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PTD对Bt杀虫蛋白Cry1Ac的增效和克抗分子机理研究

摘要第1-7页
Abstract第7-12页
第一章 文献综述第12-28页
   ·BT 毒素的研究进展第12-14页
     ·Bt 毒素的分类第12-13页
     ·Bt 毒蛋白的作用机理第13页
     ·Bt 基因工程第13-14页
   ·昆虫对BT 抗性研究进展第14-21页
     ·昆虫对Bt 抗性的发展第14-15页
     ·昆虫对Bt 的抗性机制第15页
     ·Bt 受体的研究进展第15-21页
   ·蛋白转导研究进展第21-24页
     ·蛋白转导结构域的发现第21-22页
     ·TAT-PTD 转导机制的研究第22-24页
     ·PTD 应用概述第24页
   ·昆虫杆状病毒表达系统第24-27页
     ·杆状病毒/昆虫表达系统的发展历史第24-26页
     ·昆虫杆状病毒表达系统的优点第26页
     ·重组杆状病毒的构建第26页
     ·BEVS 的应用第26-27页
   ·本研究的目的和意义第27-28页
第二章 研究内容和技术路线第28-30页
   ·研究内容第28页
   ·技术路线第28-30页
第三章 融合蛋白的毒力测定第30-38页
   ·材料和试剂第30-32页
   ·实验方法第32-34页
     ·融合蛋白TAT-Cry1Ac 的构建第32-33页
     ·TAT-Cry1Ac 融合基因在大肠杆菌BL21 中的诱导表达第33-34页
     ·融合蛋白的生物测定第34页
   ·结果与分析第34-36页
     ·融合蛋白的诱导表达第34-35页
     ·六种融合杀虫蛋白的毒力测定结果第35-36页
   ·小结第36-38页
第四章 小菜蛾类钙粘蛋白基因的克隆及序列分析第38-59页
   ·试验材料第38-40页
   ·试验方法第40-44页
     ·小菜蛾中肠RNA 的提取第40页
     ·反转录第40-41页
     ·钙粘蛋白(CAD)的PCR 扩增第41页
     ·PCR 产物的回收纯化第41-42页
     ·PCR 纯化产物与pEASY-T1 载体的连接第42页
     ·转化感受态细胞TOP 10第42页
     ·质粒DNA 的提取第42页
     ·检测第42-43页
     ·钙粘蛋白序列测定第43-44页
   ·结果与分析第44-58页
     ·小菜蛾中肠RNA 提取第44页
     ·CAD 的PCR 扩增第44-45页
     ·质粒酶切及PCR第45-46页
     ·核酸序列结果与分析第46-58页
   ·小结第58-59页
第五章 CAD 的表达及鉴定第59-73页
   ·材料和试剂第59-61页
   ·试验方法第61-67页
     ·双酶切重组质粒(pEASY-T/CAD)和供体质粒(pFastBacHTb)第61页
     ·胶回收第61-62页
     ·连接第62页
     ·转化至TOP10第62页
     ·质粒DNA 的提取第62页
     ·双酶切及PCR 鉴定第62-63页
     ·DH108ac 感受态细胞的制备第63页
     ·转化至DH108ac第63页
     ·提取杆粒Bac/CAD DNA第63-64页
     ·PCR 鉴定第64页
     ·共转染第64-66页
     ·亲和能力测定(采用ELISA)第66-67页
   ·结果与分析第67-72页
     ·重组转移载体pFastBacHTb/CAD 的构建第67-68页
     ·重组杆状病毒的鉴定第68-69页
     ·重组病毒转染Tn 细胞第69-70页
     ·CAD 在昆虫细胞中的表达第70-71页
     ·亲和能力测定第71-72页
   ·小结第72-73页
第六章 结论第73-74页
参考文献第74-84页
致谢第84-85页
作者简历第85页

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