中文摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-10页 |
图表目录 | 第10-12页 |
缩写对比表 | 第12-13页 |
第一章:绪论 | 第13-28页 |
·降解多环芳烃的微生物种类 | 第14-18页 |
·降解萘(Naph)的微生物 | 第17页 |
·降解菲(Phen)的微生物 | 第17-18页 |
·降解荧蒽(Flu)的微生物 | 第18页 |
·降解苯并芘(BaP)的微生物 | 第18页 |
·PAH微生物降解作用的遗传学基础 | 第18-23页 |
·萘降解途径和降解基因 | 第19页 |
·菲降解途径和降解基因 | 第19-22页 |
·环羟基化双加氧酶(ring-hydroxylating dioxygenases,RHD) | 第22-23页 |
·α-环羟基化双加氧酶(ARHD)的结构特点 | 第22页 |
·双加氧酶基因的特性和基因在细菌之间的转移 | 第22-23页 |
·细菌降解多环芳烃的蛋白质组学和代谢组学理解 | 第23-25页 |
·蛋白质组学在多环芳烃降解中的应用 | 第23-25页 |
·代谢组学在多环芳烃降解中的应用 | 第25页 |
·国内外多环芳烃污染生物修复的研究现状和前景展望 | 第25-26页 |
·本实验的研究目的和内容,研究意义 | 第26-28页 |
第二章:实验材料和方法 | 第28-47页 |
·实验材料 | 第28-34页 |
·实验菌株 | 第28-29页 |
·质粒和引物 | 第29-31页 |
·培养基的配置 | 第31-33页 |
·实验仪器和试剂 | 第33-34页 |
·实验方法 | 第34-47页 |
·细菌基因组DNA的制备 | 第35页 |
·质粒提取 | 第35-36页 |
·PAO1感受态细胞制备 | 第36页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
·DNA酶切和连接 | 第37页 |
·PCR(Polymerase Chain Reaction)反应体系(50μL) | 第37-38页 |
·电转化 | 第38页 |
·菲、萘降解基因的筛选 | 第38-39页 |
·随机PCR | 第39-41页 |
·转座子插入位点的确定即菲、萘降解基因的确定 | 第41页 |
·用丙酮酸钠为碳源对筛选出的突变体分类 | 第41页 |
·互补实验 | 第41-42页 |
·基因敲除实验 | 第42-43页 |
·三亲株杂交实验 | 第43页 |
·转座突变株在不同碳源上生长曲线测定 | 第43-44页 |
·细菌菌落计数法(CFU测定方法) | 第44页 |
·菲、萘降解中间产物为唯一碳源培养基上的生长 | 第44-45页 |
·PAO1菲、萘降解基因的研究 | 第45-47页 |
第三章:实验结果 | 第47-65页 |
·以菲、萘为唯一碳源筛选转座突变体库 | 第47页 |
·转座突变体在菲、萘代谢中间产物为唯一碳源培养基上的生长 | 第47-51页 |
·随机PCR、测序及序列比对 | 第51-53页 |
·转座突变体在丙酮酸上生长菌株 | 第53页 |
·PA0482、PA0887、PA0941基因信息 | 第53-55页 |
·CFU测定结果 | 第55-57页 |
·基因互补与敲除实验 | 第57-65页 |
·PA0887基因的互补和敲除 | 第57-59页 |
·PA0482基因的互补和敲除 | 第59-61页 |
·突变体生长曲线的测定 | 第61-62页 |
·基因PA0941的互补 | 第62-64页 |
·双加氧酶基因PCR结果 | 第64-65页 |
第四章:结论和讨论 | 第65-72页 |
参考文献 | 第72-79页 |
致谢 | 第79页 |