| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语(Abbreviation) | 第13-15页 |
| 第一章 泰乐菌素文献综述 | 第15-28页 |
| ·泰乐菌素生物合成 | 第16-23页 |
| ·泰乐内酯(tylactone)的生物合成 | 第17-18页 |
| ·泰乐内酯的后修饰(Post-PKS tailoring) | 第18-20页 |
| ·碳霉氨基糖的生物合成 | 第18-19页 |
| ·红霉糖的生物合成 | 第19页 |
| ·5’-脱氧-D-阿洛糖的生物合成 | 第19-20页 |
| ·甲基转移酶基因tylE和tylF | 第20页 |
| ·泰乐菌素抗性基因tlrA、tlrB、tlrC和tlrD | 第20-21页 |
| ·泰乐菌素生物合成的调控 | 第21-22页 |
| ·tylS和tylU | 第21页 |
| ·tylP和tylQ | 第21-22页 |
| ·tylR | 第22页 |
| ·辅助基因metF和metK | 第22-23页 |
| ·泰乐菌素的遗传改造 | 第23-24页 |
| ·限速酶基因的克隆与表达:tylF基因 | 第23页 |
| ·碳霉氨基糖的改造 | 第23-24页 |
| ·泰乐菌素的生物转化与半化学合成 | 第24-27页 |
| ·AIV | 第25-26页 |
| ·Tilmicosin | 第26-27页 |
| 本课题研究意义 | 第27-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-45页 |
| ·材料 | 第28-35页 |
| ·菌株 | 第28-29页 |
| ·质粒 | 第29-30页 |
| ·PCR引物 | 第30-32页 |
| ·培养基和生化试剂 | 第32-34页 |
| ·仪器设备 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-45页 |
| ·菌种培养及保藏 | 第35页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的小量提取 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及质粒的化学转化 | 第36页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的少量快速提取及检测 | 第36-37页 |
| ·链霉菌总DNA的少量快速提取 | 第37页 |
| ·链霉菌总RNA的快速提取 | 第37-38页 |
| ·PCR | 第38-39页 |
| ·RT-PCR | 第39-40页 |
| ·DNA片段的回收 | 第40页 |
| ·载体的去磷酸化 | 第40-41页 |
| ·DNA连接 | 第41页 |
| ·PCR介导的定向基因置换技术 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌与链霉菌之间的属间接合转移 | 第42-43页 |
| ·发酵培养 | 第43页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第43页 |
| ·泰乐菌素及其衍生物的测定 | 第43-45页 |
| 第三章 泰乐菌素组分的遗传改造 | 第45-70页 |
| ·tylCV基因的中断 | 第45-60页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·基因中断和基因置换的基本原理 | 第45-46页 |
| ·PCR介导的基因中断&基因置换的基本原理 | 第46-49页 |
| ·SOE-PCR构建基因中断&置换载体的原理 | 第49-50页 |
| ·SOE-PCR构建tylCV基因置换载体 | 第50-54页 |
| ·tylCV基因两侧交换臂及acc(3)IV抗性盒PCR扩增 | 第50-51页 |
| ·SOE-PCR构建tylCV基因置换结构 | 第51-53页 |
| ·基因置换载体的构建 | 第53-54页 |
| ·tylCV基因置换载体导入弗氏链霉菌 | 第54-55页 |
| ·筛选双交换菌株 | 第55页 |
| ·tylCV基因置换的PCR验证 | 第55-56页 |
| ·tylCV基因置换菌株发酵产物的HPLC和HPLC-MS分析 | 第56-60页 |
