重组巴斯德毕赤酵母发酵生产几丁质酶的研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-30页 |
| ·几丁质与几丁质酶 | 第13-19页 |
| ·几丁质 | 第13-14页 |
| ·几丁质的降解方式 | 第14页 |
| ·几丁质酶的分类 | 第14-16页 |
| ·几丁质酶的分子生物学 | 第16-18页 |
| ·几丁质酶的催化机理 | 第18页 |
| ·几丁质酶的分子进化 | 第18页 |
| ·几丁质酶的应用 | 第18-19页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白研究进展 | 第19-28页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的甲醇代谢特性 | 第20页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白的一般步骤 | 第20-21页 |
| ·外源基因导入巴斯德毕赤酵母的方法及其比较 | 第21-22页 |
| ·外源蛋白的糖基化 | 第22页 |
| ·影响巴斯德毕赤酵母外源蛋白表达的内在因素 | 第22-24页 |
| ·影响外源蛋白表达的培养条件 | 第24-27页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的发酵罐培养策略 | 第27-28页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白展望 | 第28页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第28-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-37页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·菌种 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·流加溶液 | 第30页 |
| ·实验所需主要药品与仪器设备 | 第30页 |
| ·灭菌方法 | 第30-31页 |
| ·发酵方法 | 第31页 |
| ·菌种的保藏 | 第31页 |
| ·种子活化 | 第31页 |
| ·摇瓶水平菌体培养 | 第31页 |
| ·摇瓶水平重组几丁质酶的诱导表达 | 第31页 |
| ·分析方法 | 第31-37页 |
| ·菌体湿重测定方法 | 第31页 |
| ·铵离子浓度测定：酚-靛蓝法 | 第31-32页 |
| ·甲醇浓度测定 | 第32-33页 |
| ·发酵液中甘油浓度的测定 | 第33页 |
| ·总蛋白测定：Bradford 法 | 第33-34页 |
| ·几丁质酶酶活力测定 | 第34-36页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析表达产物 | 第36-37页 |
| 第三章 摇瓶诱导条件研究 | 第37-52页 |
| ·诱导培养基成分的优化 | 第38-43页 |
| ·有机与无机培养基的效果比较 | 第38页 |
| ·诱导阶段甲醇浓度的影响 | 第38-39页 |
| ·油酸对蛋白表达的影响 | 第39-40页 |
| ·(NH_4)_2SO_4 浓度的影响 | 第40-41页 |
| ·氧载体的影响 | 第41-42页 |
| ·表面活性剂的影响 | 第42-43页 |
| ·发酵条件的优化 | 第43-48页 |
| ·BMGY 离心的影响 | 第43-44页 |
| ·甲醇补料间隔时间的影响 | 第44页 |
| ·甲醇诱导时间的影响 | 第44-45页 |
| ·不同pH 对表达外源蛋白的影响 | 第45-46页 |
| ·温度对外源蛋白表达的影响 | 第46-47页 |
| ·混合补料的影响 | 第47-48页 |
| ·正交设计法优化培养基配方试验 | 第48-49页 |
| ·正交试验的验证 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·重组毕赤酵母诱导培养基的选择 | 第49-50页 |
| ·添加剂的影响 | 第50页 |
| ·甲醇浓度稳定性的影响 | 第50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 第四章 P.PASTORIS 发酵罐培养的研究 | 第52-63页 |
| ·发酵罐发酵方法 | 第53页 |
| ·甘油初始浓度的选择 | 第53-54页 |
| ·以甘油为碳源的发酵动力学 | 第54-56页 |
| ·诱导阶段不同补料策略的影响 | 第56-60页 |
| ·流加单碳源甲醇诱导几丁质酶表达 | 第56-57页 |
| ·甲醇-甘油混合流加 | 第57-59页 |
| ·甘油-甲醇交替补料诱导蛋白表达 | 第59-60页 |
| ·不同补料策略对酵母生长的影响 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61页 |
| ·小结 | 第61-63页 |
| 第五章 几丁质酶的基本性质研究 | 第63-72页 |
| ·几丁质酶酶活力测定条件的优化 | 第63-65页 |
| ·反应时间对几丁质酶的影响 | 第63-64页 |
| ·蜗牛酶的影响 | 第64-65页 |
| ·K_2B_4O_7、DMAB 的影响 | 第65页 |
| ·几丁质酶液的初步分离纯化 | 第65-67页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第65-66页 |
| ·透析液Sephadex G-100 凝胶柱层析 | 第66-67页 |
| ·SDS-PAGE 电泳鉴定 | 第67页 |
| ·重组几丁质酶的酶学基本性质 | 第67-69页 |
| ·pH 对酶反应和稳定性的影响 | 第67-68页 |
| ·温度对酶反应和稳定性的影响 | 第68-69页 |
| ·不同金属离子对几丁质酶酶活的影响 | 第69页 |
| ·几丁质酶对真菌生长的抑制作用 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| ·几丁质酶酶活的大小 | 第70页 |
| ·几丁质酶的抑菌活性 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第六章 结论 | 第72-74页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| ·创新点 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 附录1 培养基配方 | 第81-82页 |
| 附录2 主要设备仪器 | 第82-83页 |
| 附录3 试验所需主要药品、试剂 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 作者简介 | 第86页 |
