| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 绪论 | 第9-13页 |
| ·门冬酰胺酶应用状况 | 第9-10页 |
| ·PEG 化概述 | 第10-11页 |
| ·研究目的和意义 | 第11页 |
| ·主要研究内容及技术路线 | 第11-13页 |
| 2 实验材料与方法 | 第13-26页 |
| ·主要实验材料 | 第13-14页 |
| ·主要试剂的配置 | 第14-17页 |
| ·L-ASP 原酶溶液配置 | 第14-15页 |
| ·mPEG-丙醛配置 | 第15页 |
| ·NaCNBH_3 溶液配置 | 第15页 |
| ·SDS-PAGE 溶液 | 第15页 |
| ·凝胶过滤缓冲液 | 第15页 |
| ·离子交换缓冲液 | 第15-16页 |
| ·反相色谱缓冲液 | 第16页 |
| ·酶活力测定溶液 | 第16页 |
| ·水平等电聚焦溶液 | 第16页 |
| ·Western Blot 溶液 | 第16-17页 |
| ·主要实验仪器 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-26页 |
| ·mPEG－ButyALD-20000 与 L-Asp 修饰反应及反应产物分析 | 第18-20页 |
| ·PEG-L-ASP 的分离纯化 | 第20页 |
| ·PEG-L-ASP 含量测定 | 第20-22页 |
| ·酶活力测定 | 第22页 |
| ·PEG-L-ASP 鉴定 | 第22-26页 |
| 3 结果与讨论 | 第26-46页 |
| ·PEG-L-ASP 的制备工艺研究 | 第26-32页 |
| ·偶联修饰剂的选择 | 第26页 |
| ·mPEG 修饰L-ASP 的工艺优化 | 第26-32页 |
| ·PEG-L-ASP 的分离纯化 | 第32-38页 |
| ·阴离子交换色谱粗分离L-ASP 和PEG-L-ASP 偶联物 | 第32-35页 |
| ·凝胶过滤色谱精纯化PEG-L-ASP | 第35-37页 |
| ·Sephadex G-25 脱除游离小分子 | 第37页 |
| ·修饰产物纯化前后SDS-PAGE 电泳比较 | 第37-38页 |
| ·PEG-L-ASP 的结构确证和理化性质 | 第38-45页 |
| ·Bradford 法测蛋白含量 | 第38-39页 |
| ·酶活力测定 | 第39页 |
| ·紫外扫描分析 | 第39-40页 |
| ·荧光胺法测修饰度分析 | 第40-42页 |
| ·等电点测定 | 第42页 |
| ·Western Blot 免疫印迹分析 | 第42-43页 |
| ·胰蛋白酶肽图分析 | 第43-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 4 结论与展望 | 第46-49页 |
| ·结论 | 第46-47页 |
| ·展望 | 第47页 |
| ·创新点 | 第47-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录 | 第54-55页 |
| 附件A：L-门冬酰胺酶的结构与修饰 | 第55-62页 |
| 附件B：蛋白质的PEG 修饰 | 第62-66页 |