| ·tylCV基因置换菌株的筛选 | 第60页 |
| ·tylCV基因的读码框缺失 | 第60-66页 |
| ·引言 | 第60-61页 |
| ·tylCV读码框缺失基因置换载体的构建 | 第61-64页 |
| ·穿梭载体pBIB1015的构建 | 第61-62页 |
| ·pBIB605导入BT340处理 | 第62-63页 |
| ·tylCV读码框缺失置换载体PBIB1017构建 | 第63-64页 |
| ·tylCV读码框缺失基因置换载体导入BIB715 | 第64页 |
| ·筛选双交换菌株 | 第64页 |
| ·tylCV读码框缺失菌株的PCR验证和RT-PCR验证 | 第64-66页 |
| ·tylCV基因读码框缺失菌株筛选 | 第66页 |
| ·BIB715和BIB1209的发酵罐发酵分析 | 第66-68页 |
| ·替米考星合成的小试 | 第68-70页 |
| ·泰乐菌素B的提取 | 第68页 |
| ·泰乐菌素B合成替米考星 | 第68-70页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第70-73页 |
| ·总结 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| ·未来工作 | 第71-73页 |
| 第五章 耐热链霉菌酰基化酶基因功能研究 | 第73-94页 |
| ·耐热链霉菌接合转移系统的构建 | 第73-77页 |
| ·引言 | 第73页 |
| ·接合转移体系的组成 | 第73-74页 |
| ·大肠杆菌—耐热链霉菌接合转移系统的构建及血红蛋白基因(vhb)表达 | 第74-76页 |
| ·vhb基因表达对耐热链霉菌转化泰乐菌素的影响 | 第76-77页 |
| ·耐热链霉菌acyB1-B2基因中断对其酰基化泰乐菌素的影响 | 第77-81页 |
| ·引言 | 第77页 |
| ·acyB1-B2基因中断载体的构建 | 第77-78页 |
| ·acyB1-B2基因中断交换臂及acc(3)IV抗性盒PCR扩增 | 第77-78页 |
| ·SOE-PCR构建acyB1-B2基因中断载体 | 第78页 |
| ·acyB1-B2基因中断载体导入耐热链霉菌 | 第78页 |
| ·筛选双交换菌株 | 第78-79页 |
| ·acyB1-B2基因中断的PCR验证 | 第79-80页 |
| ·acyB1-B2基因中断对转化泰乐菌素的影响 | 第80-81页 |
| ·耐热链霉菌acyB1基因中断对其酰基化泰乐菌素的影响 | 第81-83页 |
| ·PCR扩增条件 | 第81页 |
| ·抗性标记置换pBIB303上的acyB1片段 | 第81-82页 |
| ·acyB1基因中断载体构建及接合转移 | 第82页 |
| ·筛选双交换菌株 | 第82页 |
| ·acyB1基因中断对转化泰乐菌素的影响 | 第82-83页 |
| ·耐热链霉菌突变株BIB302和BIB303基因互补实验 | 第83-86页 |
| ·互补表达载体的构建 | 第83-84页 |
| ·互补表达载体导入耐热链霉菌突变株 | 第84页 |
| ·基因互补对转化泰乐菌素的影响 | 第84-86页 |
| ·acyB2基因对红霉糖糖基转移酶的正调控作用 | 第86-89页 |
| ·BIB2001转化替米考星和泰乐菌素B | 第86-87页 |
| ·BIB302与BIB305转化替米考星 | 第87-89页 |
| ·红霉素抗性基因ermE在耐热链霉菌中的表达 | 第89-90页 |
| ·红霉素抗性基因ermE表达载体构建 | 第89页 |
| ·ermE表达载体pBIB312接合转移BIB2001 | 第89-90页 |
| ·ermE整合表达对耐热链霉菌的影响 | 第90页 |
| ·nsdA基因中断对耐热链霉菌转化泰乐菌素的影响 | 第90-94页 |
| ·耐热链霉菌中nsdA基因的验证 | 第91页 |
| ·耐热链霉菌中nsdA基因中断载体的构建 | 第91-92页 |
| ·接合转移 | 第92页 |
| ·筛选双交换菌株 | 第92页 |
| ·双交换菌株的PCR验证 | 第92-93页 |
| ·nsdA基因中断对耐热链霉菌转化泰乐菌素的影响 | 第93-94页 |
| 第六章 总结与讨论 | 第94-96页 |
| ·总结 | 第94-95页 |
| ·讨论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
