| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-48页 |
| 1 酪氨酸羟化酶 | 第15-29页 |
| ·酪氨酸羟化酶的概述 | 第15页 |
| ·哺乳动物酪氨酸羟化酶研究进展 | 第15-21页 |
| ·昆虫酪氨酸羟化酶研究 | 第21-26页 |
| ·昆虫酪氨酸羟化酶重组表达研究 | 第26-27页 |
| ·儿茶酚胺类物质的生物合成和代谢调控研究 | 第27-29页 |
| 2 酚氧化酶 | 第29-31页 |
| ·酚氧化酶概述 | 第29页 |
| ·昆虫酚氧化酶分布及激活机制 | 第29-30页 |
| ·昆虫酚氧化酶的功能研究 | 第30页 |
| ·酚氧化酶抑制剂研究 | 第30-31页 |
| 3 昆虫黑化 | 第31-36页 |
| ·昆虫黑化反应 | 第31-32页 |
| ·昆虫表皮色素 | 第32-33页 |
| ·昆虫表皮色素沉着的机制 | 第33页 |
| ·昆虫黑化反应与表皮硬化的关系 | 第33-35页 |
| ·昆虫黑化反应与免疫防御的关系 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-48页 |
| 第二章 研究目的与内容 | 第48-51页 |
| 1. 研究目的 | 第48-49页 |
| 2．研究的主要内容 | 第49-50页 |
| ·黄粉虫酪氨酸羟化酶的研究 | 第49页 |
| ·家蚕酪氨酸羟化酶的研究 | 第49-50页 |
| 3. 研究技术路线 | 第50-51页 |
| 第三章 一般材料与方法 | 第51-66页 |
| 1 实验材料 | 第51-54页 |
| ·菌种及载体 | 第51页 |
| ·试剂盒与分子生物学试剂 | 第51页 |
| ·主要实验试剂与配制 | 第51-54页 |
| 2 常用仪器设备 | 第54页 |
| 3 常用方法 | 第54-66页 |
| ·蛋白的透析 | 第54-55页 |
| ·蛋白浓缩 | 第55页 |
| ·蛋白的真空冷冻干燥 | 第55页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第55页 |
| ·总 RNA 的抽提 | 第55-56页 |
| ·RNA 甲醛变性凝胶电泳 | 第56页 |
| ·RNA 浓度测定 | 第56页 |
| ·RNA 反转录 | 第56页 |
| ·PCR 扩增 | 第56-57页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第57页 |
| ·PCR 产物凝胶纯化 | 第57-58页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第58页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第58-59页 |
| ·连接反应 | 第59页 |
| ·重组 DNA 的转化及菌体复苏 | 第59-60页 |
| ·重组质粒菌液 PCR 鉴定 | 第60页 |
| ·酶切反应 | 第60页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白质电泳凝胶的配制 | 第60页 |
| ·SDS-PAGE 电泳凝胶的灌制 | 第60-61页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第61-63页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第63页 |
| ·重组 TH 蛋白的大量制备 | 第63页 |
| ·重组 TH 蛋白的纯化 | 第63页 |
| ·高效液相色谱测定 TH 活性 | 第63-64页 |
| ·PO 酪氨酸酶活性的测定 | 第64页 |
| ·PO 酪氨酸酶活性的动力学参数测定 | 第64-65页 |
| ·免疫诱导用细菌的处理 | 第65-66页 |
| 第四章 黄粉虫酪氨酸羟化酶基因的生物信息学分析和表达特征 | 第66-91页 |
| 1 材料与方法 | 第67-72页 |
| ·材料与试剂 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-86页 |
