| 摘要 | 第1-20页 |
| ABSTRACT | 第20-25页 |
| 符号说明 | 第25-26页 |
| 第一章 绪论 | 第26-39页 |
| 1 华蟾素的来源 | 第26-27页 |
| 2 华蟾素预防和治疗原发性肝癌的临床研究进展 | 第27-28页 |
| ·华蟾素临床治疗乙型肝炎 | 第27页 |
| ·华蟾素静脉滴注治疗原发性肝癌 | 第27-28页 |
| ·华蟾素肝动脉化疗栓塞治疗肝癌 | 第28页 |
| ·华蟾素肝内注射治疗肝癌 | 第28页 |
| 3 华蟾素的化学组成 | 第28-33页 |
| ·蟾蜍二烯酸内酯类及其衍生物 | 第28-30页 |
| ·胆固醇类 | 第30-31页 |
| ·吲哚生物碱类 | 第31页 |
| ·蟾蜍环酰胺类 | 第31-32页 |
| ·有机酸 | 第32页 |
| ·肽类 | 第32-33页 |
| ·其它成分 | 第33页 |
| 4 华蟾素抗肿瘤的作用机制 | 第33-34页 |
| 5 立题依据和研究目的 | 第34-39页 |
| 第二章 华蟾素抗肝癌有效成分的筛选和鉴定 | 第39-58页 |
| 1 材料 | 第40-41页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·华蟾素的来源及制备 | 第40页 |
| ·色谱材料 | 第40页 |
| ·TLC显色剂 | 第40-41页 |
| 2 方法 | 第41-43页 |
| ·细胞培养 | 第41页 |
| ·MTT法测定药物对HepG_2细胞增殖的抑制作用 | 第41-42页 |
| ·TLC法对华蟾素不同组分的检测 | 第42页 |
| ·部位分离 | 第42-43页 |
| ·硅胶柱层析 | 第43页 |
| ·半制备HPLC | 第43页 |
| ·化合物纯度的测定 | 第43页 |
| ·化合物结构的鉴定 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-48页 |
| ·华蟾素各萃取组分对HepG2细胞的生长抑制作用 | 第43-45页 |
| ·活性追踪分离法对华蟾素氯仿提取物中抗肿瘤活性化合物的筛选 | 第45-47页 |
| ·华蟾素氯仿提取物中活性组分的跟踪分离 | 第45-46页 |
| ·Fraction Ⅲ中活性组分的跟踪分离 | 第46-47页 |
| ·Fraction 8中单一化合物的分离及纯度鉴定 | 第47页 |
| ·化合物的结构鉴定 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| ·华蟾素化学成分的部位分离 | 第48页 |
| ·华蟾素有效成分的活性追踪分离 | 第48-49页 |
| ·蟾蜍二烯羟酸内酯类化合物 | 第49-50页 |
| 5 本章小结 | 第50-58页 |
| 第三章 华蟾蜍精体外抗肝癌活性及作用机制研究 | 第58-69页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58-59页 |
| ·溶液的配制 | 第59页 |
| 2 方法 | 第59-62页 |
| ·细胞培养 | 第59页 |
| ·MTT法测定药物对HepG_2细胞的生长抑制作用 | 第59-60页 |
| ·Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡 | 第60页 |
| ·PI染色法测定细胞凋亡率 | 第60-61页 |
| ·Western blotting法检测凋亡相关蛋白的表达 | 第61-62页 |
| ·蛋白样品收集 | 第61页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第61页 |
| ·蛋白印迹分析 | 第61-62页 |
| ·统计方法 | 第62页 |
| 3 结果 | 第62-65页 |
| ·脂蟾毒配基和华蟾蜍精对HepG_2细胞增殖的抑制作用 | 第62页 |
| ·华蟾蜍精对HepG_2细胞凋亡的影响 | 第62页 |
| ·华蟾蜍精对HepG_2细胞Bax及Bcl-2蛋白表达的影响 | 第62页 |
| ·华蟾蜍精对HepG_2细胞Caspase-3及Caspase-9蛋白表达的影响 | 第62-65页 |
| 4 讨论 | 第65-68页 |
| ·蟾蜍二烯羟酸内酯类化合物的抗肿瘤活性 | 第65-66页 |
| ·华蟾蜍精对HepG_2细胞的凋亡的影响 | 第66-67页 |
| ·华蟾蜍精对HepG_2细胞Bax及Bcl-2蛋白表达的影响 | 第67页 |
| ·华蟾蜍精对HepG_2细胞Caspase-3及Caspase-9蛋白表达的影响 | 第67-68页 |
| 5 本章小结 | 第68-69页 |
