| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 前言 | 第14-26页 |
| 1 玉米淀粉分支酶基因SBEⅡb的性质及研究现状 | 第14-15页 |
| 1．1 淀粉生物合成 | 第14页 |
| 1．2 淀粉分支酶(SBEⅡb)的性质及研究现状 | 第14-15页 |
| 2 启动子(promoter)的性质、分类及研究现状 | 第15-24页 |
| 2．1 启动子性质 | 第15页 |
| 2．2 启动子分类及各自的研究进展 | 第15-24页 |
| 2．2．1 组成型启动子 | 第16-18页 |
| 2．2．1．1 CaMV 35S启动子 | 第16页 |
| 2．2．1．2 ACMV启动子 | 第16-17页 |
| 2．2．1．3 Nos和Ocs启动子 | 第17页 |
| 2．2．1．4 Actl启动子 | 第17-18页 |
| 2．2．2 组织特异性启动子 | 第18-20页 |
| 2．2．2．1 根特异启动子 | 第18页 |
| 2．2．2．2 茎特异启动子 | 第18-19页 |
| 2．2．2．3 叶特异启动子 | 第19页 |
| 2．2．2．4 花特异启动子 | 第19页 |
| 2．2．2．5 果实、种子特异性启动子 | 第19-20页 |
| 2．2．3 诱导型启动子 | 第20-23页 |
| 2．2．3．1 天然的诱导型启动子 | 第21-22页 |
| 2．2．3．1．1 光诱导表达启动子 | 第21页 |
| 2．2．3．1．2 热诱导表达启动子 | 第21页 |
| 2．2．3．1．3 创伤诱导表达启动子 | 第21-22页 |
| 2．2．3．1．4 激素诱导表达启动子 | 第22页 |
| 2．2．3．1．5 真菌和共生菌诱导表达启动子 | 第22页 |
| 2．2．3．2 人工构建的诱导型启动子 | 第22-23页 |
| 2．2．3．2．1 阻遏型启动子系统 | 第22-23页 |
| 2．2．3．2．2 激活型启动子系统 | 第23页 |
| 2．2．4 双向启动子、可变启动子和串联启动子 | 第23-24页 |
| 3 玉米淀粉分支酶基因启动子的研究现状 | 第24页 |
| 4 本研究的目的、意义 | 第24-25页 |
| 5 创新点 | 第25-26页 |
| 材料与方法 | 第26-50页 |
| 1材料 | 第26-29页 |
| 1．1 植物材料 | 第26页 |
| 1．2 试剂 | 第26-27页 |
| 1．3 培养基 | 第27-28页 |
| 1．4 菌株和质粒 | 第28页 |
| 1．5 PCR引物 | 第28-29页 |
| 1．6 主要仪器设备 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-50页 |
| 2．1 核酸的提取 | 第29-33页 |
| 2．1．1 玉米叶片基因组总DNA的微量提取(SDS改良法) | 第29-30页 |
| 2．1．2 植物基因组总DNA的大量提取(改良CTAB法) | 第30-31页 |
| 2．1．3 质粒的提取 | 第31-33页 |
| 2．1．3．1 质粒提取的主要试剂 | 第31-32页 |
| 2．1．3．2 质粒DNA的微量提取 | 第32页 |
| 2．1．2．3 质粒DNA的大量提取 | 第32-33页 |
| 2．2 PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2．3 PCR扩增产物电泳和DNA片段回收纯化 | 第34-36页 |
| 2．3．1 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第34-35页 |
| 2．3．2 DNA片段的回收和纯化 | 第35-36页 |
| 2．3．2．1 DNA片段的回收和纯化溶液组成 | 第35页 |
| 2．3．2．2 DNA片段的回收和纯化操作步骤(鼎国A014-1回收试剂盒) | 第35-36页 |
| 2．4 目的片段连入T载体 | 第36页 |
| 2．5 大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第36-37页 |
| 2．5．1 大肠杆菌感受态制备 | 第36-37页 |
| 2．5．2 质粒DNA转化大肠杆菌 | 第37页 |
