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基于自身抗体谱检测型免疫芯片的制作研究与临床初步应用

中文摘要第1-13页
英文摘要第13-17页
第一章 绪论第17-36页
   ·蛋白质芯片技术的发展与现状第17-21页
     ·有关蛋白质芯片的最初研究成果第17-19页
     ·基于水凝胶系统的三维蛋白质芯片第19-20页
     ·用于蛋白质组研究的多功能蛋白质芯片分析系统第20-21页
   ·蛋白质分子的固相化技术第21-25页
     ·物理吸附第21-22页
     ·化学吸附第22-23页
     ·形貌表征用于吸附蛋白分子的应用评价第23-24页
     ·固相功能化免疫分子层的特点第24-25页
   ·蛋白质与抗体微阵列及其在生物医学研究中的应用第25-30页
     ·实验原理概述第26页
     ·蛋白质与抗体探针的制备第26-27页
     ·阵列探针的固定与芯片制作第27页
     ·实验信号的采集与检测第27-28页
     ·在生物医学研究中的应用第28-29页
     ·存在的不足与发展前景第29-30页
   ·本论文的主要研究内容第30-36页
第二章 有关自身抗体的检测方法及实验靶抗原的分离纯化第36-55页
   ·传统的自身抗体检测技术第36-38页
   ·生物大分子抗原的分离纯化理论第38-44页
     ·能用作纯化依据的蛋白质性质第38-40页
     ·抗原分子纯化的一般策略第40-42页
     ·分离纯化方法的类型第42-44页
   ·相关阵列靶抗原探针的提取制备第44-49页
     ·材料与方法第44-45页
     ·相关自身靶抗原的分离纯化第45-49页
       ·甲状腺球蛋白与甲状腺过氧化物酶(TG与TPO)第45页
       ·肝特异性细胞膜脂蛋白(LSP)第45-46页
       ·类风湿因子靶抗原(AgRIgG)第46页
       ·可提取的核抗原(ENA)第46-47页
       ·精子膜抗原(SmAg)第47页
       ·子宫内膜抗原(EmAg)第47页
       ·卵巢抗原(O-Ag)第47-48页
       ·肌红蛋白(Mb)第48页
       ·重组多肽(rhCaM与rhCyP A)第48页
       ·组蛋白抗原(Histone)第48页
       ·心磷脂抗原(CL)第48页
       ·质粒DNA的制备与纯化第48-49页
   ·分离纯化组分的鉴定第49-51页
     ·蛋白质纯化组分的聚丙烯酰胺凝胶电泳第49-50页
     ·心磷脂薄层层析鉴定结果第50-51页
     ·质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳第51页
   ·本章小结第51-55页
第三章 玻璃固相基片的表面修饰及用于蛋白质分子的固定研究第55-76页
   ·材料与方法第56-58页
     ·主要试剂第56页
     ·实验器材第56页
     ·实验仪器第56页
     ·实验方法第56-58页
       ·第二抗体探针分子的荧光标记第56-57页
       ·载玻片的清洁预处理第57页
       ·固相载玻片的氨基化与戊二醛修饰第57页
       ·氧化型琼脂糖凝胶基片的制作第57页
       ·蛋白质分子在基片表面的固定第57-58页
       ·固相酶与底物分子间的相互作用第58页
       ·固相人IgG与荧光抗体探针分子杂交第58页
       ·原子力显微镜(AFM)表征第58页
   ·玻璃表面的修饰与AFM表征第58-66页
     ·玻片表面的氨基硅烷化与戊二醛修饰第59-62页
     ·玻片表面的多聚赖氨酸涂布与戊二醛修饰第62-63页
     ·琼脂糖凝胶的高碘酸钠氧化第63-66页
   ·三种不同pH条件下HRP分子的固定第66-70页
     ·初生态HRP分子与底物间的相互作用第66-68页
     ·氧化修饰的HRP与底物分子间的相互作用第68-70页
   ·人IgG分子固定于不同基片后的微阵列检测结果第70-72页
   ·本章小结第72-76页
第四章 琼脂糖凝胶基片用于蛋白质与抗原分子微阵列的制作研究与表征第76-95页
   ·材料与方法第76-79页
     ·主要试剂第76-77页
     ·阵列靶抗原分子探针第77页
     ·待测血清第77页
     ·实验器材与仪器第77页
     ·实验方法第77-79页
       ·载玻片的清洁预处理第77页
       ·固相琼脂糖凝胶表面的制作与表面修饰第77-78页
