| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| ·猪 IFN-α的研究进展 | 第10-16页 |
| ·猪干扰素研究概况 | 第10页 |
| ·猪α干扰素作用机制 | 第10-11页 |
| ·猪α干扰素生物活性 | 第11-13页 |
| ·基因工程猪 IFNα的研究进程 | 第13-14页 |
| ·猪α干扰素在临床应用 | 第14-15页 |
| ·猪α干扰素的前景展望 | 第15-16页 |
| ·课题研究意义及其立项依据 | 第16-17页 |
| ·研究内容及其技术路线 | 第17-20页 |
| ·研究内容和方法 | 第17-18页 |
| ·技术路线 | 第18-20页 |
| 第二章 pET32a-PoIFNα基因工程菌的构建 | 第20-32页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·载体与菌株 | 第20页 |
| ·工具酶及其他 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·主要试剂的配置 | 第20-22页 |
| ·实验方法 | 第22-26页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·猪肝脏基因组 DNA 的提取 | 第22页 |
| ·猪α-干扰素成熟肽基因的克隆 | 第22-23页 |
| ·DNA 电泳 | 第23页 |
| ·目的片段的回收 | 第23-24页 |
| ·质粒的提取 | 第24页 |
| ·质粒和 PCR 产物的双酶切 | 第24-25页 |
| ·DNA 片段的连接 | 第25页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第25-26页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第26页 |
| ·实验结果 | 第26-30页 |
| ·猪肝脏基因组 DNA 提取和 IFN-α成熟肽基因扩增结果 | 第26-27页 |
| ·重组 pET32a-IFN-α质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组质粒 pET32a-IFN-α基因测序结果与分析 | 第28-30页 |
| ·本章讨论 | 第30-32页 |
| ·重组 pET32a-IFN-α质粒的设计 | 第30页 |
| ·重组 pET32a-IFN-α质粒的构建 | 第30页 |
| ·重组 pET32a-IFN-α质粒的鉴定 | 第30-32页 |
| 第三章 工程菌的诱导表达及其产物纯化 | 第32-48页 |
| ·实验材料 | 第32-35页 |
| ·重组基因工程菌 | 第32页 |
| ·实验耗材与仪器 | 第32-33页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第33-35页 |
| ·实验方法 | 第35-41页 |
| ·pET32a-IFN-α/BL21(DE3) 重组菌株的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·IFN-α可溶性表达的诱导条件优化 | 第36-38页 |
| ·pET32a-IFN-α/BL21(DE3) 重组菌株的大量诱导表达 | 第38页 |
| ·IFN-α的纯化 | 第38-39页 |
| ·分子鉴定 | 第39页 |
| ·IFN-α冻干粉的制备 | 第39-40页 |
| ·考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 | 第40-41页 |
| ·实验结果 | 第41-45页 |
| ·pET32a-IFN-α/BL21(DE3) 重组菌株可溶性分析及其优化 | 第41-43页 |
| ·猪 IFNα纯化结果 | 第43页 |
| ·分子鉴定 | 第43页 |
| ·蛋白含量测定 | 第43-45页 |
| ·本章讨论 | 第45-48页 |
| ·猪 IFN-α可溶性表达的诱导条件优化 | 第45页 |
| ·猪 IFN-α的纯化 | 第45-46页 |
| ·蛋白浓度测定方法 | 第46-48页 |
| 第四章 猪 IFN-α活性测定 | 第48-56页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·实验细胞和病毒 | 第48页 |
| ·实验耗材与仪器 | 第48页 |
| ·主要试剂的配制 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-51页 |
| ·Marc145 细胞的培养 | 第49-50页 |
| ·PRRSV 病毒的增殖 | 第50页 |
| ·PRRSV 的 CCID_(50)测定 | 第50-51页 |
| ·猪 IFN-α的活性测定 | 第51页 |
| ·实验结果 | 第51-53页 |
| ·Marc145 细胞的培养与 PRRSV 病毒的增殖 | 第51-52页 |
| ·CCID_(50)测定结果 | 第52页 |
| ·猪 IFN-α活性测定结果 | 第52-53页 |
| ·本章讨论 | 第53-56页 |
| ·Marc145 细胞的培养 | 第53页 |
| ·干扰素活性测定方法 | 第53-56页 |
| 第五章 全文总结及后续工作建议 | 第56-58页 |
| ·全文总结 | 第56页 |
| ·不足之处 | 第56页 |
| ·后续工作计划 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
| 附录 1 Reed-Muench 两氏法 | 第64页 |
| 附录 2 细菌结晶紫染色法 | 第64-65页 |
| 附录 3 细胞计数法 | 第65-66页 |
| 英文缩写索引 | 第66-68页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文及取得的研究成果 | 第68页 |
