| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 符号及缩略语等的说明 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-46页 |
| 1．棉铃虫对拟除虫菊酯抗性概况 | 第14-17页 |
| 1．1 中国 | 第14-15页 |
| 1．2 印度 | 第15-16页 |
| 1．3 巴基斯坦 | 第16页 |
| 1．4 澳大利亚 | 第16-17页 |
| 1．5 西非 | 第17页 |
| 2．棉铃虫对拟除虫菊酯的抗性机理 | 第17-23页 |
| 2．1 表皮穿透下降 | 第18-19页 |
| 2．2 神经不敏感性 | 第19-22页 |
| 2．3 解毒代谢增强 | 第22-23页 |
| 3．细胞色素P450的结构与功能 | 第23-32页 |
| 3．1 细胞色素P450特征及催化机理 | 第23-25页 |
| 3．2 细胞色素P450氧化酶晶体结构 | 第25-29页 |
| 3．3 昆虫细胞色素P450基因的转录调控机制 | 第29-32页 |
| 4．昆虫细胞色素P450基因的过量表达与抗药性 | 第32-36页 |
| 4．1 CYP6D1 | 第32-34页 |
| 4．2 CYP6A1 | 第34-35页 |
| 4．3 CYP6G1 | 第35-36页 |
| 5．昆虫细胞色素P450的异源功能表达 | 第36-46页 |
| 5．1 大肠杆菌表达系统 | 第37-41页 |
| 5．2 酵母表达系统 | 第41-43页 |
| 5．3 杆状病毒介导的昆虫细胞表达系统 | 第43-46页 |
| 第二章 氧化代谢增强在棉铃虫对氰戊菊酯抗性中的作用 | 第46-62页 |
| 1．材料与方法 | 第47-50页 |
| 1．1 供试昆虫 | 第47-48页 |
| 1．2 供试药剂 | 第48页 |
| 1．3 生物测定方法 | 第48页 |
| 1．4 细胞色素P450氧化酶活性测定 | 第48-49页 |
| 1．5 酯酶活性测定 | 第49页 |
| 1．6 谷胱甘肽转移酶活性测定 | 第49页 |
| 1．7 蛋白质含量测定 | 第49-50页 |
| 1．8 数据统计分析 | 第50页 |
| 2．结果与分析 | 第50-58页 |
| 2．1 八种常用杀虫剂对棉铃虫敏感品系(SCD)的毒力测定 | 第50-51页 |
| 2．2 YGF和YGFP品系对拟除虫菊酯的交互抗性 | 第51页 |
| 2．3 增效剂增效作用测定 | 第51-56页 |
| 2．4 细胞色素P450氧化酶、酯酶及谷胱甘肽转移酶活性测定 | 第56-58页 |
| 3．讨论 | 第58-62页 |
| 3．1 YGF和YGFP品系抗性机理 | 第58-60页 |
| 3．2 增效剂PBO应用于田间防治害虫 | 第60-62页 |
| 第三章 棉铃虫细胞色素P450O-脱甲基活性与对氰戊菊酯抗性的关系 | 第62-74页 |
| 1．材料与方法 | 第63-65页 |
| 1．1 供试昆虫 | 第63页 |
| 1．2 供试药剂 | 第63-64页 |
| 1．3 生物测定方法 | 第64页 |
| 1．4 不同增溶剂存在条件下细胞色素P450氧化酶PNOD活性测定 | 第64页 |
| 1．5 细胞色素P450氧化酶PNOD活性测定 | 第64页 |
| 1．6 数据统计分析 | 第64-65页 |
| 2．结果与分析 | 第65-71页 |
| 2．1 六种增溶剂的增溶效果比较 | 第65-68页 |
| 2．2 不同棉铃虫品系对氰戊菊酯抗性水平与细胞色素P450氧化酶PNOD活性相关性分析 | 第68-71页 |
| 3．讨论 | 第71-74页 |
| 3．1 增溶剂在细胞色素P450氧化酶PNOD活性测定中的作用 | 第71-72页 |
| 3．2 棉铃虫细胞色素P450氧化酶PNOD活性与棉铃虫生化检测 | 第72-74页 |
| 第四章 棉铃虫细胞色素P450基因克隆及mRNA差异表达 | 第74-101页 |
