| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| ·ASPV的生物学特性 | 第13-15页 |
| ·ASPV的地理分布与寄主范围 | 第13-14页 |
| ·ASPV的症状特点 | 第14-15页 |
| ·ASPV的传播途径 | 第15页 |
| ·ASPV的病毒粒子特性和细胞病理学 | 第15页 |
| ·血清学及株系 | 第15-16页 |
| ·ASPV的基因组结构和组成 | 第16-17页 |
| ·ASPV的检测技术 | 第17-19页 |
| ·指示植物检测 | 第17页 |
| ·血清学检测 | 第17-18页 |
| ·分子生物学检测 | 第18-19页 |
| ·病毒抗血清的制备 | 第19-20页 |
| ·以提纯病毒粒体为抗原制备抗体 | 第19页 |
| ·以病毒CP基因体外表达产物为抗原制备抗体 | 第19-20页 |
| ·病毒病害的防治 | 第20-22页 |
| ·培育和栽培无病毒苗木 | 第20-22页 |
| ·抗病毒转基因工程 | 第22页 |
| ·研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 苹果茎痘病毒的生物学及分子生物学鉴定 | 第23-39页 |
| ·试验材料 | 第23-24页 |
| ·样品来源 | 第23页 |
| ·菌株及主要试剂 | 第23-24页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·研究方法 | 第24-31页 |
| ·生物学鉴定 | 第24-25页 |
| ·分子生物学检测 | 第25-27页 |
| ·反转录合成cDNA | 第25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测(PAGE) | 第26-27页 |
| ·病毒粒子形态观察 | 第27-28页 |
| ·镁-皂土悬浮液的制备 | 第27页 |
| ·病毒提纯方法 | 第27-28页 |
| ·电镜观察 | 第28页 |
| ·基因克隆 | 第28-31页 |
| ·目的片段的扩增 | 第28页 |
| ·目的片段的回收 | 第28-29页 |
| ·载体的连接 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·热击转化大肠杆菌DH10B感受态细胞 | 第29-30页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第30页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第30页 |
| ·序列测定与分析 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-39页 |
| ·ASPV的生物学鉴定及分子检测结果 | 第31-33页 |
| ·生物学特性 | 第31-32页 |
| ·TC-RT-PCR检测结果 | 第32-33页 |
| ·病毒粒子形态观察 | 第33页 |
| ·CP基因部分序列的克隆与序列分析 | 第33-38页 |
| ·克隆与鉴定 | 第33-34页 |
| ·核苷酸序列分析 | 第34-38页 |
| ·小结与讨论 | 第38-39页 |
| 第三章 ASPV CP基因原核表达载体构建及表达蛋白抗体制备 | 第39-54页 |
| ·试验材料 | 第39-40页 |
| ·CP基因来源及克隆所用质粒和菌株 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·引物设计 | 第39-40页 |
| ·研究方法 | 第40-46页 |
| ·CP基因克隆与序列测定 | 第40-41页 |
| ·CP基因的PCR扩增 | 第40页 |
| ·CP基因PCR产物的克隆 | 第40页 |
| ·质粒DNA的制备及重组质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| ·序列测定与分析 | 第41页 |
| ·CP基因的原核表达 | 第41-43页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·CP基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第43页 |
| ·重组蛋白的大量制备及定量 | 第43-44页 |
| ·抗血清的制备 | 第44页 |
| ·免疫注射 | 第44页 |
| ·抗血清的收集与保存 | 第44页 |
| ·吸附去除非目的蛋白产生的抗体 | 第44页 |
| ·间接ELISA(Indirect ELISA,ID-ELISA)测定抗血清的效价 | 第44-45页 |
| ·Western-blot分析 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-54页 |
| ·基因克隆与序列测定 | 第46-47页 |
| ·CP基因的扩增 | 第46页 |
| ·重组克隆质粒的PCR及质粒酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·CP基因序列分析 | 第47页 |
| ·原核表达及抗血清制备 | 第47-51页 |
| ·表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·重组质粒转化表达菌BL21(DE3) | 第48-49页 |
| ·原核表达及SDS-PAGE分析 | 第49-50页 |
| ·表达蛋白的Western-blot分析 | 第50页 |
| ·重组蛋白的浓度测定 | 第50-51页 |
| ·ID-ELISA法测定抗血清的效价 | 第51-52页 |
| ·制备抗血清的Western-blot分析 | 第52页 |
| ·小结与讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录:主要试剂及溶液的配制 | 第60-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
