| 摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-16页 |
| ·诱导型启动子 | 第12-14页 |
| ·化学物质诱导启动子 | 第12-13页 |
| ·水杨酸诱导启动子 | 第13-14页 |
| ·组织特异性启动子 | 第14-15页 |
| ·维管组织特异表达启动子 | 第14-15页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-30页 |
| ·实验材料 | 第16页 |
| ·烟草 | 第16页 |
| ·菌株及质粒 | 第16页 |
| ·酶及生化试剂 | 第16页 |
| ·PCR引物 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-30页 |
| ·质粒载体提取及酶切鉴定 | 第16-18页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第16-17页 |
| ·碱法大量提取质粒DNA | 第17-18页 |
| ·质粒载体酶切鉴定 | 第18页 |
| ·山葡萄ClassⅢ几丁质酶基因VCH3启动子的片段缺失、表达载体的构建 | 第18-19页 |
| ·VCH3启动子的片段缺失 | 第18-19页 |
| ·VCH3启动子各缺失片段::GUS融合基因表达载体的构建 | 第19页 |
| ·点突变山葡萄ClassⅢ几丁质酶基因VCH3启动子水杨酸顺式作用元件 | 第19-24页 |
| ·-293bp处SA顺式作用元件点突变 | 第19-23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第23页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第23-24页 |
| ·-1187bp处SA顺式作用元件点突变及突变后VCH3启动子的片段缺失 | 第24页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第24-26页 |
| ·突变后VCH3启动子各缺失片段补平/酶切 | 第24-25页 |
| ·PBI121质粒载体酶切/补平／酶切 | 第25页 |
| ·目的片断与载体的连接 | 第25-26页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备与冻融法转化 | 第26页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第26页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第26-27页 |
| ·转基因烟草水杨酸(SA)处理 | 第27页 |
| ·GUS活性测定及组织化学分析 | 第27-30页 |
| ·GUS活性的荧光测定 | 第27-28页 |
| ·GUS活性的组织化学分析 | 第28-30页 |
| 3 实验结果 | 第30-45页 |
| ·山葡萄ClassⅢ几丁质酶基因VCH3启动子序列特征 | 第30-31页 |
| ·VCH3启动子缺失片段的产生、表达载体的构建及烟草转化 | 第31-38页 |
| ·突变前VCH3启动子缺失片段的产生、表达载体的构建 | 第31-34页 |
| ·突变后VCH3启动子缺失片段的产生、表达载体的构建 | 第34-38页 |
| ·VCH3启动子-292bp处水杨酸顺式作用元件点突变 | 第34-35页 |
| ·VCH3启动子-1187bp处水杨酸顺式作用元件点突变 | 第35页 |
| ·表达载体的构建 | 第35-38页 |
| ·部分转基因烟草的PCR检测 | 第38-41页 |
| ·转基因烟草水杨酸(SA)处理后各缺失启动子片段驱动GUS酶活性的表达分析 | 第41-42页 |
| ·转基因烟草水杨酸处理后缺失启动子片段驱动GUS酶活性的组织化学分析 | 第42-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| ·山葡萄ClassⅢ几丁质酶基因VCH3启动子的序列特征分析 | 第45页 |
| ·山葡萄ClassⅢ几丁质酶基因VCH3启动子受SA诱导表达的活性分析 | 第45-46页 |
| ·山葡萄ClassⅢ几丁质酶基因VCH3启动子受SA诱导表达的组织特异性分析 | 第46页 |
| ·诱导型启动子在转基因植物中实现外源基因可控表达及提高表达效率的作用 | 第46-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 6 参考文献 | 第49-53页 |
| 7 附录 | 第53-57页 |
| 8 致谢 | 第57页 |
