| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 图表清单 | 第12-13页 |
| 符号说明 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-27页 |
| 1 L-苯丙氨酸的性质及其应用 | 第14-15页 |
| 2 L-苯丙氨酸的生产方法 | 第15-16页 |
| 3 L-苯丙氨酸的合成途径及关键酶的调节 | 第16-19页 |
| 4 提高L-苯丙氨酸产量的方法 | 第19-24页 |
| ·调整代谢流 | 第19-23页 |
| ·增加中心代谢途径代谢流 | 第20-21页 |
| ·分支途径调控 | 第21页 |
| ·解除反馈抑制 | 第21-22页 |
| ·酶基因的间隔序列调控 | 第22-23页 |
| ·L-苯丙氨酸发酵条件的优化 | 第23-24页 |
| ·温度控制 | 第23-24页 |
| ·碳源选择 | 第24页 |
| 5 甘油及其应用 | 第24-27页 |
| 第二章 材料和方法 | 第27-47页 |
| 1 材料 | 第27-32页 |
| ·所用载体和菌株 | 第27页 |
| ·所用引物 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·所用试剂和工具酶 | 第29-31页 |
| ·所用实验仪器 | 第31-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-47页 |
| ·基因克隆与载体构建 | 第32-41页 |
| ·基因克隆 | 第34-36页 |
| ·质粒pZE12-GFP、pAF(L)、pAF(C)、pZA31的提取 | 第36页 |
| ·载体和基因片段的酶切 | 第36-37页 |
| ·载体和基因的连接 | 第37-38页 |
| ·制备感受态细胞DH10B | 第38页 |
| ·连接产物的热激转化 | 第38-39页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第39-41页 |
| ·工程菌的构建 | 第41-43页 |
| ·质粒提取 | 第41-42页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·热激转化 | 第42页 |
| ·PCR法鉴定阳性重组子 | 第42-43页 |
| ·工程菌的SDS-PAGE电泳分析 | 第43-44页 |
| ·粗酶液的制备 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE电泳凝胶的制备 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第44页 |
| ·工程菌的发酵 | 第44-47页 |
| ·上程菌生长监测 | 第44页 |
| ·发酵液pH值的调整 | 第44-45页 |
| ·发酵培养基中碳源的优化 | 第45页 |
| ·菌株E coliMG△pAF(C)KⅡ的发酵条件优化 | 第45-46页 |
| ·发酵液中L-苯丙氨酸浓度测定 | 第46页 |
| ·数据处理 | 第46-47页 |
| 第三章 实验结果 | 第47-64页 |
| 1 载体构建结果 | 第47-55页 |
| ·载体pAF(C)D的构建结果 | 第47-48页 |
| ·RBS-glpD基因的扩增和载体pAF(C)的酶切 | 第47页 |
| ·载体pAF(C)D的PCR鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·载体pAF(C)D的酶切鉴定结果 | 第48页 |
| ·载体pAF(C)KⅠ的构建结果 | 第48-50页 |
| ·RBSⅠ-glpK基因的扩增和载体pAF(C)的酶切 | 第48-49页 |
| ·载体pAF(C)KⅠ的PCR鉴定结果 | 第49页 |
| ·载体pAF(C)KⅠ的酶切鉴定结果 | 第49-50页 |
| ·载体pAF(L)KⅠ的构建结果 | 第50-51页 |
| ·RBSⅠ-glpK基因的扩增和载体pAF(L)的酶切 | 第50页 |
| ·载体pAF(L)KⅠ的PCR鉴定结果 | 第50-51页 |
| ·载体pAF(L)KⅠ的酶切鉴定结果 | 第51页 |
| ·载体pAF(C)KⅡ的构建结果 | 第51-53页 |
| ·载体pZE12-glpK的构建 | 第51页 |
| ·RBSⅡ-glpK基因的扩增和载体pAF(C)的酶切 | 第51-52页 |
| ·载体pAF(C)KⅡ的PCR鉴定结果 | 第52-53页 |
| ·载体pAF(C)KⅡ的酶切鉴定结果 | 第53页 |
| ·载体p31K的构建结果 | 第53-55页 |
| ·基因glpK的扩增和载体pZA31的酶切 | 第53-54页 |
| ·载体p31K的PCR鉴定结果 | 第54页 |
| ·载体p3IK的酶切鉴定结果 | 第54-55页 |
| 2 工程菌的构建结果 | 第55-59页 |
| ·工程菌的PCR鉴定结果 | 第55-57页 |
| ·工程菌的SDS-PAGE电泳分析结果 | 第57-59页 |
| 3 L-苯丙氨酸含量测定结果 | 第59-64页 |
| ·工程菌以15g/L葡萄糖为碳源发酵后的L-Phe产量 | 第59-60页 |
| ·工程菌以10g/L甘油为碳源发酵后的L-Phe产量 | 第60页 |
| ·工程菌生长曲线的绘制 | 第60-61页 |
| ·工程菌E.coliMG△pAF(C)KⅡ的发酵条件优化 | 第61-64页 |
| ·甘油和葡萄糖混合作为碳源时E.coliMG△pAF(C)KⅡ的L-Phe产量 | 第61-62页 |
| ·E.coliMG△pAF(C)KⅡ发酵条件的三因素三水平正交实验 | 第62-64页 |
| 第四章 讨论 | 第64-70页 |
| 1 载体和工程菌的构建与鉴定 | 第64-66页 |
| 2 工程菌发酵条件的优化 | 第66-67页 |
| 3 工程菌的L-Phe产量分析 | 第67-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 个人简历 | 第74页 |
| 攻读学位期间发表文章及参与课题研究 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
