| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-18页 |
| 第一章 引言 | 第18-57页 |
| 第一节 多不饱和脂肪酸的研究概况 | 第18-22页 |
| ·多不饱和脂肪酸的概述 | 第18页 |
| ·多不饱和脂肪酸的功能 | 第18-20页 |
| ·多不饱和脂肪酸的生产 | 第20-22页 |
| 第二节 多不饱和脂肪酸合成机理的研究 | 第22-27页 |
| ·脂肪酸脱氢酶基因的克隆及序列分析 | 第22-23页 |
| ·脂肪酸脱氢酶的总体特征 | 第23-26页 |
| ·脂肪酸脱氢酶功能的研究 | 第26-27页 |
| 第三节 多不饱和脂肪酸合成途径的研究 | 第27-31页 |
| ·细菌不饱和脂肪酸的合成 | 第27-28页 |
| ·真菌不饱和脂肪酸的合成 | 第28-29页 |
| ·哺乳动物不饱和脂肪酸的合成 | 第29-31页 |
| 第四节 多不饱和脂肪酸合成调控的研究 | 第31-52页 |
| ·枯草芽孢杆菌脂肪酸脱氢酶基因的表达调控 | 第31-33页 |
| ·铜绿假单胞菌脂肪酸脱氢酶基因的表达调控 | 第33-34页 |
| ·集胞蓝细菌脂肪酸脱氢酶基因的表达调控 | 第34-36页 |
| ·酿酒酵母脂肪酸脱氢酶基因的表达调控 | 第36-45页 |
| ·哺乳动物脂肪酸脱氢酶基因的表达调控 | 第45-51页 |
| ·结论和展望 | 第51-52页 |
| 第五节 选题依据和技术路线 | 第52-57页 |
| ·选题依据 | 第52-54页 |
| ·工作背景及研究内容 | 第54-56页 |
| ·技术路线 | 第56-57页 |
| 第二章 毕赤酵母脂肪酸脱氢酶缺失突变株的构建及功能分析 | 第57-93页 |
| 第一节 实验材料 | 第57-60页 |
| ·菌株和质粒 | 第57页 |
| ·引物 | 第57-59页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| 第二节 实验方法 | 第60-72页 |
| ·培养基的配制 | 第60-61页 |
| ·试剂的配制 | 第61-62页 |
| ·毕赤酵母基因组 DNA 的提取 | 第62页 |
| ·大肠杆菌质粒的 SDS 碱裂解法提取 | 第62-63页 |
| ·基因敲除用同源重组片段的构建 | 第63-68页 |
| ·毕赤酵母脂肪酸脱氢酶基因的敲除 | 第68-70页 |
| ·毕赤酵母脂肪酸脱氢酶基因敲除株的验证 | 第70-71页 |
| ·毕赤酵母脂肪酸脱氢酶基因敲除株的表型变化 | 第71-72页 |
| 第三节 结果与分析 | 第72-89页 |
| ·重组敲除质粒的构建 | 第72-77页 |
| ·敲除株的分子鉴定 | 第77-82页 |
| ·敲除株的产物鉴定 | 第82-83页 |
| ·敲除株的表型分析 | 第83-89页 |
| 第四节 讨论 | 第89-91页 |
| 第五节 小结 | 第91-93页 |
| 第三章 不同外界刺激对毕赤酵母脂肪酸脱氢酶基因表达的影响 | 第93-119页 |
| 第一节 实验材料 | 第93-96页 |
| ·菌株和质粒 | 第93页 |
| ·引物 | 第93-95页 |
| ·主要试剂 | 第95页 |
| ·主要仪器 | 第95-96页 |
| 第二节 实验方法 | 第96-101页 |
| ·培养基的配制 | 第96页 |
| ·试剂的配制 | 第96-97页 |
| ·毕赤酵母总 RNA 的提取 | 第97-98页 |
| ·除去 RNA 中的基因组 DNA | 第98页 |
| ·反转录反应 | 第98-99页 |
| ·Real-time PCR | 第99页 |
| ·基因相对表达量的数据分析 | 第99页 |
| ·启动子报告基因重组载体的构建 | 第99-100页 |
| ·启动子活性分析 | 第100-101页 |
| 第三节 结果与分析 | 第101-115页 |
| ·低温刺激对脂肪酸脱氢酶基因表达和脂肪酸组成的影响 | 第101-105页 |
| ·外源脂肪酸对脂肪酸脱氢酶基因表达和脂肪酸组成的影响 | 第105-110页 |
| ·启动子报告基因重组载体的构建及转化 | 第110-112页 |
| ·低温对启动子活性的影响 | 第112-113页 |
| ·外源脂肪酸对启动子活性的影响 | 第113-115页 |
| 第四节 讨论 | 第115-117页 |
| 第五节 小结 | 第117-119页 |
| 第四章 毕赤酵母脂肪酸脱氢酶基因潜在调控蛋白的研究 | 第119-134页 |
| 第一节 实验材料 | 第119-122页 |
| ·菌株和质粒 | 第119页 |
| ·引物 | 第119-121页 |
| ·主要试剂 | 第121页 |
