| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略词 | 第8-12页 |
| 一 文献综述 | 第12-25页 |
| 1．1 端粒、端粒酶与肿瘤 | 第12-19页 |
| 1．1．1 端粒和端粒酶的结构与功能 | 第12-15页 |
| 1．1．2 端粒与肝癌的研究 | 第15-16页 |
| 1．1．3 端粒酶活性的检测方法 | 第16-19页 |
| 1．2 siRNA及其在肿瘤研究中的应用 | 第19-24页 |
| 1．2．1 RNAi的发现 | 第19-20页 |
| 1．2．2 siRNAs与RNAi | 第20-21页 |
| 1．2．3 哺乳动物细胞内的RNAi | 第21-22页 |
| 1．2．4 siRNA的制备方法 | 第22-24页 |
| 1．3 本研究的设计思路与具体安排 | 第24-25页 |
| 二、材料和方法 | 第25-39页 |
| 2．1 实验材料 | 第25-28页 |
| 2．1．1 细胞 | 第25页 |
| 2．1．2 菌种 | 第25页 |
| 2．1．3 质粒 | 第25页 |
| 2．1．4 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2．1．5 主要试剂的配制 | 第26-28页 |
| 2．1．6 主要仪器 | 第28页 |
| 2．2 实验方法 | 第28-39页 |
| 2．2．1 细胞培养 | 第29页 |
| 2．2．2 总 RNA提取 | 第29页 |
| 2．2．3 RT-PCR扩增目的片段 | 第29-31页 |
| 2．2．4 Real-time PCR反应体系及条件 | 第31页 |
| 2．2．5 质粒小提方法 | 第31页 |
| 2．2．6 胶回收方法 | 第31页 |
| 2．2．7 Mlu I酶切体系 | 第31-32页 |
| 2．2．8 DNA连接体系 | 第32页 |
| 2．2．9 转化步骤 | 第32页 |
| 2．2．10 去磷酸化反应体系 | 第32页 |
| 2．2．11 siRNA设计、合成、克隆 | 第32-35页 |
| 2．2．12 化学合成的 siRNA转染步骤 | 第35-36页 |
| 2．2．13 载体表达的siRNA转染步骤 | 第36页 |
| 2．2．14 端粒酶活性测定方法 | 第36-37页 |
| 2．2．15 引物的设计与合成 | 第37-39页 |
| 三、结果与分析 | 第39-53页 |
| 3．1 直接合成的siRNA下调端粒酶反转录酶(hTERT)的基因表达 | 第39-41页 |
| 3．1．1 单链siRNA退火成双链的siRNA | 第39页 |
| 3．1．2 直接合成的siRNA能够下调hTERT基因的表达 | 第39-40页 |
| 3．1．3 siRNA下调hTERT基因的表达与siRNA浓度的关系 | 第40-41页 |
| 3．1．4 siRNA1下调hTERT基因的表达与 siRNA的作用时间有关系 | 第41页 |
| 3．2 载体表达的siRNA能下调基因表达、抑制端粒酶活性并促进细胞凋亡 | 第41-49页 |
| 3．2．1 PCR扩增所得siRNA在pEGFP-C1载体中的表达和鉴定 | 第41-42页 |
| 3．2．2 荧光显微镜下观察siRNA的转染效率 | 第42-43页 |
| 3．2．3 pEGFP-hTERT-siRNA对hTERT基因的抑制 | 第43-44页 |
| 3．2．4 hTERT基因的抑制效果与pEGFP-hTERT-siRNA1的浓度相关 | 第44页 |
| 3．2．5 hTERT的抑制效果与siRNA的作用时间相关 | 第44-46页 |
| 3．2．6 针对hTR基因的三种载体表达的siRNA可有效抑制hTR基因的表达 | 第46页 |
| 3．2．7 siRNA转染入Bel-7404细胞后端粒酶活性可被有效抑制 | 第46-47页 |
| 3．2．8 端粒酶活性的降低程度与siRNA的浓度成正比关系 | 第47页 |
| 3．2．9 siRNA可诱导细胞凋亡 | 第47-48页 |
| 3．2．10 pEGFP-hTERT-siRNA稳定转染细胞株的筛选 | 第48-49页 |
| 3．3 PEG-10与端粒酶催化活性亚单位(hTERT)表达之间的关系 | 第49-53页 |
| 3．3．1 hTERT基因的表达随 PEG-10基因的表达下调而下调 | 第49-51页 |
| 3．3．2 PEG10表达载体转染入293T细胞后hTERT基因表达量的变化 | 第51-53页 |
| 四、讨论与结论 | 第53-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 附录 | 第66页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