| 1．材料与方法 | 第75-84页 |
| 1．1 供试昆虫 | 第75页 |
| 1．2 总RNA提取及cDNA第一链合成 | 第75-77页 |
| 1．2．1 棉铃虫脂肪体总RNA提取 | 第76页 |
| 1．2．2 琼脂糖凝胶检测总RNA | 第76页 |
| 1．2．3 cDNA第一链合成 | 第76-77页 |
| 1．3 引物设计及PCR扩增细胞色素P450 cDNA片段、克隆、测序 | 第77-79页 |
| 1．4 采用RACE策略克隆细胞色素P450基因全长 | 第79-82页 |
| 1．5 半定量PCR检测细胞色素P450基冈mRNA在脂肪体的表达量 | 第82-84页 |
| 1．5．1 cDNA第一链合成 | 第82-83页 |
| 1．5．2 半定量PCR | 第83页 |
| 1．5．3 细胞色素P450基因mRNA表达量定量分析 | 第83-84页 |
| 1．6 引物设计及序列分析软件 | 第84页 |
| 1．7 棉铃虫细胞色素P450新基因注册 | 第84页 |
| 2．结果与分析 | 第84-96页 |
| 2．1 三个新细胞色素P450基因序列分析 | 第84-85页 |
| 2．2 翻译的氨基酸序列分析 | 第85-95页 |
| 2．3 半定量PCR分析 | 第95-96页 |
| 3．讨论 | 第96-101页 |
| 第五章 棉铃虫细胞色素P450基因异源表达 | 第101-117页 |
| 1．材料与方法 | 第102-111页 |
| 1．1 供试昆虫 | 第102页 |
| 1．2 化学试剂 | 第102页 |
| 1．3 棉铃虫、酵母总RNA提取及cDNA第一链合成 | 第102-104页 |
| 1．3．1 PCR扩增CYP9A12和CYP9A14全长基因 | 第103页 |
| 1．3．2 CYP9A12、CYP9A14mRNA在酵母诱导培养中的表达 | 第103-104页 |
| 1．4 PCR产物纯化 | 第104页 |
| 1．5 双酶切酵母表达质粒、CYP9A12和CYP9A14 | 第104-105页 |
| 1．6 连接反应 | 第105页 |
| 1．7 转化大肠杆菌、扩大培养 | 第105页 |
| 1．8 质粒提取及BamHⅠ、EcoRⅠ酶切检测 | 第105-106页 |
| 1．9 质粒DNA双向测序验证 | 第106页 |
| 1．10 酵母菌株及培养 | 第106-107页 |
| 1．11 转化酵母细胞 | 第107-108页 |
| 1．12 诱导外源基因表达 | 第108页 |
| 1．13 酵母微粒体提取 | 第108-109页 |
| 1．14 不同诱导时段外源基因表达的检测 | 第109-110页 |
| 1．14．1 酵母培养 | 第109页 |
| 1．14．2 SDS-PAGE电泳检测表达的蛋白 | 第109-110页 |
| 1．15 酵母微粒体PNOD、ECOD及MROD活性测定 | 第110-111页 |
| 1．16 溴氰菊酯的离体代谢 | 第111页 |
| 1．17 数据统计分析 | 第111页 |
| 2．结果与分析 | 第111-114页 |
| 2．1 PCR检测外源细胞色素P450基因mRNA表达 | 第111页 |
| 2．2 SDS-PAGE检测表达的蛋白 | 第111-114页 |
| 2．2．1 CYP9A14在半乳糖不同时段诱导表达 | 第111-113页 |
| 2．2．2 半乳糖诱导16小时外源基因在酵母中的表达 | 第113-114页 |
| 2．3 重组酵母微粒体细胞色素P450氧化酶活性测定 | 第114页 |
| 2．4 溴氰菊酯的离体代谢作用 | 第114页 |
| 3．讨论 | 第114-117页 |
| 全文总结 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-134页 |
| 附录：攻读学位期间发表的学术论文 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
