猪流行性腹泻病毒N蛋白基因的遗传变异及其原核表达
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-25页 |
| ·病原学 | 第13-14页 |
| ·病毒分类 | 第13页 |
| ·病毒形态和生物特性 | 第13-14页 |
| ·细胞培养 | 第14页 |
| ·PEDV分子生物学特性 | 第14-17页 |
| ·非结构蛋白 | 第15页 |
| ·结构蛋白 | 第15-17页 |
| ·流行病学及致病机理 | 第17-19页 |
| ·流行病学 | 第17-18页 |
| ·流行现状 | 第18-19页 |
| ·致病机理 | 第19-20页 |
| ·诊断 | 第20-23页 |
| ·临床症状和病理变化诊断 | 第20-21页 |
| ·病原学诊断 | 第21页 |
| ·血清学诊断 | 第21-23页 |
| ·分子生物学诊断 | 第23页 |
| ·预防与控制 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的、意义 | 第24-25页 |
| 2 材料 | 第25-30页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·病料来源 | 第25页 |
| ·载体 | 第25页 |
| ·细胞、菌株及血清 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·主要实验仪器 | 第26页 |
| ·主要溶液配制 | 第26-30页 |
| ·琼脂糖电泳所用溶液的配制 | 第26-27页 |
| ·细菌培养液的配制 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE所用溶液的配制 | 第27-28页 |
| ·蛋白纯化相关溶液的配制 | 第28页 |
| ·Western-Blot相关溶液的配制 | 第28页 |
| ·其他试剂的配制 | 第28-30页 |
| 3 实验方法 | 第30-45页 |
| ·PEDV的分离鉴定及其生物学特性研究 | 第30-32页 |
| ·病毒分离 | 第30页 |
| ·病毒的鉴定试验及蚀斑形成试验 | 第30页 |
| ·病毒鉴定 | 第30-32页 |
| ·PEDV N基因的克隆及表达载体的构建 | 第32-38页 |
| ·PEDV基因组RNA的提取 | 第32-33页 |
| ·RNA反转录 | 第33页 |
| ·引物的设计与合成 | 第33页 |
| ·目的基因的体外扩增 | 第33-34页 |
| ·目的片段的凝胶回收 | 第34-35页 |
| ·pMD-N载体的构建 | 第35-36页 |
| ·克隆子的筛选和鉴定 | 第36-38页 |
| ·N蛋白基因序列分析 | 第38-39页 |
| ·N蛋白的体外表达 | 第39-45页 |
| ·pET32a-N原核表达质粒的构建 | 第39页 |
| ·pET32a-N重组质粒的筛选和鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的原核表达 | 第40页 |
| ·表达产物的检测 | 第40-42页 |
| ·表达条件的优化 | 第42页 |
| ·包涵体的溶解 | 第42页 |
| ·存在于沉淀中的蛋白层析纯化 | 第42-43页 |
| ·包涵体的复性 | 第43页 |
| ·Western Blot检测 | 第43-45页 |
| 4 结果 | 第45-58页 |
| ·病毒的分离鉴定及分子生物学研究 | 第45-46页 |
| ·病毒的分离培养 | 第45页 |
| ·病毒TCID50 | 第45页 |
| ·PCR鉴定 | 第45-46页 |
| ·N基因的克隆及表达载体的构建 | 第46-49页 |
| ·N基因的PCR扩增 | 第46页 |
| ·pMD-N质粒的鉴定 | 第46-49页 |
| ·N蛋白基因序列分析 | 第49-53页 |
| ·N蛋白基因序列同源性分析 | 第49-51页 |
| ·PEDV N蛋白基因进化树分析 | 第51-52页 |
| ·原核表达质粒pET32a-N的鉴定 | 第52-53页 |
| ·pET32a-N质粒的原核表达 | 第53-58页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳 | 第53-54页 |
| ·表达条件优化 | 第54-56页 |
| ·蛋白的纯化 | 第56-57页 |
| ·Western blot鉴定 | 第57-58页 |
| 5. 讨论 | 第58-62页 |
| ·病毒的生物学特性 | 第58-60页 |
| ·目的基因的选择 | 第60-61页 |
| ·重组质粒的蛋白表达 | 第61页 |
| ·N蛋白基因遗传演化的分析 | 第61-62页 |
| 6 结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
