中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-10页 |
第一篇 文献综述 | 第10-30页 |
禽类Mx 蛋白与抗病育种的研究进展 | 第10-30页 |
1 Mx 蛋白的发现 | 第10页 |
2 不同动物的Mx 蛋白 | 第10-11页 |
3 Mx 蛋白的结构与功能 | 第11页 |
4 Mx 蛋白的表达调控 | 第11-13页 |
5 Mx 蛋白的抗病毒活性 | 第13-14页 |
6 禽类Mx 蛋白的研究进展 | 第14-15页 |
7 动物抗病性的遗传基础 | 第15-17页 |
8 抗病育种存在的问题 | 第17-18页 |
9 抗病育种的途径 | 第18-20页 |
10 精原干细胞 | 第20-21页 |
11 精原干细胞在转基因技术中的应用 | 第21-24页 |
12 研究展望 | 第24页 |
参考文献 | 第24-30页 |
第二篇 试验研究 | 第30-60页 |
实验一 鸡Mx 基因全长cDNA 序列的克隆及序列分析 | 第30-39页 |
1 材料和方法 | 第30-35页 |
·菌种及试剂 | 第30-31页 |
·受精蛋 | 第31页 |
·成纤维细胞的制备与培养 | 第31页 |
·Mx 蛋白的诱导 | 第31-32页 |
·RNA 的提取 | 第32页 |
·RT-PCR 扩增 | 第32-33页 |
·Mx cDNA 的克隆 | 第33-35页 |
·序列分析 | 第35页 |
2 结果与分析 | 第35-37页 |
·鸡成纤维细胞总RNA 的提取 | 第35页 |
·鸡全长Mx cDNA 的扩增 | 第35-36页 |
·测序结果 | 第36-37页 |
·序列分析 | 第37页 |
3 讨论 | 第37-38页 |
参考文献 | 第38-39页 |
实验二 鸡Mx 蛋白基因的修饰、表达及抗病活性的研究 | 第39-51页 |
1 材料和方法 | 第39-43页 |
·实验材料 | 第39页 |
·试剂 | 第39-40页 |
·引物设计 | 第40页 |
·PCR 诱变修饰 | 第40-41页 |
·表达载体的构建 | 第41页 |
·脂质体法转染细胞 | 第41-42页 |
·Mx 基因转染COS-Ⅰ细胞 | 第42页 |
·RT-PCR 检测Mx 的表达 | 第42页 |
·IFA 检测转染Mx 蛋白基因的表达 | 第42页 |
·新城疫病毒接种细胞 | 第42-43页 |
·新城疫病毒TCID_(50) 测定 | 第43页 |
·抗新城疫病毒活性的检测 | 第43页 |
2 结果与分析 | 第43-48页 |
·PCR 诱变修饰 | 第43-44页 |
·真核表达载体的构建 | 第44页 |
·RT-PCR 检测Mx 的表达 | 第44-45页 |
·IFA 检测转染Mx 蛋白基因的表达 | 第45-46页 |
·新城疫病毒TCID_(50) 测定 | 第46-47页 |
·抗新城疫病毒试验 | 第47-48页 |
3 讨论 | 第48-49页 |
参考文献 | 第49-51页 |
实验三 精原干细胞体内介导Mx 基因生产转基因鸡的研究 | 第51-60页 |
1 材料和方法 | 第51-53页 |
·实验材料 | 第51页 |
·试剂 | 第51页 |
·转染液制备 | 第51-52页 |
·睾丸内注射pcDNA3.0-MMx 质粒DNA 片段 | 第52页 |
·转染公鸡日常活动观察和鸡精子常规检测 | 第52页 |
·人工授精 | 第52页 |
·PCR 检测 | 第52-53页 |
·统计方法 | 第53页 |
2 结果与分析 | 第53-58页 |
·pcDNA3.0-MMx 质粒线性酶切 | 第53-54页 |
·转染公鸡精子常规检测结果 | 第54-55页 |
·转染精子检测 | 第55页 |
·转基因F1 代检测 | 第55-56页 |
·阳性转基因F1 代检测 | 第56-58页 |
3 讨论 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-60页 |
全文结论 | 第60-61页 |
致谢 | 第61-62页 |
攻读学位期间发表的论文目录 | 第62-63页 |