| ·TH 基因的全长 cDNA 克隆及生物信息学分析 | 第72-82页 |
| ·黄粉虫酪氨酸羟化酶的表达谱分析 | 第82-86页 |
| 3. 讨论 | 第86-89页 |
| ·黄粉虫 TmTH 基因的克隆及生物信息学分析 | 第86-88页 |
| ·黄粉虫 TmTH 基因的表达特征分析 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-91页 |
| 第五章 黄粉虫酪氨酸羟化酶的酶学性质研究 | 第91-106页 |
| 1 材料和方法 | 第91-93页 |
| ·材料与试剂 | 第91-92页 |
| ·方法 | 第92-93页 |
| 2. 结果与分析 | 第93-102页 |
| ·高效液相色谱紫外检测酪氨酸羟化酶活性 | 第93-95页 |
| ·重组 TmTH 基因的诱导表达 | 第95-97页 |
| ·重组 TmTH 纯化和活性检测 | 第97页 |
| ·重组 TmTH 的最适反应温度和最适反应 pH | 第97-98页 |
| ·重组酪氨酸羟化酶和黄粉虫天然酪氨酸羟化酶的动力学参数 | 第98-99页 |
| ·重组酪氨酸羟化酶和黄粉虫血淋巴多酚氧化酶动力学参数比较 | 第99-101页 |
| ·抑制剂 3-IT 对 TH 和 PO 活性的影响 | 第101-102页 |
| ·抑制剂 3-IT 对黄粉虫体内 TmTH 活性的影响 | 第102页 |
| 3 讨论 | 第102-105页 |
| ·高效液相色谱紫外检测测定 TH 活性的方法 | 第102-103页 |
| ·重组蛋白的表达纯化 | 第103-104页 |
| ·TmTH 的酶学性质和动力学参数 | 第104页 |
| ·TmTH 与 PO 动力学参数比较 | 第104-105页 |
| ·抑制剂 3-IT 对 TmTH 和 PO 的抑制能力比较 | 第105页 |
| 参考文献 | 第105-106页 |
| 第六章 黄粉虫酪氨酸羟化酶功能研究 | 第106-117页 |
| 1. 材料与方法 | 第106-107页 |
| ·材料与试剂 | 第106页 |
| ·实验方法 | 第106-107页 |
| 2. 结果与分析： | 第107-113页 |
| ·免疫刺激后黄粉虫酪氨酸羟化酶对血淋巴黑化影响 | 第107-108页 |
| ·酪氨酸羟化酶对培养的表皮组织色素形成的影响 | 第108-110页 |
| ·幼虫饲喂酪氨酸羟化酶抑制剂对黄粉虫发育变态的影响 | 第110-113页 |
| 3. 讨论 | 第113-116页 |
| ·抑制剂 3-IT 浓度的选择 | 第113-114页 |
| ·TH 对黄粉虫幼虫血淋巴黑化影响 | 第114页 |
| ·TH 在表皮黑素形成中的作用 | 第114-115页 |
| ·TH 在黄粉虫生长发育变态中的功能 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-117页 |
| 第七章 家蚕酪氨酸羟化酶结构和性质的研究 | 第117-130页 |
| 1 材料与方法 | 第117-119页 |
| ·试剂材料 | 第117-118页 |
| ·实验方法 | 第118-119页 |
| 2. 结果与分析 | 第119-127页 |
| ·酪氨酸羟化酶基因的克隆和生物信息学分析 | 第119-120页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第120-121页 |
| ·重组 BmTH 的诱导表达和纯化 | 第121-123页 |
| ·家蚕 BmTH 突变体的构建、表达纯化 | 第123页 |
| ·HPLC-UV 法检测重组野生型 BmTH 和突变体活性 | 第123-124页 |
| ·家蚕重组 BmTH 和突变体的三维建模 | 第124-125页 |
| ·家蚕重组 BmTH 和突变体的内源荧光发射光谱分析 | 第125-126页 |
| ·抑制剂 3-IT 对家蚕重组 BmTH 酶活的影响 | 第126-127页 |
| ·家蚕重组 BmTH 和 PO 的动力学参数比较 | 第127页 |
| 3. 讨论 | 第127-129页 |
| 参考文献 | 第129-130页 |
| 结论 | 第130-131页 |
| 附录 | 第131-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
