| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-28页 |
| ·细胞质雄性不育的研究意义 | 第13-14页 |
| ·细胞质雄性不育的利用有利于促进杂种优势的有效利用 | 第13页 |
| ·细胞质雄性不育的利用有利于提高种子纯度 | 第13-14页 |
| ·雄性不育的概念 | 第14页 |
| ·玉米中常见的几种雄性不育细胞质 | 第14-16页 |
| ·恢复专效性分类 | 第14-15页 |
| ·分子生物学分类 | 第15-16页 |
| ·平米CMS胞质育性相关基因研究 | 第16-21页 |
| ·不育基因位点及机理研究 | 第16-17页 |
| ·恢复机理研究 | 第17-19页 |
| ·雄性不育性恢复机理的假说 | 第19-21页 |
| ·代谢与互作假说 | 第19页 |
| ·抑制细胞程序性死亡(Program Cell Death.PCD)假说 | 第19-20页 |
| ·RNA加工假说 | 第20-21页 |
| ·植物转基因研究进展 | 第21-25页 |
| ·常用的植物转基因方法、原理 | 第21页 |
| ·基因枪转化法 | 第21-22页 |
| ·农杆菌介导转化法 | 第22-23页 |
| ·花粉管通道法 | 第23页 |
| ·化学物质诱导法 | 第23-24页 |
| ·电激穿孔法 | 第24页 |
| ·脂质体法 | 第24-25页 |
| ·其他方法 | 第25页 |
| ·细胞核与线粒体蛋白质 | 第25-26页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 2 实验材料及方法 | 第28-44页 |
| ·研究材料及试剂 | 第28-29页 |
| ·植物材料和所用质粒、菌株 | 第28页 |
| ·用于遗传转化的基因片段 | 第28页 |
| ·各种酶及试剂 | 第28-29页 |
| ·本实验所用到的引物 | 第29页 |
| ·载体改造方法 | 第29-37页 |
| ·载体改造路线 | 第29-31页 |
| ·花粉特异性启动子序列的克隆 | 第31-34页 |
| ·植物材料中总DNA的抽提 | 第31页 |
| ·zm13启动子的扩增 | 第31-33页 |
| ·电转化感受态的制备 | 第33页 |
| ·PCR产物连接 | 第33-34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第34页 |
| ·pZM13中间载体的构建 | 第34-35页 |
| ·DNA酶切 | 第34-35页 |
| ·两回收片段的连接及转化 | 第35页 |
| ·阳性克隆的筛选及测序 | 第35页 |
| ·线粒体靶向序列的克隆 | 第35页 |
| ·orf77的克隆 | 第35-36页 |
| ·orf17的定点诱变 | 第36页 |
| ·pLP77、pLP17中间载体的构建 | 第36-37页 |
| ·DNA酶切 | 第36页 |
| ·回收片段的连接及转化 | 第36页 |
| ·阳性克隆的筛选及测序 | 第36-37页 |
| ·最终载体pZMLP77和pZMLP17的构建 | 第37页 |
| ·双酶切两中间载体 | 第37页 |
| ·回收片段的连接、转化 | 第37页 |
| ·阳性克隆的筛选及测序 | 第37页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化法转化玉米18-599W、18-599R | 第37-39页 |
| ·农杆菌菌株的准备 | 第37页 |
| ·幼胚胚性愈伤组织的诱导与继代 | 第37-38页 |
| ·米农杆菌浸染过程 | 第38-39页 |
| ·农杆菌侵染液的准备 | 第38页 |
| ·抗性愈伤的筛选及再生 | 第38-39页 |
| ·基因枪转化转化玉米18-599W、18-599R | 第39-40页 |
| ·转化受体的准备 | 第39页 |
| ·微弹制备 | 第39页 |
| ·基因枪准备及轰击 | 第39-40页 |
| ·抗性愈伤的筛选及再生 | 第40页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化法转化水稻牡丹江8号 | 第40-41页 |
| ·农杆菌菌株的准备 | 第40页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化法转化水稻 | 第40-41页 |
| ·花序浸染法转化拟南芥 | 第41-42页 |
| ·农杆菌菌株的准备 | 第41页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化法转化拟南芥花序 | 第41-42页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第42页 |
| ·基因的表达分析 | 第42-44页 |
| ·RNA的抽提及检测 | 第42-43页 |
| ·RT-PCR | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-56页 |
| ·各基因片段的准备 | 第44-46页 |
| ·基因orf77的克隆 | 第44页 |
| ·基因orf17的体外定点诱变 | 第44-45页 |
| ·花粉特异性启动子zm13的克隆 | 第45-46页 |
| ·线粒体靶向序列的全基因合成 | 第46页 |
| ·载体的构建 | 第46-47页 |
| ·中间载体pLP77、pLP17的酶切检测 | 第46页 |
| ·中间载体pZM1303的酶切检测 | 第46-47页 |
| ·玉米转化的结果与分析 | 第47-48页 |
| ·水稻转化的结果与分析 | 第48-54页 |
| ·T0代转基因水稻的PCR检测 | 第48-50页 |
| ·T1代转基因水稻的PCR检测 | 第50-51页 |
| ·T1代转基因水稻的转录水平检测 | 第51-52页 |
| ·T0代转基因水稻的花粉育性检测 | 第52-53页 |
| ·T1代转基因水稻的花粉育性检测 | 第53-54页 |
| ·拟南芥转化的结果与分析 | 第54-56页 |
| ·T0代转基因拟南芥的PCR检测 | 第54-55页 |
| ·T1代转基因拟南芥的PCR检测 | 第55页 |
| ·T0代转基因拟南芥的花粉育性观察 | 第55页 |
| ·T1代转基因拟南芥的花粉育性观察 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-60页 |
| ·育性相关的候选基因orf77、orf17 | 第56页 |
| ·载体构建的讨论 | 第56-57页 |
| ·线粒体靶向序列 | 第56-57页 |
| ·花粉特异性启动子 | 第57页 |
| ·orf77、orf17对植株育性的影响 | 第57-58页 |
| ·玉米的转化改进 | 第58-59页 |
| ·下一步工作计划 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录1 常用培养基和溶液的配制 | 第70页 |
| 附录2 提取质粒(小样法) | 第70-71页 |
| 附录3 凝胶回收DNA片段(TAKARA) | 第71-72页 |
| 附录4 电转化感受态的制备 | 第72页 |
| 附录5 电转化 | 第72-73页 |
| 附录6 物总DNA的小量提取(CTAB法) | 第73页 |
| 附录7 植物总DNA的大量提取(CTAB法) | 第73-74页 |
| 附录8 总RNA的提取 | 第74页 |
| 附录9 大样法抽提高浓度质粒 | 第74-75页 |
| 附录10 基因枪使用方法 | 第75-76页 |
| 附录11 玉米组培培养基 | 第76-77页 |
| 附录12 农杆菌法转化玉米所用培养基 | 第77-78页 |
| 附录13 基因枪法转化玉米所用培养基 | 第78-79页 |
| 附录14 水稻遗传转化培养基 | 第79-80页 |
| 附录15 玉米育性相关线粒体基因orf77编码序列 | 第80页 |
| 附录16 F-1-ATPase subunit 2的前导肽序列 | 第80页 |
| 附录17 F-1-ATPase subunit 2的氨基酸序列 | 第80页 |
| 附录18 花粉特异性启动子zm13序列 | 第80页 |