       ·琼脂糖凝胶表面用于蛋白质分子的固定第78页
       ·蛋白质与抗原分子微阵列的设计与制作第78页
       ·生物分子的相互作用与信号检测第78页
       ·原子力显微镜(AFM)表征第78-79页
       ·X射线光电子能谱(XPS)分析第79页
   ·固定效率和灵敏度第79-81页
     ·琼脂糖凝胶表面对HRP分子的固定效率第79-80页
     ·固相HRP与人IgG分子检测的灵敏度第80-81页
   ·蛋白质与抗原分子微阵列的稳定性第81-83页
   ·AFM表面表征第83-88页
   ·XPS分析结果第88-92页
   ·本章小结第92-95页
第五章 基于氧化型琼脂糖凝胶基片结合酶免疫反应的阵列芯片检测技术第95-116页
   ·有关抗原抗体反应的基本理论第96-100页
     ·抗原抗体的胶体特性与结合力第96-97页
     ·抗原抗体反应的特点第97-98页
     ·抗原抗体反应的影响因素第98-99页
     ·固相酶免疫反应的原理与类型第99-100页
   ·材料与方法第100-102页
     ·主要试剂第100-101页
     ·抗原分子制品第101页
     ·检测血清第101页
     ·固相载玻片的预处理第101页
     ·氧化型琼脂糖凝胶膜的制备与GA修饰第101页
     ·基片表面抗原与抗体分子的固定第101页
     ·蛋白质与抗原分子微阵列的设计与制作第101页
     ·阵列芯片的酶免疫检测第101-102页
   ·基于阵列芯片的酶免疫检测方法第102-107页
     ·直接免疫检测模式第103-104页
     ·双抗体夹心免疫检测模式第104-105页
     ·间接免疫检测模式第105-107页
     ·三种类别免疫球蛋白自身抗体的检测第107页
   ·临床疾病自身抗体谱的阵列芯片检测第107-111页
     ·自身抗体谱临床疾病检测结果第108-110页
     ·阵列芯片与ELISA测定结果比较第110-111页
   ·有关自身抗体检测的质量控制和应用评价第111-113页
     ·实验质量控制的必要性第111页
     ·两级测定与实验结果的进一步确认第111-112页
     ·实验报告与结果解释第112页
     ·结合临床资料并进行统计分析第112-113页
   ·本章小结第113-116页
第六章 胶体金蛋白标记物的制备、电泳特性及其在阵列芯片检测中的应用第116-137页
   ·材料与方法第116-120页
     ·主要试剂第117页
     ·抗原与抗体制品第117页
     ·Cy3与GAHIgG的偶联结合第117页
     ·待测血清第117页
     ·不同粒径胶体金纳米粒子的制备与表征第117-118页
     ·胶体金与抗体探针及其他蛋白质分子的标记第118页
     ·胶体金及其蛋白标记物的电泳分离第118-119页
     ·水动力学直径与zeta电位分析第119页
     ·琼脂糖凝胶基片的制备第119页
     ·微阵列生物分子的固定第119页
     ·阵列芯片的免疫检测与信号采集第119-120页
   ·胶体金及其蛋白标记物的制备与表征第120-123页
     ·不同粒径胶体金纳米粒子的制备与TEM表征第120-121页
     ·胶体金蛋白标记物的制备及其影响因素第121-123页
   ·胶体金及其蛋白标记物在电场中的泳动行为第123-129页
     ·琼脂糖凝胶电泳分离第123-125页
     ·等电聚焦电泳分离第125-126页
     ·毛细管电泳分离第126-128页
     ·理论分析第128-129页
   ·胶体金标记探针在阵列芯片检测中的应用第129-132页
     ·胶体金与银显影示踪染色原理第130页
     ·基于IGSS的阵列芯片测试敏感度第130-132页
   ·基于IGSS与EIA自身抗体阵列芯片测定结果比较第132-134页
     ·IGSS法与EIA法测定结果重复性第132-133页
     ·HCV感染者自身抗体的检测与相关分析第133-134页
   ·本章小结第134-137页
第七章 结束语第137-141页
   ·论文主要结果与创新点第137-138页
   ·有关阵列芯片用于自身抗体谱检测的发展方向第138-139页
   ·进一步研究设想第139-141页
附件A 攻读博士学位期间发表的论文第141-144页
附件B 个人简历第144-145页
致谢第145页

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