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对斑马鱼redd1和redd2基因在体功能及其作用机理的初步研究

摘要第1-8页
Abstract第8-14页
第一章 引言第14-35页
   ·DDIT 蛋白家族第14-16页
     ·DDIT1、DDIT2 以及 DDIT3 蛋白的结构和功能第14-16页
   ·DDIT4,即 REDD1 的结构及生物学特性第16-24页
     ·REDD1 的结构和生化特征第16-17页
     ·REDD1 的表达调控及生物学功能第17-22页
     ·REDD1 与胚胎发育第22-24页
   ·DDIT4L,即 REDD2 的结构及生物学特性第24-26页
     ·REDD2 的发现及生物学功能第24-25页
     ·REDD1 和 REDD2 的异同第25-26页
   ·Wnt 信号通路系统概述第26-31页
     ·Wnt 基因、蛋白第26-27页
     ·经典 Wnt 信号通路第27-28页
     ·非经典 Wnt 信号通路第28-30页
     ·靶基因的激活和抑制调节第30页
     ·Wnt 信号通路在肿瘤和人类疾病中的作用第30-31页
   ·斑马鱼及其早期胚胎发育第31-34页
     ·斑马鱼第31-32页
     ·斑马鱼早期胚胎发育第32-33页
     ·经典 Wnt 信号通路在中囊胚转换时期的作用第33-34页
   ·立题依据和研究意义第34-35页
第二章 斑马鱼 redd1 和 redd2 的克隆、表达和基因调控第35-66页
   ·引言第35-36页
   ·材料和方法第36-49页
     ·化学试剂第36页
     ·实验仪器第36-37页
     ·实验动物第37页
     ·提取总 RNA第37-38页
     ·扩增开放阅读框第38-39页
     ·5’RACE 和 3’RACE第39-42页
     ·Blast 分析和序列比对第42-43页
     ·系统进化分析第43页
     ·基因结构和染色体定位分析第43页
     ·普通 RT-PCR第43-44页
     ·原位杂交探针的合成第44-45页
     ·整胚原位杂交第45-48页
     ·基因表达调控实验样品的获得第48页
     ·基因表达调控第48-49页
     ·统计分析第49页
   ·结果第49-63页
     ·斑马鱼 redd1 和 redd2 基因的克隆和序列分析第49-57页
     ·斑马鱼 redd1 和 redd2 基因具有不同的时空表达方式第57-59页
     ·斑马鱼 redd1 和 redd2 基因具有不同的表达调控方式第59-63页
   ·讨论第63-66页
第三章 斑马鱼 redd1 和 redd2 基因通过拮抗经典 Wnt 信号通路来调节胚胎背腹轴发育第66-85页
   ·引言第66-68页
   ·材料和方法第68-73页
     ·化学试剂第68页
     ·实验仪器第68页
     ·实验动物第68页
     ·RNA 的提取和反转录合成 cDNA第68页
     ·mRNA 的合成第68-70页
     ·显微注射第70页
     ·Western 免疫印迹中样品的制备第70页
     ·Western 免疫印迹第70-71页
     ·整胚原位杂交第71页
     ·细胞培养和转染第71-72页
     ·荧光素酶活性检测第72-73页
     ·统计分析第73页
   ·结果第73-82页
     ·过表达斑马鱼 redd1 和 redd2 基因使胚胎产生腹部化表型第73-75页
     ·redd1 和 redd2 基因敲降的胚胎呈现背部化表型第75-77页
     ·斑马鱼 redd1 和 redd2 基因影响胚胎的背腹轴发育第77-78页
     ·过表达斑马鱼Redd1和Redd2在体内和体外均拮抗经典Wnt信号通路第78-80页
     ·斑马鱼 Redd1 和 Redd2 抑制经典 Wnt 信号通路的机制探讨第80-82页
   ·讨论第82-85页
第四章 总结与展望第85-88页
参考文献第88-96页
致谢第96-97页
个人简历第97-98页
博士期间发表与撰写的文章第98页

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