| 2．6 重组质粒的细菌菌落的鉴定 | 第37-39页 |
| 2．6．1 蓝白斑筛选——α互补现象的检测 | 第37-38页 |
| 2．6．2 质粒酶切鉴定 | 第38页 |
| 2．6．3 重组质粒的PCR检测 | 第38-39页 |
| 2．7 克隆片段的测序分析 | 第39页 |
| 2．8 植物表达载体pSBE-GUS的构建 | 第39-40页 |
| 2．8．1 分别双酶切植物表达载体pBI121和重组克隆 | 第39-40页 |
| 2．8．2 构建植物表达载体及酶切鉴定 | 第40页 |
| 2．8．2．1 表达载体pSBE-GUS的构建 | 第40页 |
| 2．8．2．2 表达载体的转化及质粒提取 | 第40页 |
| 2．8．2．3 酶切鉴定表达载体 | 第40页 |
| 2．9 表达质粒转化农杆菌 | 第40-41页 |
| 2．9．1 农杆菌感受态制备 | 第40-41页 |
| 2．9．2 表达载体pSBE-GUS转化农杆菌 | 第41页 |
| 2．10 农杆菌介导转化烟草 | 第41-42页 |
| 2．10．1 农杆菌工程菌液的制备 | 第41页 |
| 2．10．2 外植体材料的培养和处理 | 第41-42页 |
| 2．10．3 烟草的转化与再生 | 第42页 |
| 2．11 烟草再生苗的抗性和PCR检测 | 第42-43页 |
| 2．12 转基因烟草的Southern杂交检测 | 第43-46页 |
| 2．12．1 溶液的配制 | 第43页 |
| 2．12．2 样品的准备 | 第43页 |
| 2．12．3 探针的制备 | 第43页 |
| 2．12．4 探针的标记 | 第43-44页 |
| 2．12．5 标记探针后的检测 | 第44页 |
| 2．12．6 Southern杂交 | 第44-46页 |
| 2．12．6．1 凝胶电泳 | 第44页 |
| 2．12．6．2 转膜 | 第44-45页 |
| 2．12．6．3 Southern杂交 | 第45-46页 |
| 2．13 GUS活性瞬时表达的检测 | 第46-50页 |
| 2．13．1 基因枪轰击材料的准备 | 第46页 |
| 2．13．2 轰击 | 第46-47页 |
| 2．13．3 基因枪轰击后材料的培养 | 第47页 |
| 2．13．4 GUS活性瞬间表达的检测 | 第47页 |
| 2．13．5 GUS活性的荧光测定 | 第47-50页 |
| 结果 | 第50-60页 |
| 1 玉米淀粉分支酶(SBEⅡb)基因启动子的分离和克隆 | 第50-54页 |
| 1．1 基因组DNA的提取 | 第50页 |
| 1．2 引物设计和PCR扩增 | 第50-51页 |
| 1．3 插入T载体 | 第51页 |
| 1．4 PCR扩增片段的序列分析 | 第51-53页 |
| 1．5 表达载体的构建及鉴定 | 第53-54页 |
| 2 农杆菌介导转化烟草 | 第54-60页 |
| 2．1 烟草的预分化培养 | 第54页 |
| 2．2 浸染烟草及共培养 | 第54页 |
| 2．3 选择培养和生根培养 | 第54-57页 |
| 2．4 再生植株的鉴定 | 第57-60页 |
| 2．4．1 PCR检测 | 第57-58页 |
| 2．4．2 转基因烟草的Southern杂交检测 | 第58页 |
| 2．4．3 GUS瞬时表达的检测 | 第58-59页 |
| 2．4．4 烟草中GUS蛋白表达的荧光检测 | 第59-60页 |
| 讨论 | 第60-63页 |
| 1．SBEⅡb基因启动子的克隆 | 第60页 |
| 2．SBEⅡb启动子的测序分析 | 第60-61页 |
| 3．表达载体的构建和转化 | 第61-62页 |
| 4．转基因烟草各部位组织的GUS活性分析 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 1 克隆了玉米SBEⅡb基因上游启动子片段 | 第63页 |
| 2 构建了植物表达载体pSBE-GUS | 第63页 |
| 3 获得了转基因烟草 | 第63页 |
| 4 启动子性质及活性的鉴定 | 第63-64页 |
| 参考文献(References) | 第64-74页 |
| 附录 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
