| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| ·大黄鱼的概况 | 第11-14页 |
| ·外部形态特征 | 第12-13页 |
| ·自然栖息环境 | 第13页 |
| ·摄食类型和食物组成 | 第13页 |
| ·养殖环境 | 第13-14页 |
| ·胰岛素样生长因子研究进展 | 第14-19页 |
| ·胰岛素样生长因子（IGFs）及其系统介绍 | 第14页 |
| ·IGF-Ⅰ的结构 | 第14-15页 |
| ·胰岛素样生长因子-Ⅰ的受体 | 第15页 |
| ·胰岛素样生长因子-Ⅰ的结合蛋白 | 第15-16页 |
| ·胰岛素样生长因子-Ⅰ的生理功能 | 第16-17页 |
| ·胰岛素样生长因子-Ⅰ表达的调节 | 第17-18页 |
| ·鱼类胰岛素样因子-Ⅰ的研究现状 | 第18-19页 |
| 第二章 绪论 | 第19-21页 |
| ·研究的目的及意义 | 第19页 |
| ·研究范围与内容 | 第19-21页 |
| ·研究内容 | 第19-20页 |
| ·主要研究方法与路线 | 第20-21页 |
| 第三章 大黄鱼胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)的克隆与序列分析 | 第21-30页 |
| ·实验动物、载体和菌种 | 第21页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| ·载体与菌株 | 第21页 |
| ·主要试剂及配制方法 | 第21-22页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第21页 |
| ·主要溶液及缓冲液 | 第21-22页 |
| ·主要仪器与设备 | 第22页 |
| ·PCR 引物设计 | 第22页 |
| ·大黄鱼肝胰脏总 RNA 的提取及质量检测 | 第22-23页 |
| ·大黄鱼肝胰脏总 RNA 提取 | 第22-23页 |
| ·RNA 的检测 | 第23页 |
| ·大黄鱼 IGF-ⅠcDNA 全长的获得 | 第23-30页 |
| ·反转录合成 cDNA 第一链 | 第23-24页 |
| ·大黄鱼 IGF-ⅠcDNA 中间片段扩增 | 第24页 |
| ·RACE 原理和程序 | 第24-28页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态的制备 | 第28页 |
| ·目的片段与 T 载体的连接 | 第28页 |
| ·质粒 DNA 转化大肠杆菌 | 第28-29页 |
| ·蓝白斑菌落筛选重组质粒 | 第29页 |
| ·PCR 扩增鉴定含重组质粒的菌液 | 第29页 |
| ·测序与分析 | 第29-30页 |
| 第四章 大黄鱼 IGF-Ⅰ的原核表达 | 第30-37页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·载体和菌株 | 第30页 |
| ·主要试剂及药品 | 第30页 |
| ·主要溶液 | 第30-31页 |
| ·质粒的提取 | 第31-32页 |
| ·表达载体构建 | 第32-37页 |
| ·插入片段的制备 | 第32-33页 |
| ·构建 pMDT/ IGF-Ⅰ重组质粒 | 第33页 |
| ·重组质粒 pMDT/ IGF-Ⅰ的提取及鉴定 | 第33-34页 |
| ·双酶切并回收重组质粒与载体 pET28a | 第34页 |
| ·连接产物的转化及鉴定 | 第34页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第35页 |
| ·SDSPAGE 分析产物 | 第35-37页 |
| 第五章 结果与分析 | 第37-45页 |
| ·大黄鱼肝脏总 RNA 的提取 | 第37页 |
| ·大黄鱼肝胰脏总 cDNA 的扩增 | 第37页 |
| ·大黄鱼胰岛素样生长因子I(IGF-Ⅰ)的克隆 | 第37-43页 |
| ·大黄鱼 IGF-ⅠcDNA 中间片段的扩增 | 第37-38页 |
| ·大黄鱼 IGF-Ⅰ3'和 5'片段的获得 | 第38-39页 |
| ·大黄鱼 IGF-Ⅰ基因的全长 cDNA 序列 | 第39-40页 |
| ·大黄鱼 IGF-Ⅰ蛋白的多肽序列分析 | 第40-43页 |
| ·大黄鱼 IGF-Ⅰ的原核表达及其产物纯化 | 第43-45页 |
| ·质粒的提取 | 第43页 |
| ·原核表达及产物纯化 | 第43-45页 |
| 第六章 讨论 | 第45-49页 |
| ·大黄鱼肝胰脏总 RNA 的提取 | 第45页 |
| ·PCR 扩增引物的设计 | 第45-46页 |
| ·RACE 的优点和局限性 | 第46页 |
| ·PCR 反应条件的优化 | 第46-47页 |
| ·大黄鱼 IGF-Ⅰ蛋白的同源性分析 | 第47页 |
| ·大黄鱼 IGF-Ⅰ在大肠杆菌中的表达 | 第47-49页 |
| ·鱼类 IGF-Ⅰ的原核表达及其载体的选择 | 第47-48页 |
| ·包涵体的提取与纯化 | 第48-49页 |
| 第七章 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 附录一 | 第56-57页 |
| 附录二 | 第57页 |