青蒿反义鲨烯合酶基因转化培育青蒿素高产植株的研究
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 引言 | 第11-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-33页 |
| 1 反义RNA及其功能 | 第15-19页 |
| ·反义RNA对基因表达的调控 | 第15-16页 |
| ·反义RNA作用于原核基因 | 第15-16页 |
| ·复制水平的调控 | 第15页 |
| ·转录水平的调控 | 第15页 |
| ·翻译水平的调控 | 第15-16页 |
| ·反义RNA作用于真核基因 | 第16页 |
| ·影响mRNA前体的剪接 | 第16页 |
| ·影响mRNA的转移 | 第16页 |
| ·影响mRNA的修饰 | 第16页 |
| ·反义RNA在植物基因表达调控中的应用 | 第16-19页 |
| ·抵御病毒感染 | 第16-17页 |
| ·抗RNA病毒 | 第16-17页 |
| ·抗DNA病毒 | 第17页 |
| ·抑制果实成熟 | 第17页 |
| ·改变花色 | 第17页 |
| ·降低直链淀粉含量 | 第17-18页 |
| ·提高硬脂酸含量 | 第18页 |
| ·控制雄性不育 | 第18页 |
| ·阻断特殊合成途径 | 第18页 |
| ·其他方面的应用 | 第18-19页 |
| 2 植物类异戊二烯合成及其生物学意义 | 第19-24页 |
| ·异戊二烯合成途径的亚细胞定位 | 第19-20页 |
| ·细胞质MVA途径 | 第20页 |
| ·质体非MVA途径 | 第20页 |
| ·类异戊二烯合成关键酶及其编码基因 | 第20-24页 |
| ·HMG-CoA还原酶 | 第20-21页 |
| ·鲨烯合酶 | 第21-22页 |
| ·异戊二烯基转移酶 | 第22页 |
| ·异戊烯焦磷酸合酶 | 第22-23页 |
| ·萜烯合酶 | 第23-24页 |
| 3 青蒿素的生物合成途径 | 第24-28页 |
| ·青蒿素合成的基本步骤 | 第24-26页 |
| ·假定的非酶促反应 | 第24-25页 |
| ·假定的酶促反应 | 第25-26页 |
| ·青蒿素合成酶类及其编码基因 | 第26-27页 |
| ·紫穗槐二烯合酶 | 第26-27页 |
| ·细胞色素P450酶系 | 第27页 |
| ·青蒿素合成基因表达及其调控 | 第27-28页 |
| ·体外培养条件下青蒿素合成基因的表达 | 第27-28页 |
| ·自然生长条件下青蒿素的积累规律 | 第28页 |
| 4 青蒿素的规模化生产及其现状 | 第28-29页 |
| ·青蒿素原料的来源 | 第28-29页 |
| ·青蒿素的非种植生产 | 第28页 |
| ·青蒿素的种植生产 | 第28-29页 |
| ·高产青蒿素的代谢途径工程育种 | 第29页 |
| ·增大青蒿素合成的碳流 | 第29页 |
| ·减少竞争性产物合成的碳流 | 第29页 |
| 5 本研究的立项依据 | 第29-33页 |
| ·研究目的和意义 | 第29-31页 |
| ·设计思路及研究对策 | 第31页 |
| ·创新点及未来展望 | 第31-33页 |
| 第二章 青蒿SS基因克隆与序列分析 | 第33-44页 |
| 1 材料 | 第33页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·菌种与质粒 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33页 |
| ·仪器 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-37页 |
| ·DNA提取 | 第33-34页 |
| ·RNA提取 | 第34页 |
| ·PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第35页 |
| ·质粒DNA提取 | 第35-36页 |
| ·扩增片段回收与T-A克隆 | 第36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第36页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-43页 |
| ·青蒿SS DNA扩增 | 第37页 |
| ·青蒿SS cDNA扩增 | 第37-38页 |
| ·青蒿SS DNA克隆与鉴定 | 第38页 |
| ·青蒿SS cDNA克隆与鉴定 | 第38-39页 |
| ·青蒿SS基因的序列分析 | 第39-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 第三章 反义基因载体构建与青蒿遗传转化 | 第44-50页 |
| 1 材料 | 第44页 |
| ·植物材料 | 第44页 |
| ·菌种与质粒 | 第44页 |
| ·抗生素和植物激素 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·仪器 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-46页 |
| ·酶切、回收和连接 | 第44-45页 |
| ·大肠杆菌转化与鉴定 | 第45页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备 | 第45页 |
| ·农杆菌细胞转化与鉴定 | 第45-46页 |
| ·植物叶盘转化 | 第46页 |
| ·转基因植株再生 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-48页 |
| ·反义SS基因表达载体构建 | 第46-47页 |
| ·反义SS基因载体转化大肠杆菌鉴定 | 第47页 |
| ·反义SS基因载体转化农杆菌鉴定 | 第47-48页 |
| ·转反义SS基因青蒿细胞培养及植株再生 | 第48页 |
| ·长期培养条件下转基因青蒿植株的表型观察 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 转基因青蒿植株分子鉴定及产物分析 | 第50-60页 |
| 1 材料 | 第50页 |
| ·植物材料 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·仪器 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-53页 |
| ·PCR检测 | 第50-51页 |
| ·Southern杂交 | 第51页 |
| ·半定量RT-PCR检测 | 第51-52页 |
| ·类固醇含量测定 | 第52页 |
| ·青蒿素含量测定 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-58页 |
| ·反义SS序列导入青蒿细胞的证据 | 第53-54页 |
| ·反义SS序列整合进青蒿基因组的证据 | 第54页 |
| ·转基因青蒿中SS基因表达水平的检测 | 第54-55页 |
| ·胆固醇标准曲线 | 第55-56页 |
| ·反义SS基因表达对类固醇合成的影响 | 第56页 |
| ·青蒿素标准曲线 | 第56-57页 |
| ·SS基因表达阻遏对青蒿素合成的影响 | 第57-58页 |
| ·冷胁迫促进转基因青蒿中青蒿素的积累 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 结语 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附录 | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
