| 目录 | 第1-6页 |
| 缩略语表 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-40页 |
| ·植物抗干旱机制 | 第12-13页 |
| ·植物抗干旱和耐盐碱基因工程策略 | 第13-24页 |
| ·渗透调节 | 第13-19页 |
| ·脯氨酸积累与P5CS、P5C基因 | 第14-16页 |
| ·甜菜碱合成与BADH、CMO基因 | 第16页 |
| ·甘露醇、山梨醇合成与mtlD、gutD基因 | 第16-17页 |
| ·海藻糖积累与TPS基因 | 第17-19页 |
| ·果聚糖积累改善了转基因烟草的抗旱性 | 第19页 |
| ·多胺类化合物的超量表达 | 第19页 |
| ·抗氧化防御系统 | 第19-20页 |
| ·通道蛋白 | 第20-22页 |
| ·盐的区隔化 | 第20-21页 |
| ·调控钾离子运输系统 | 第21页 |
| ·调控水通道蛋白 | 第21-22页 |
| ·干旱保护蛋白 | 第22页 |
| ·胁迫引起的基因应答及脱落酸的作用 | 第22-24页 |
| ·ABA依赖型基因 | 第23页 |
| ·ABA非依赖型基因 | 第23-24页 |
| ·不能被ABA诱导的基因 | 第24页 |
| ·甜菜碱及其相关合成酶基因 | 第24-38页 |
| ·甜菜碱的结构和生物合成 | 第25-26页 |
| ·甜菜碱的含量及其诱导表达 | 第26-27页 |
| ·甜菜碱的含量 | 第26页 |
| ·甜菜碱的诱导表达 | 第26-27页 |
| ·甜菜碱的生理功能 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌的Bet操纵元 | 第28-30页 |
| ·大肠杆菌的Bet操纵元结构 | 第28-29页 |
| ·BetB序列的比较 | 第29页 |
| ·甜菜碱前体的运送机制 | 第29-30页 |
| ·细菌Bet操纵元在植物中表达的可能性 | 第30页 |
| ·胆碱单加氧酶(CMO)研究进展 | 第30-32页 |
| ·胆碱单加氧酶的分子生物学研究 | 第30-32页 |
| ·胆碱单加氧酶的作用机理 | 第32页 |
| ·胆碱单加氧酶的基因工程 | 第32页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶(BADH)研究进展 | 第32-37页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶的生物化学研究 | 第32-33页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶在细胞中的定位 | 第33页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶基因克隆及其序列比较 | 第33-34页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶基因的表达 | 第34-36页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶基因工程 | 第36-37页 |
| ·展望 | 第37-38页 |
| ·本研究的内容及目的意义 | 第38-40页 |
| 第二章 菠菜甜菜碱醛脱氢酶基因的分离及其诱导表达 | 第40-50页 |
| ·前言 | 第40页 |
| ·材料与方法 | 第40-43页 |
| ·植物材料及处理 | 第40页 |
| ·酶和试剂 | 第40页 |
| ·BADH基因cDNA的克隆 | 第40-42页 |
| ·逆转录合成cDNA第一链 | 第40-41页 |
| ·PCR扩增 | 第41页 |
| ·扩增产物加尾及连接 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第42页 |
| ·转化子蓝白斑筛选 | 第42页 |
| ·重组转化子鉴定 | 第42页 |
| ·序列分析及同源性比较 | 第42页 |
| ·Northern杂交 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-48页 |
| ·菠菜叶片BADH基因的分离 | 第43-44页 |
| ·PyrobestTM DNA聚合酶特异性扩增BADH基因 | 第43页 |
| ·DNA聚合酶的选择 | 第43-44页 |
| ·BADH克隆到pUCm-T载体的重组子酶切鉴定 | 第44页 |
| ·BADH基因序列测定及同源性分析 | 第44-47页 |
| ·BADH基因序列 | 第44-46页 |
| ·几个物种BADH基因cDNA序列同源性比较 | 第46-47页 |
| ·菠菜BADH基因诱导表达分析 | 第47-48页 |
| ·菠菜BADH基因盐胁迫诱导表达 | 第47页 |
| ·菠菜BADH基因干旱胁迫诱导表达 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 拟南芥rd29A启动子的克隆及其在转基因马铃薯中的功能分析 | 第50-61页 |
| ·前言 | 第50页 |
| ·材料与方法 | 第50-54页 |
| ·酶和试剂 | 第50页 |
| ·菌株和载体 | 第50-51页 |
| ·拟南芥DNA提取及PCR扩增 | 第51页 |
| ·表达载体构建及重组子鉴定 | 第51页 |
| ·马铃薯的遗传转化 | 第51-52页 |
| ·转基因马铃薯植株PCR检测 | 第52页 |
| ·GUS基因表达的Northern杂交分析 | 第52页 |
| ·GUS活性的组织染色 | 第52-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-59页 |
| ·rd29A启动子5′-端序列的扩增与克隆 | 第54-55页 |
