| 缩略词 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| 英文摘要 | 第12-16页 |
| 前言 | 第16-20页 |
| 第一部分 质粒pT7HCV和pVHCV的构建 | 第20-38页 |
| 材料和方法 | 第20-27页 |
| 一、 材料 | 第20-21页 |
| 二、 试验方法 | 第21-27页 |
| (一) 质粒pT7HCV的设计和构建 | 第21-24页 |
| (二) 质粒pVHCV的设计和构建 | 第24-27页 |
| 结果 | 第27-35页 |
| 一、 质粒pT7HCV的构建 | 第27页 |
| 二、 质粒pVHCV的构建 | 第27-35页 |
| 讨论 | 第35-37页 |
| 小结 | 第37-38页 |
| 第二部分 重组丙型肝炎病毒的生产和鉴定 | 第38-58页 |
| 材料和方法 | 第38-47页 |
| 一、 材料 | 第38-40页 |
| 二、 试验方法 | 第40-47页 |
| (一) 重组HCV的培养 | 第40-42页 |
| (二) 重组HCV的检测 | 第42-47页 |
| 结果 | 第47-55页 |
| 一、 重组HCV基因组RNA的RT-PCR检测 | 第47-48页 |
| 二、 重组HCV基因组RNA的荧光定量PCR检测 | 第48页 |
| 三、 重组HCV蛋白在细胞中表达的间接免疫荧光检测 | 第48-51页 |
| 四、 重组HCV蛋白在细胞中表达的SDS-PAGE和Western blotting检测 | 第51-53页 |
| 五、 免疫电镜观察重组HCV蛋白细胞中的定位 | 第53-55页 |
| 讨论 | 第55-57页 |
| 小结 | 第57-58页 |
| 第三部分 重组丙型肝炎病毒大规模培养工艺的优化 | 第58-71页 |
| 材料和方法 | 第58-62页 |
| 一、 材料 | 第58页 |
| 二、 实验方法 | 第58-62页 |
| (一) 宿主细胞的选择 | 第58-59页 |
| (二) 不同的质粒转染量对重组HCV生产的影响 | 第59-60页 |
| (三) 感染痘苗病毒的浓度对重组HCV生产的影响 | 第60页 |
| (四) 培养时间对重组HCV生产的影响 | 第60-62页 |
| 结果 | 第62-68页 |
| 一、 不同的细胞系对重组HCV培养的影响 | 第62-63页 |
| 二、 不同的质粒转染浓度对重组HCV生产的影响 | 第63-64页 |
| 三、 不同的重组痘苗病毒感染比例对重组HCV生产的影响 | 第64-66页 |
| 四、 不同的培养时间对重组HCV生产的影响 | 第66-68页 |
| 讨论 | 第68-70页 |
| 小结 | 第70-71页 |
| 第四部分 重组丙型肝炎病毒的分离纯化 | 第71-83页 |
| 材料和方法 | 第71-75页 |
| 一、 材料 | 第71-72页 |
| 二、 实验方法 | 第72-75页 |
| (一) 重组HCV的培养 | 第72页 |
| (二) 重组HCV的纯化 | 第72-73页 |
| (三) 纯化后病毒的检测 | 第73-75页 |
| 结果 | 第75-80页 |
| 一、 HCV在蔗糖密度梯度中的浮力密度 | 第75-76页 |
| 二、 纯化过程中HCV基因组RNA的拷贝数变化情况 | 第76页 |
| 三、 纯化病毒抗原涂片的免疫荧光检测结果 | 第76页 |
| 四、 纯化病毒的RT-PCR检测结果 | 第76-78页 |
| 五、 纯化病毒的SDS-PAGE和Western blotting检测 | 第78页 |
| 六、 纯化病毒的电子显微镜观察结果 | 第78-80页 |
| 讨论 | 第80-82页 |
| 小结 | 第82-83页 |
| 第五部分 应用本系统初步研究药物对丙型肝炎病毒体外复制的影响 | 第83-94页 |
| 材料和方法 | 第83-85页 |
| 一、 材料 | 第83页 |
| 二、 实验方法 | 第83-85页 |
| (一) HCV的体外培养 | 第83页 |
| (二) 药物对HCV复制的影响研究 | 第83-85页 |
| 结果 | 第85-90页 |
| 一、 重组干扰素α-1b(rIFNα-1b)对HCV体外复制的影响 | 第85-86页 |
| 二、 病毒唑(RBV)对HCV体外复制的影响 | 第86-90页 |
| 讨论 | 第90-93页 |
| 小结 | 第93-94页 |
| 总结 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 综述 丙型肝炎病毒体外培养研究进展 | 第104-116页 |
| 附录 博士期间论文发表情况 | 第116-119页 |
