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水稻白叶枯病隐性抗病基因xa13的分离与鉴定

中文摘要第1-8页
ABSTRACT第8-10页
1 前言第10-31页
   ·水稻白叶枯病的发生和分布第10-11页
   ·水稻白叶枯病的症状第11-12页
   ·水稻白叶枯病病原菌的研究第12-17页
     ·稻白叶枯病病原菌的命名第12页
     ·Xoo的形态学特征和理化性质第12-13页
     ·Xoo致病型的划分第13页
     ·致病性的研究和致病机理的探索第13-17页
       ·白叶枯病菌的侵染和繁殖第13-14页
       ·白叶枯病菌毒性的相关研究第14-15页
       ·白叶枯病菌激发宿主抗性和无毒基因的研究进展第15-17页
   ·水稻抗白叶枯病的研究第17-27页
     ·种质资源的发掘第17页
     ·抗白叶枯病基因的遗传研究第17-20页
     ·抗白叶枯病基因的分离与克隆第20-26页
       ·基因分离克隆的方法第20页
       ·Xa21基因与其基因家族第20-22页
       ·Xa1基因的克隆第22-23页
       ·Xa26基因的克隆和基因家族第23-24页
       ·xa5基因的克隆第24-25页
       ·Xa27基因的克隆第25-26页
     ·水稻抗白叶枯病的分子育种第26-27页
   ·植物抗病基因的研究进展第27-30页
     ·植物抗病基因类型第27-29页
     ·抗病基因的作用机理第29-30页
       ·“基因对基因”假说第29页
       ·防卫假说(guard hypothesis)第29-30页
   ·xa13基因的研究现状第30-31页
   ·研究目的与意义第31页
2 材料和方法第31-40页
   ·水稻材料和接种鉴定第31-32页
     ·水稻品种与来源第31页
     ·群体材料第31页
     ·白叶枯病的接种、病情分析和细菌生长曲线的绘制第31-32页
   ·文库、探针和分子标记第32页
   ·菌株、质粒、载体和感受态细胞第32-33页
   ·DNA的提取和Southern杂交第33页
   ·RNA的操作第33-34页
   ·酶切、亚克隆和测序文库的构建第34页
   ·物理图谱的构建第34页
   ·扣除cDNA文库的构建第34-35页
   ·全生育期均一化cDNA文库的构建第35-37页
     ·独立cDNA文库的构建和质粒的扩增第35页
     ·DNA亲和体系的建立第35-37页
     ·cDNA文库的均一化第37页
   ·DNA测序和分析第37页
   ·农杆菌介导的遗传转化第37-38页
     ·显性基因的转化第38页
     ·RNAi的遗传转化第38页
   ·目标蛋白的亚细胞定位分析第38-39页
     ·通过稳定遗传转化分析目标蛋白的亚细胞定位第38-39页
     ·通过瞬时表达分析目标蛋白的亚细胞定位第39页
   ·组织学分析第39-40页
     ·花药和叶片的切片制作第39页
     ·花药切片的原位杂交第39-40页
3 结果与分析第40-86页
   ·明恢63全生育期均一化cDNA文库的构建第40-45页
     ·独立cDNA文库的构建第40页
     ·均一化文库的质量检测第40-45页
       ·文库容量、插入片段大小第41-42页
       ·克隆子重复概率的检测第42-43页
       ·基因覆盖度和全生育期特性的评估第43-44页
       ·低转录水平基因在均一化文库中存在的调查第44-45页
   ·采用图位克隆法分离xa13基因第45-74页
     ·xa13基因是完全隐性的抗病基因第45页
     ·xa13基因物理图谱的构建第45-47页
     ·DNA测序和基因的精细定位第47-50页
     ·候选基因的预测第50-51页
     ·显性候选基因的遗传转化与功能互补验证第51-60页
       ·转基因载体的构建第51页
       ·IRBB13转基因体系的建立第51-53页
       ·转Xa13候选基因单株的检测第53-55页
       ·转显性基因Xa13候选基因植株中的细菌生长第55-56页
       ·转Xa13候选基因单株的T_1代共分离检测第56-60页
     ·Xa13基因的结构和功能预测第60-61页
     ·xa13基因的分离和等位基因的比较测序第61-64页
     ·采用RNAi技术研究xa13基因的功能第64-68页
     ·Xa13基因的表达受到病原的调控第68-70页
     ·Xa13和xa13基因启动子区的比较测序第70-73页
     ·XA13蛋白亚细胞定位分析第73-74页
   ·xa13基因介导的抗病途径的初探第74-82页
     ·病程相关类基因的表达并非xa13介导的抗病反应所必需的第75-76页
     ·木质素在次生细胞壁中的累积可能不是xa13介导的抗病反应的作用途径第76-77页
     ·xa13基因介导抗病反应中的抗病相关基因表达谱分析第77-82页
       ·cDNA测序和聚类分析第77-78页
       ·EST序列的生物信息学分析第78-79页
       ·部分EST序列的表达分析第79-80页
       ·Xa21类受体激酶同源基因的表达分析和功能预测第80-82页
   ·Xa13基因与花粉的发育第82-86页
4 讨论第86-96页
   ·全生育期均一化cDNA文库在基因研究中的应用与优化第86-87页
     ·均一化cDNA文库的应用和构建原理第86页
     ·基因组饱和杂交法构建均一化文库的技术优化第86-87页
   ·水稻抗病基因克隆方法的新变化和策略第87-88页
   ·显性基因Xa13和隐性基因xa13的可能作用机制第88-92页
     ·隐性基因xa13是新类型的抗病基因介导并介导新的抗病反应途径第88-89页
     ·显性基因Xa13是感病必需的基因第89-91页
     ·显性基因Xa13是花药发育必需的基因第91-92页
     ·Xa13基因为研究植物的抗病和花药发育之间的关系提供了新的起点第92页
   ·如何理解水稻对白叶枯病的抗性模式第92-94页
   ·隐性基因xa13的应用第94-96页
     ·分子标记聚合育种第94-95页
     ·Xa13与育性第95-96页
5 参考文献第96-112页
致谢第112-113页
附录1第113-115页
附录2第115-117页
附录3第117-118页

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