| 目录 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 缩略词表 | 第16-18页 |
| 第1章:文献综述 | 第18-40页 |
| ·单核细胞增多性李斯特菌感染的公共卫生学意义 | 第18-19页 |
| ·单核细胞增多性李斯特菌感染与防治 | 第19-30页 |
| ·生物学分类 | 第19页 |
| ·生物学特性 | 第19-21页 |
| ·形态与染色特性 | 第19页 |
| ·培养特性 | 第19-20页 |
| ·生化特性 | 第20页 |
| ·抵抗力 | 第20页 |
| ·血清型及分型 | 第20-21页 |
| ·致病性 | 第21页 |
| ·流行病学 | 第21-22页 |
| ·临床症状 | 第22页 |
| ·致病机理 | 第22-23页 |
| ·诊断与检测技术进展 | 第23-29页 |
| ·分离培养鉴定 | 第23-25页 |
| ·免疫学检测技术 | 第25-27页 |
| ·分子生物学检测技术 | 第27-29页 |
| ·防治 | 第29-30页 |
| ·单核细胞增多性李斯特菌分子生物学研究 | 第30-39页 |
| ·分子流行病学 | 第30-31页 |
| ·主要的毒力因子 | 第31-36页 |
| ·溶血素 | 第31-32页 |
| ·磷脂酶C | 第32-33页 |
| ·胞外蛋白ActA | 第33-34页 |
| ·金属蛋白酶Mpl | 第34页 |
| ·PrfA转录激活调节蛋白基因 | 第34页 |
| ·内化素 | 第34-35页 |
| ·P60 | 第35页 |
| ·培养条件对毒力因子表达的影响 | 第35-36页 |
| ·单核细胞增多性李斯特菌毒力岛研究 | 第36-38页 |
| ·LIPI-1 | 第36-37页 |
| ·LIPI-2 | 第37-38页 |
| ·单核细胞增多性李斯特菌在疫苗研制中的应用 | 第38-39页 |
| ·展望 | 第39-40页 |
| 第2章:研究目的与意义 | 第40-42页 |
| 第3章:单核细胞增多性李斯特菌分离鉴定与生物学特性研究 | 第42-55页 |
| ·材料 | 第42-44页 |
| ·实验样品 | 第42页 |
| ·实验菌株 | 第42-43页 |
| ·培养基与实验动物 | 第43-44页 |
| ·主要试剂与溶液的配制 | 第44页 |
| ·主要设备 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-47页 |
| ·菌株的分离培养 | 第44-45页 |
| ·革兰氏染色镜检 | 第45页 |
| ·分离菌株生化鉴定 | 第45页 |
| ·计数试验 | 第45页 |
| ·小鼠毒力测定 | 第45-46页 |
| ·药敏试验 | 第46页 |
| ·平板溶血试验 | 第46页 |
| ·溶血活性测定 | 第46-47页 |
| ·微量反应板梯度稀释法 | 第46页 |
| ·紫外分光光度法 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-51页 |
| ·单核细胞增多性李斯特菌分离鉴定 | 第47-48页 |
| ·分离鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·菌落特征与形态 | 第48页 |
| ·生化鉴定 | 第48页 |
| ·平板溶血试验 | 第48页 |
| ·药敏试验 | 第48-49页 |
| ·小鼠毒力试验 | 第49页 |
| ·溶血素活性测定 | 第49-51页 |
| ·微量反应板梯度稀释法 | 第49-50页 |
| ·分光光度法检测LM溶血素活性 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-54页 |
| ·分离鉴定和培养基的改良 | 第51-52页 |
| ·溶血素活性及影响因素 | 第52-53页 |
| ·溶血活性测定 | 第53页 |
| ·冷冻食品中的LM污染 | 第53-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 第4章 单核细胞增多性李斯特菌PCR和PCR-ELISA检测方法研究 | 第55-72页 |
| ·实验材料 | 第55-58页 |
| ·质粒与菌株 | 第55页 |
| ·引物与探针 | 第55-56页 |
| ·主要培养基 | 第56-57页 |
| ·酶与试剂 | 第57页 |
| ·主要试剂配制 | 第57-58页 |
| ·试验仪器与器材 | 第58页 |
| ·试验方法 | 第58-61页 |
| ·样品的处理与菌株分离鉴定 | 第58页 |
| ·DNA模板的制备 | 第58页 |
| ·PCR反应与检测 | 第58-59页 |
