| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-21页 |
| ·野油菜黄单胞菌致病变种的(Xcc)概述 | 第11-12页 |
| ·野油菜黄单胞菌简介 | 第11页 |
| ·Xcc基因组特征 | 第11-12页 |
| ·胞外多糖(EPS)的研究进展 | 第12-17页 |
| ·不同细菌的胞外多糖研究进展 | 第12-13页 |
| ·黄单胞菌胞外多糖的结构及理化特性 | 第13页 |
| ·黄单胞菌胞外多糖的应用 | 第13-14页 |
| ·黄单胞菌胞外多糖的合成 | 第14-17页 |
| ·微生物(细菌)的糖代谢途径 | 第17-20页 |
| ·EMP、HMP、ED研究进展 | 第17-19页 |
| ·EPS与EMP途径相关性的研究进展 | 第19-20页 |
| ·EMP途径研究的意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-34页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第21-22页 |
| ·细菌培养基 | 第22-23页 |
| ·菌株培养条件及保存: | 第23页 |
| ·抗生素及其贮存、使用浓度 | 第23-24页 |
| ·溶液与缓冲液 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-34页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第24页 |
| ·常规PCR反应 | 第24-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第27-28页 |
| ·质粒的提取 | 第28页 |
| ·总DNA的提取 | 第28页 |
| ·限制性内切酶酶切 | 第28页 |
| ·DNA连接 | 第28-29页 |
| ·电脉冲感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·转化 | 第29页 |
| ·三亲本接合 | 第29-30页 |
| ·Xcc 8004基因组上目标基因的整合突变体的构建 | 第30-31页 |
| ·胞外多糖的检测 | 第31页 |
| ·植株的致病性试验 | 第31页 |
| ·GUS(β-葡糖苷酸酶)活性检测 | 第31-32页 |
| ·粗酶液的提取及蛋白含量测定 | 第32页 |
| ·3-磷酸甘油醛脱氢酶检测 | 第32-33页 |
| ·磷酸甘油酸激酶检测 | 第33页 |
| ·1.6-二磷酸果糖醛缩酶检测 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-54页 |
| ·EMP途径相关基因的突变 | 第34-37页 |
| ·XC0972、XC0976、XC0979内部片段的PCR扩增 | 第34页 |
| ·将同源片段克隆到载体pK18mob上 | 第34-36页 |
| ·突变体的筛选及验证 | 第36-37页 |
| ·XC0972、XC0976、XC0979的生物信息学分析 | 第37-40页 |
| ·XC0972、XC0976、XC0979基因的基本特征 | 第37-38页 |
| ·3-磷酸甘油醛脱氢酶、磷酸甘油酸激酶、醛缩酶的基本性质 | 第38-40页 |
| ·XC0972、XC0976、XC0979突变体的功能互补 | 第40-43页 |
| ·XC0972、XC0976、XC0979全基因的扩增 | 第40页 |
| ·将XC0972、XC0976、XC0979全基因克隆到载体pLAFR上 | 第40-42页 |
| ·三亲本接合子的获得 | 第42-43页 |
| ·突变体的酶活性检测 | 第43-45页 |
| ·突变体的生长分析 | 第45-46页 |
| ·突变体在MMX中的生长分析 | 第45页 |
| ·突变体在含2%葡萄糖NYGB中的生长分析 | 第45-46页 |
| ·突变体的EPS产量分析 | 第46-51页 |
| ·不同碳源对突变体EPS的平板分析 | 第46-49页 |
| ·不同碳源对突变体EPS产量影响的摇瓶发酵分析 | 第49-50页 |
| ·gumgus活性分析 | 第50-51页 |
| ·突变体的致病性分析 | 第51-52页 |
| ·EMP途径与ED途径代谢关系的分析 | 第52-54页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第54-58页 |
| ·胞外多糖与致病性相互关系的分析 | 第54-55页 |
| ·Xcc中EMP途径作为一条能量代谢途径参与EPS合成,影响EPS合成的产量 | 第55-57页 |
| ·Xcc中EMP、ED途径可能的关系 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 附表一 NYGB中生长曲线的测定 | 第66页 |
| 附表二 突变体的EPS产量分析 | 第66页 |
| 附表三 突变体的GUS活性检测 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第68页 |