| 第四章 华蟾蜍精对裸鼠人肝癌移植模型抗肿瘤作用及机制的研究 | 第69-81页 |
| 1 材料 | 第69-71页 |
| ·主要仪器 | 第69页 |
| ·主要试剂 | 第69页 |
| ·溶液的配制 | 第69-70页 |
| ·实验动物和瘤株 | 第70页 |
| ·药物 | 第70-71页 |
| 2 方法 | 第71-73页 |
| ·细胞培养 | 第71页 |
| ·裸鼠人肝癌(HepG_2)移植模型的建立 | 第71页 |
| ·模型分组及给药 | 第71页 |
| ·瘤体积的测定 | 第71-72页 |
| ·组织学观察 | 第72页 |
| ·TUNEL法检测细胞凋亡 | 第72页 |
| ·Western blotting法检测凋亡相关蛋白的表达 | 第72-73页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第72页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第72页 |
| ·蛋白印迹分析 | 第72-73页 |
| ·统计方法 | 第73页 |
| 3 结果 | 第73-78页 |
| ·药物的毒性 | 第73页 |
| ·荷瘤裸鼠模型体重及肿瘤变化 | 第73页 |
| ·裸鼠人肝癌移植模型治疗后肿瘤的坏死程度 | 第73-75页 |
| ·华蟾蜍精对裸鼠人肝癌移植模型HepG_2细胞凋亡的影响 | 第75-77页 |
| ·华蟾蜍精对裸鼠肝癌组织中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响 | 第77页 |
| ·华蟾蜍精对裸鼠肝癌组织中Caspase-3、Caspase-9蛋白表达的影响 | 第77-78页 |
| 4 讨论 | 第78-80页 |
| ·裸鼠人肝癌移植模型 | 第78-79页 |
| ·细胞凋亡线粒体信号通路 | 第79-80页 |
| 5 本章小结 | 第80-81页 |
| 第五章 华蟾素抗肿瘤有效成分的含量测定 | 第81-88页 |
| 1 材料 | 第81-82页 |
| 2 方法与结果 | 第82-86页 |
| ·单一对照品贮备液的制备 | 第82页 |
| ·对照品混合溶液的制备 | 第82页 |
| ·色谱条件的确定 | 第82-83页 |
| ·线性关系的考察 | 第83-84页 |
| ·精密度试验 | 第84页 |
| ·稳定性试验 | 第84-85页 |
| ·加样回收率试验 | 第85页 |
| ·样品测定 | 第85-86页 |
| 3 讨论 | 第86-87页 |
| 4 本章小结 | 第87-88页 |
| 第六章 蟾皮超临界CO_2萃取物体外抗肝癌活性及作用机制研究 | 第88-98页 |
| 1 材料 | 第88-89页 |
| ·主要仪器 | 第88页 |
| ·主要试剂 | 第88-89页 |
| ·华蟾素的来源及制备 | 第89页 |
| ·SCE-TS的来源及制备 | 第89页 |
| 2 方法 | 第89-91页 |
| ·SCE-TS中华蟾蜍精及脂蟾蜍配基含量的测定 | 第89页 |
| ·细胞培养 | 第89页 |
| ·MTT法测定药物对HepG_2细胞的生长抑制作用 | 第89-90页 |
| ·Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡 | 第90页 |
| ·PI染色法测定细胞凋亡率 | 第90页 |
| ·Western blotting法检测凋亡相关蛋白的表达 | 第90-91页 |
| ·统计方法 | 第91页 |
| 3 结果 | 第91-96页 |
| ·SCE-TS中华蟾蜍精、脂蟾蜍配基的含量 | 第91页 |
| ·华蟾素、SCE-TS对HepG_2细胞增殖的抑制作用 | 第91-93页 |
| ·SCE-TS对HepG_2细胞凋亡的影响 | 第93-94页 |
| ·SCE-TS对HepG_2细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响 | 第94-95页 |
| ·SCE-TS对HepG_2细胞Caspase-3、Caspase-9表达及活性的影响 | 第95-96页 |
| 4 讨论 | 第96-97页 |
| 5 本章小结 | 第97-98页 |
| 总结与展望 | 第98-99页 |
| 1 论文主要结论 | 第98页 |
| 2 展望 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 博士期间发表的论文 | 第115-116页 |
| 学位论文评阅及答辩情况 | 第116-117页 |
| 外文论文 | 第117-122页 |
