢链霉菌染色体DNA 的提取 | 第70页 |
| ·基因克隆的PCR 反应 | 第70-71页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第71页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第71页 |
| ·T 载体连接反应 | 第71-72页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第72-73页 |
| ·转化反应与蓝白筛选 | 第73页 |
| ·菌落PCR | 第73-74页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第74页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第74-75页 |
| ·结合转移 | 第75页 |
| ·结果与讨论 | 第75-82页 |
| ·6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶编码基因的克隆 | 第75-78页 |
| ·构建重组表达载体 | 第78-80页 |
| ·通过结合转移构建基因工程菌 | 第80-81页 |
| ·基因工程菌产达托霉素性能 | 第81-82页 |
| ·本章小结 | 第82-84页 |
| 第五章 基因工程菌发酵罐内发酵工艺优化 | 第84-93页 |
| ·实验材料 | 第84-85页 |
| ·菌种 | 第84页 |
| ·实验仪器 | 第84页 |
| ·实验试剂 | 第84页 |
| ·培养基 | 第84-85页 |
| ·实验方法 | 第85页 |
| ·培养方法 | 第85页 |
| ·分析方法 | 第85页 |
| ·结果与讨论 | 第85-92页 |
| ·恒定转速的影响 | 第85-87页 |
| ·双阶段溶氧控制方法 | 第87-88页 |
| ·发酵动力学研究 | 第88-92页 |
| ·本章小结 | 第92-93页 |
| 第六章 结论与展望 | 第93-95页 |
| ·结论 | 第93-94页 |
| ·主要创新点 | 第94页 |
| ·展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-106页 |
| 附录 | 第106-109页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110页 |