| ·PCR反应体系与条件 | 第58-59页 |
| ·PCR扩增产物的电泳检测 | 第59页 |
| ·PCR产物测序鉴定 | 第59页 |
| ·微孔板包被 | 第59页 |
| ·扩增产物微孔板杂交检测 | 第59-60页 |
| ·变性反应条件优化 | 第59页 |
| ·杂交探针的浓度选择 | 第59页 |
| ·杂交条件选择 | 第59-60页 |
| ·显色条件优化 | 第60页 |
| ·特异性试验 | 第60页 |
| ·敏感性试验 | 第60页 |
| ·重复性试验 | 第60-61页 |
| ·样品检测 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-68页 |
| ·hlyA基因PCR检测结果 | 第61-63页 |
| ·hlyA基因PCR电泳检测结果 | 第61-62页 |
| ·hlyA基因PCR产物测序结果 | 第62-63页 |
| ·hlyA基因PCR-ELISA检测方法的建立 | 第63-65页 |
| ·包被与封闭条件的选择 | 第63页 |
| ·变性条件选择 | 第63页 |
| ·杂交条件选择 | 第63-65页 |
| ·化学变性与热变性杂交反应结果比较 | 第65页 |
| ·酶促显色条件选择 | 第65页 |
| ·PCR产物浓度选择 | 第65页 |
| ·PCR与PCR-ELISA方法敏感性试验 | 第65-66页 |
| ·特异性试验 | 第66-67页 |
| ·重复性试验 | 第67-68页 |
| ·样品检测结果 | 第68页 |
| ·讨论 | 第68-71页 |
| ·关于靶基因的选择 | 第69页 |
| ·PCR-ELISA方法与体系优化 | 第69-70页 |
| ·方法敏感性与特异性 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第5章:单核细胞增多性李斯特菌LIPI-1全基因克隆与序列分析 | 第72-100页 |
| ·材料 | 第72-76页 |
| ·菌种与质粒 | 第72-73页 |
| ·主要培养基 | 第73页 |
| ·主要药品及试剂盒 | 第73-74页 |
| ·引物 | 第74-75页 |
| ·主要试剂的配制 | 第75页 |
| ·主要仪器设备 | 第75-76页 |
| ·试验方法 | 第76-81页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第76页 |
| ·基因分段扩增 | 第76-77页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第77页 |
| ·PCR产物的T克隆载体构建 | 第77-78页 |
| ·加A尾反应 | 第77页 |
| ·连接反应 | 第77-78页 |
| ·连接产物的转化筛选 | 第78页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第78页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第78-79页 |
| ·酶切产物的回收与纯化 | 第79页 |
| ·序列测定与分析 | 第79-81页 |
| ·结果与分析 | 第81-95页 |
| ·各基因片段PCR扩增 | 第81-82页 |
| ·PCR扩增片段与pTA2载体的连接、转化与鉴定 | 第82-83页 |
| ·LIPI-1各基因克隆片段的序列测定 | 第83-84页 |
| ·LIPI-1各毒力基因序列分析 | 第84-92页 |
| ·prfA | 第84-85页 |
| ·picA | 第85-86页 |
| ·hlyA | 第86-87页 |
| ·mpl | 第87-88页 |
| ·actA | 第88-89页 |
| ·plcB | 第89-90页 |
| ·LIPI-1全基因序列分析 | 第90-92页 |
| ·PrfA蛋白结合区分析 | 第92页 |
| ·LIPI-1基因编码毒力蛋白的特征分析 | 第92-95页 |
| ·各毒力基因编码蛋白的信号肽预测 | 第92-94页 |
| ·各毒力基因编码蛋白的跨膜区预测 | 第94页 |
| ·各毒力基因编码蛋白的其它结构特点 | 第94-95页 |
| ·讨论 | 第95-99页 |
| ·小结 | 第99-100页 |
| 第6章:结论 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 附录1 LM菌株XFL0605 LIPI-1毒力岛全基因序列 | 第119-124页 |
| 附录2 LM菌株XFL0605 LIPI-1基因推导氨基酸序列 | 第124-126页 |
| 附录3 个人资料 | 第126页 |
