| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 1 引言 | 第15-30页 |
| ·轮状病毒研究进展 | 第15-22页 |
| ·轮状病毒粒子的形态结构 | 第15-16页 |
| ·轮状病毒的表面抗原与分型 | 第16-17页 |
| ·轮状病毒的基因组结构特征 | 第17页 |
| ·轮状病毒蛋白质及其功能 | 第17-19页 |
| ·轮状病毒vp4 基因研究进展 | 第19-20页 |
| ·轮状病毒疫苗研究进展 | 第20-22页 |
| ·伪狂犬病毒研究进展 | 第22-28页 |
| ·伪狂犬病毒分子生物学特性 | 第23-24页 |
| ·伪狂犬病毒糖蛋白及其功能 | 第24-26页 |
| ·伪狂犬病毒主要毒力基因 | 第26页 |
| ·伪狂犬病毒疫苗研发 | 第26-28页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第28-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-40页 |
| ·毒株、细胞、载体和实验动物 | 第30页 |
| ·酶类、主要生化试剂及抗体 | 第30页 |
| ·引物 | 第30-31页 |
| ·主要实验仪器与设备 | 第31页 |
| ·猪轮状病毒JL94 株的增殖及电镜观察 | 第31页 |
| ·JL94 株病毒的增殖 | 第31页 |
| ·JL94 株病毒的超离纯化与电镜观察 | 第31页 |
| ·vp4 主要抗原位点基因的扩增与序列分析 | 第31-33页 |
| ·JL94 病毒核酸的提取及反转录生成模板cDNA | 第31-32页 |
| ·vp4 主要抗原位点基因的扩增与产物纯化 | 第32页 |
| ·vp4 主要抗原位点基因与pMD18-T 载体的连接与鉴定 | 第32-33页 |
| ·vp4 主要抗原位点基因的序列分析 | 第33页 |
| ·JL94/vp4-MASG 在在昆虫细胞中的表达 | 第33-36页 |
| ·重组质粒vp4-MASG-pMel BacA 的构建 | 第33页 |
| ·转染用重组质粒vp4-MASG-pMel BacA 的提取与纯化 | 第33-34页 |
| ·JL94/vp4-MASG-pMel BacA 与杆状病毒共转染 | 第34页 |
| ·重组杆状病毒的蚀斑筛选 | 第34-35页 |
| ·重组杆状病毒的PCR 鉴定 | 第35页 |
| ·JL94/vp4-MASG 在昆虫细胞中的表达 | 第35页 |
| ·Western Blotting 实验 | 第35页 |
| ·病毒中和实验 | 第35-36页 |
| ·表达PRV/vp4-MASG 的重组伪狂犬病毒构建 | 第36-40页 |
| ·JL94/vp4-MASG-gG 重组转移载体质粒的提取与纯化 | 第36页 |
| ·Bartha-K61 株伪狂犬病毒核酸的提取 | 第36页 |
| ·vp4-MASG-gG 与Bartha-K61 株病毒核酸共转染 | 第36-37页 |
| ·重组病毒vp4-MASG-PrV 的蚀斑筛选和纯化 | 第37页 |
| ·重组病毒vp4-MASG-PrV 的PCR 筛选与鉴定 | 第37页 |
| ·重组病毒生长动力学 | 第37-38页 |
| ·重组病毒表达动力学实验和Western blotting 实验 | 第38页 |
| ·间接免疫荧光实验 | 第38页 |
| ·毒种短期保存期实验 | 第38页 |
| ·间接ELISA 实验 | 第38-40页 |
| 3 实验结果 | 第40-51页 |
| ·猪轮状病毒JL94 株的增殖与电镜观察结果 | 第40-41页 |
| ·JL94 株病毒引起的MA104 细胞病变结果 | 第40页 |
| ·JL94 株病毒的电镜观察结果 | 第40-41页 |
| ·vp4 主要抗原位点基因的PCR 扩增与序列分析结果 | 第41页 |
| ·JL94/vp4-MASG 在在昆虫细胞中的表达结果 | 第41-45页 |
| ·重组质粒vp4-MASG-pMel BacA 的鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·JL94/vp4-MASG-pMel BacA 和杆状病毒共转染结果 | 第42-43页 |
| ·重组病毒的蚀斑筛选结果 | 第43页 |
| ·JL94 株vp4-MASG 在昆虫细胞中表达产物的检测结果 | 第43-44页 |
| ·vp4-MASG 在Sf9 细胞中表达产物的Western Blotting 检测结果 | 第44页 |
| ·病毒中和实验结果 | 第44-45页 |
| ·表达PRV/vp4-MASG 的重组伪狂犬病毒构建结果 | 第45-51页 |
| ·JL94/vp4-MASG-gG 重组转移载体质粒的提取与纯化结果 | 第45-46页 |
| ·重组病毒vp4-MASG-PrV 的蚀斑筛选和纯化结果 | 第46页 |
| ·重组病毒vp4-MASG-PrV 的PCR 筛选与鉴定结果 | 第46页 |
| ·重组病毒生长动力学实验结果 | 第46-47页 |
| ·重组病毒表达动力学结果 | 第47-48页 |
| ·Western blotting 结果 | 第48-49页 |
| ·间接免疫荧光实验结果 | 第49页 |
| ·毒种短期保存期实验结果 | 第49-50页 |
| ·间接ELISA 实验结果 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-61页 |
| ·选择PRV/vp4-MASG 基因用于研发疫苗的立足点 | 第51-52页 |
| ·构建高安全性重组杆状病毒亚单位疫苗株的策略 | 第52-54页 |
| ·重组伪狂犬病毒活载体疫苗的设计 | 第54-61页 |
| ·研发重组活载体疫苗的出发点 | 第54-55页 |
| ·设计重组活载体疫苗的思路 | 第55-57页 |
| ·镜下挑斑技术在筛选重组病毒的中的尝试 | 第57页 |
| ·vp4-MASG 在重组伪狂犬病毒中表达特性的探讨 | 第57-58页 |
| ·重组伪狂犬病毒作为侯选疫苗株的评价 | 第58-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第70-71页 |
| Curriculum Vitae | 第71-73页 |
