| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-17页 |
| ·青霉素G酰化酶的基因结构及表达调控 | 第7-8页 |
| ·青霉素G酰化酶的结构 | 第8-13页 |
| ·一级结构及序列比较 | 第8-9页 |
| ·活性位点及其底物专一性位点 | 第9-10页 |
| ·高级结构 | 第10-13页 |
| ·青霉素G酰化酶的催化机制 | 第13-14页 |
| ·水解催化机制 | 第13页 |
| ·对映体选择性的底物要求 | 第13-14页 |
| ·青霉素G酰化酶的应用 | 第14-15页 |
| ·(?)内酰胺类合成方面的应用 | 第14页 |
| ·水解反应 | 第14页 |
| ·合成反应 | 第14页 |
| ·在对映体合成上的应用 | 第14-15页 |
| ·其它应用 | 第15页 |
| ·在大肠杆菌中表达青霉素G酰化酶的瓶颈 | 第15页 |
| ·提高青霉素G酰化酶表达量的方法 | 第15-17页 |
| 第二章 改善蛋白合成流以提高粪产碱杆菌青霉素G酰化酶在大肠杆菌中的表达及酶的分离纯化 | 第17-33页 |
| ·前言 | 第17-18页 |
| ·粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的特点 | 第17-18页 |
| ·粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的研究状况 | 第18页 |
| ·材料和方法 | 第18-22页 |
| ·材料 | 第18-20页 |
| ·菌种和质粒 | 第18-19页 |
| ·酶和试剂 | 第19页 |
| ·培养基及溶液 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-22页 |
| ·常规分子生物学操作 | 第20页 |
| ·PCR扩增 | 第20页 |
| ·青霉素酰化酶在大肠杆菌中的表达 | 第20-21页 |
| ·完整细胞酰化酶活力的测定 | 第21页 |
| ·NIPAB试纸的制备 | 第21页 |
| ·重组质粒的稳定性 | 第21页 |
| ·粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的分离纯化 | 第21页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第21-22页 |
| ·Western blot分析 | 第22页 |
| ·结果与分析 | 第22-32页 |
| ·表达质粒的构建与鉴定 | 第22-23页 |
| ·粪产碱杆菌青霉素G酰化酶表达条件的优化 | 第23-28页 |
| ·pH对表达的影响 | 第23-24页 |
| ·磷酸盐及微量金属元素对表达的影响 | 第24页 |
| ·MgSO_4对表达的影响 | 第24-25页 |
| ·温度对表达的影响 | 第25页 |
| ·碳源和氮源对表达的影响 | 第25-27页 |
| ·正交设计优化表达条件 | 第27-28页 |
| ·重组菌的质粒稳定性 | 第28-29页 |
| ·粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的分离纯化 | 第29-30页 |
| ·Western blot分析粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的表达 | 第30-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-36页 |
| 发表文章及专利 | 第36-37页 |
| 致谢 | 第37页 |