| ·主要仪器 | 第121-122页 |
| 第二节 实验方法 | 第122-123页 |
| ·培养基的配制 | 第122页 |
| ·试剂的配制 | 第122-123页 |
| ·BLAST 分析 | 第123页 |
| ·毕赤酵母 Spt23 基因的敲除 | 第123页 |
| ·Spt23 基因缺失对脂肪酸脱氢酶基因表达的影响 | 第123页 |
| 第三节 结果与分析 | 第123-130页 |
| ·BLAST 比对结果 | 第123-124页 |
| ·Spt23 基因的缺失株的鉴定 | 第124-126页 |
| ·Spt23 基因缺失对菌株生长的影响 | 第126-127页 |
| ·Spt23 基因缺失对脂肪酸脱氢酶基因表达和脂肪酸合成的影响 | 第127-130页 |
| 第四节 讨论 | 第130-132页 |
| 第五节 小结 | 第132-134页 |
| 第五章 农杆菌介导高山被孢霉遗传转化体系的研究 | 第134-151页 |
| 第一节 实验材料 | 第134-136页 |
| ·菌株和质粒 | 第134页 |
| ·引物 | 第134-135页 |
| ·主要试剂 | 第135页 |
| ·主要仪器 | 第135-136页 |
| 第二节 实验方法 | 第136-142页 |
| ·培养基的配制 | 第136页 |
| ·试剂的配制 | 第136-138页 |
| ·潮霉素 B 对高山被孢霉抑菌浓度的确定 | 第138页 |
| ·紫外诱变法筛选高山被孢霉潮霉素 B 敏感菌株 | 第138页 |
| ·双元载体 pBI/hpt 的构建 | 第138-139页 |
| ·利用三亲杂交法将双元载体 pBI/hpt 转入农杆菌中 | 第139-140页 |
| ·农杆菌转化高山被孢霉及其检测 | 第140-142页 |
| 第三节 结果与分析 | 第142-147页 |
| ·高山被孢霉在含有潮霉素 B 的不同培养基的生长情况 | 第142-143页 |
| ·紫外诱变筛选高山被孢霉潮霉素 B 敏感菌株 | 第143-144页 |
| ·双元载体 pBI/hpt 的构建 | 第144-145页 |
| ·双元载体 pBI/hpt 转化农杆菌 | 第145-146页 |
| ·高山被孢霉转化子的 PCR 鉴定 | 第146-147页 |
| ·高山被孢霉转化子的 Southern blot 分析 | 第147页 |
| 第四节 讨论 | 第147-149页 |
| 第五节 小结 | 第149-151页 |
| 第六章 不同外界刺激对高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因表达的影响 | 第151-178页 |
| 第一节 实验材料 | 第151-155页 |
| ·菌株和质粒 | 第151页 |
| ·引物 | 第151-154页 |
| ·主要试剂 | 第154-155页 |
| ·主要仪器 | 第155页 |
| 第二节 实验方法 | 第155-160页 |
| ·培养基的配制 | 第155-156页 |
| ·试剂的配制 | 第156-157页 |
| ·高山被孢霉生物量、油脂产量及组成的测定 | 第157页 |
| ·Real-time PCR 检测高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因的相对表达 | 第157页 |
| ·高山被孢霉脂肪酸脱氢酶基因 5’端上游区域的扩增 | 第157-159页 |
| ·报告载体的构建及转化酿酒酵母 | 第159-160页 |
| ·启动子活性分析 | 第160页 |
| 第三节 结果与分析 | 第160-173页 |
| ·不同碳源对菌株生长、油脂产生及脂肪酸脱氢酶基因表达的影响 | 第160-165页 |
| ·低温刺激和外源脂肪酸对脂肪酸脱氢酶基因表达的影响 | 第165-167页 |
| ·高山被孢霉 Fad6 基因 5’端上游区域的扩增 | 第167-169页 |
| ·重组表达载体 pYEP356-PFAD6的构建及转化 | 第169-170页 |
| ·低温对启动子活性的影响 | 第170-171页 |
| ·外源脂肪酸对启动子活性的影响 | 第171-173页 |
| 第四节 讨论 | 第173-176页 |
| 第五节 小结 | 第176-178页 |
| 第七章 结论与展望 | 第178-182页 |
| 第一节 结论 | 第178-180页 |
| 第二节 主要创新点 | 第180-181页 |
| 第三节 相关工作的前景展望 | 第181-182页 |
| 参考文献 | 第182-194页 |
| 致谢 | 第194-195页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文及研究成果 | 第195-197页 |