| ·PCR扩增片段的序列分析 | 第55-56页 |
| ·rd29A启动子驱动GUS基因的植物表达载体pBIrd构建 | 第56页 |
| ·表达载体导入农杆菌PCR检测结果 | 第56-57页 |
| ·转基因马铃薯植株的获得及Kan抗性培养基上的生根筛选 | 第57页 |
| ·转基因马铃薯PCR检测 | 第57-58页 |
| ·不同诱导条件下GUS基因表达的Northern杂交分析 | 第58页 |
| ·不同诱导条件下GUS活性的组织染色分析 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 BADH基因植物表达载体的构建 | 第61-73页 |
| ·前言 | 第61页 |
| ·材料和方法 | 第61-68页 |
| ·菌种和载体 | 第61页 |
| ·酶和试剂 | 第61页 |
| ·质粒DNA制备 | 第61-62页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第62页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备及冻融法转化 | 第62-63页 |
| ·中间载体pSKtB的构建 | 第63-64页 |
| ·CaMV35S启动子驱动的BADH基因表达载体构建 | 第64页 |
| ·rd29A启动子驱动的BADH基因表达载体构建 | 第64-68页 |
| ·结果与分析 | 第68-71页 |
| ·中间载体pSKtB的构建 | 第68页 |
| ·CaMV 35S启动子驱动的BADH基因表达载体pBIBB的构建 | 第68-69页 |
| ·表达载体pBIBB酶切鉴定 | 第69页 |
| ·质粒pBIBB导入农杆菌PCR扩增鉴定 | 第69-70页 |
| ·rd29A启动子驱动的BADH基因表达载体pBIrB构建 | 第70页 |
| ·表达载体pBIrB酶切鉴定 | 第70-71页 |
| ·质粒pBIrB导入农杆菌PCR扩增鉴定 | 第71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 第五章 BADH基因在烟草中的表达 | 第73-82页 |
| ·前言 | 第73-74页 |
| ·材料和方法 | 第74-76页 |
| ·植物材料与繁殖 | 第74页 |
| ·菌株和质粒 | 第74页 |
| ·酶和试剂 | 第74页 |
| ·烟草遗传转化和植株再生 | 第74页 |
| ·转基因烟草检菌测验 | 第74-75页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第75页 |
| ·转基因烟草Southern杂交检测 | 第75页 |
| ·转基因烟草Northern杂交检测 | 第75页 |
| ·转基因烟草甜菜碱醛脱氢酶活性分析 | 第75-76页 |
| ·转基因烟草抗旱、耐盐性分析 | 第76页 |
| ·结果与分析 | 第76-80页 |
| ·转基因烟草植株再生 | 第76-77页 |
| ·转基因烟草在Kan培养基上生根 | 第77页 |
| ·转基因植株PCR鉴定 | 第77页 |
| ·转基因烟草Southern杂交鉴定 | 第77-78页 |
| ·转基因烟草Northern杂交鉴定 | 第78-79页 |
| ·转基因烟草BADH酶活性分析 | 第79页 |
| ·转基因烟草抗旱性、耐盐性观察与分析 | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80-82页 |
| 第六章 组成型和逆境诱导型启动子驱动的BADH基因转化马铃薯的研究 | 第82-92页 |
| ·前言 | 第82页 |
| ·材料与方法 | 第82-85页 |
| ·植物材料与繁殖 | 第82-83页 |
| ·菌株和质粒 | 第83页 |
| ·酶和试剂 | 第83页 |
| ·马铃薯遗传转化和植株再生 | 第83页 |
| ·转基因马铃薯检菌测验 | 第83-84页 |
| ·转基因马铃薯PCR检测 | 第84页 |
| ·转基因马铃薯Southern杂交检测 | 第84页 |
| ·不同启动子驱动的BADH基因表达差异分析 | 第84页 |
| ·转基因马铃薯甜菜碱醛脱氢酶活性分析 | 第84页 |
| ·转基因马铃薯植株抗旱耐盐性生理指标测定 | 第84-85页 |
| ·转基因马铃薯抗旱耐盐性性状观察 | 第85页 |
| ·结果与分析 | 第85-90页 |
| ·转基因马铃薯植株再生 | 第85页 |
| ·转基因马铃薯在Kan筛选培养基上生根 | 第85-86页 |
| ·转基因植株PCR鉴定 | 第86页 |
| ·转基因马铃薯Southern杂交鉴定 | 第86-87页 |
| ·组成型启动子和逆境诱导型启动子驱动的BADH基因表达分析 | 第87-88页 |
| ·转基因马铃薯BADH酶活性分析 | 第88-89页 |
| ·转基因马铃薯抗旱耐盐性生理指标分析 | 第89页 |
| ·转基因马铃薯抗旱性耐盐性性状观察 | 第89-90页 |
| ·讨论 | 第90-92页 |
| 第七章 讨论 | 第92-98页 |
| ·干旱和盐碱逆境与马铃薯生产 | 第92页 |
| ·基因工程与马铃薯抗旱耐盐碱育种 | 第92-94页 |
| ·BADH基因的克隆及其功能鉴定 | 第94-95页 |
| ·逆境诱导启动子rd29A的分离及利用 | 第95页 |
| ·转BADH基因马铃薯的获得及抗逆性分析 | 第95-96页 |
| ·甜菜碱基因工程的局限性及展望 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-114页 |
| 附录Ι BADH基因在GENBANK登记信息 | 第114-116页 |
| 附录Ⅱ 博士在读期间发表论文 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
